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我国发酵乳酸提取方法的现状及新技术
乳酸发酵液中分离和纯化乳酸的技术,对产品的质量和产量有直接影响.当前,我国企业大多采用酸解的工艺来提取乳酸,产量并不高,但劳动强度很大,对环境也会造成污染.因此应当对发酵乳酸提取的技术进行必要的研究,使得产品的产量和质量都得到提高,进而推动整个乳酸行业的快速发展.本文主要从我国当前普遍采用的发酵乳酸提取工艺、溶剂萃取法的研究和膜技术的研究这三方面做了具体阐述.
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抑制IGF-1R可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖
Ⅰ型胰岛素样生长因子受体(type Ⅰ insulin-like growth factor receptor,IGF-IR)是细胞生长分化的重要调节因子,可介导丝裂信号、防御各种凋亡损伤,并为一些细胞类型转化所必需.IGF-1R在多种肿瘤包括神经母细胞瘤中被发现异常表达,并被认为是潜在的肿瘤治疗靶点.软琼脂克隆形成实验是体外检测细胞成瘤性的常规方法,可用于分离和纯化肿瘤细胞及抗肿瘤药物体外抑制肿瘤生长能力的评价,随着肿瘤干细胞研究的兴起,亦被用来检测具有干细胞性质的细胞.本实验拟构建非锚着依赖性细胞立体生长模型,使用IGF-1R抑制剂检测特异性抑制IGF-IR对细胞增殖和克隆形成的影响.
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硫酸铵反抽提法在纯化β内酰胺酶中的应用
硫酸铵价廉,不易导致蛋白质变性,常用于蛋白的分离和纯化.但硫酸铵抽提的分离纯化作用较弱,主要用于蛋白的浓缩.硫酸铵反抽提是根据在硫酸铵溶液中析出的蛋白质再次溶解有较高的选择性原理而建立的纯化方法.本研究采用配对设计对硫酸铵反抽提和抽提两法在纯化超广谱β内酰胺酶(ESBL)中的作用进行了比较,旨在为临床检验科室纯化ESBL提供简便易行的方法.
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人胰岛分离和纯化技术要点以及移植后主要问题
胰岛移植是胰岛素依赖型糖尿病的一种有效的治疗方法[1],分离胰岛的数量和质量决定着胰岛移植的成败.虽然胰岛的分离和纯化是在Ricordi等[2]所建立的胰岛分离方法的基础上发展起来的,并被认为是一种比较成熟的技术,但是目前真能很好掌握这项技术的胰岛移植中心为数不多,以至于埃德蒙顿胰岛移植方案并不能在大多数胰岛移植中心得到完美的重复[3-4].因此,进一步完善胰岛分离和纯化技术是每个胰岛中心需要不断探索的课题.
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颊黏膜中分化鳞状细胞癌角蛋白谱的分析
目的:研究口腔颊黏膜鳞状细胞癌角蛋白谱的特点.方法:颊黏膜中分化鳞状细胞癌活检标本,提取角蛋白,进行SDS-PAGE电泳和利用免疫印迹(Western-blot)杂交方法,研究颊黏膜中分化鳞状细胞癌中角蛋白谱的表达.结果:颊黏膜中分化鳞状细胞癌中出现了单层角蛋白上皮如CK18、19,而CK10表达缺失.结论:变异性表达的CK18、19以及不表达CK10,是颊黏膜中分化鳞状细胞癌的一个较为普遍的现象.
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舌体高分化鳞状细胞癌角蛋白谱的分析
目的:研究口腔舌体高分化鳞状细胞癌角蛋白谱的特点.方法:舌体高分化鳞状细胞癌及正常舌体组织活检标本,提取角蛋白,进行SDS-PAGE电泳和利用免疫印迹(Western-blot)杂交方法对比研究舌体高分化鳞状细胞癌及正常舌体组织中角蛋白谱的表达.结果:舌体高分化鳞状细胞癌中出现了单层上皮角蛋白如CK18、19.结论:舌体高分化鳞状细胞癌变异性表达的CK18、19和CK 10的不表达,是舌癌发生演变过程的结果,舌癌角蛋白谱的变化与肿瘤的变化有密切关系,可以作为研究肿瘤生物学特征的重要指标.
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回回蒜子的化学成分研究
目的 研究回回蒜(Rannunculus chinensis)子的化学成分.方法 利用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法对回回蒜子进行分离纯化,根据理化性质、波谱数据鉴定化合物的化学结构.结果 分离鉴定出10个单体化合物,分别为槲皮素( quercetin,1)、山奈酚(kaempferol,2)、木犀草素(luteolin,3)、槲皮苷( quercitrin,4)、原儿茶酸(protocatechuic acid,5)、没食子酸( gallic acid,6)、柔花酸( ellagic acid,7)、山奈酚-3-O-β-芸香糖苷(kaempferol-3-O-β-rutinoside,8)、β-谷甾醇(β-sitosterol,9)、7-酮香木鳖苷(ketologanin,10).结论 化合物10首次从该属植物中分离得到,化合物1、2、3、4、5、6、7和8首次从回回蒜子中分离得到.
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固相萃取法在中药分析中的应用
固相萃取法(Solid Phase Extraction, SPE)是复杂样品前处理领域中广泛应用的一种实验技术,它能快速简便有效地除去各类样品中的杂质组分并浓缩待测组分,在药物、环保、食品等方面得到了广泛的应用.在中药分析中,由于供试液共存成分相当复杂,待测组分分离纯化不佳将严重制约分析的专属性和重现性.另一方面,现代仪器快速发展,其灵敏度越高,对供试液纯度要求也越高,于是,样品前处理成为中药分析的一个瓶颈环节.固相萃取法以传统的液-液萃取法无法比拟的优势,在中药样品的分离和纯化上开始发挥出越来越重要的作用.种类丰富的键合相硅胶则成为固相萃取的新一代主力军.反相键合相硅胶有C1、C2、C4、C6、C8、C18、环己烷基、苯基、二苯基等;正相键合相硅胶有氨基、伯氨基、仲氨基、腈基、二醇基等;离子交换的有季氨基、苯磺酸基、丙磺酸基等.此外还有苯乙烯-二乙烯苯聚合物等新型固定相.
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中药多糖的免疫调节作用研究进展
多糖是由醛糖或酮糖通过甙链连接在一起的多聚物,是一类广泛存在于高等植物、真菌、藻类、细菌和动物细胞膜上的生物大分子,是构成生命的四大基本物质之一.多糖不但是生物体的主要结构成分,还具有复杂的生物活性和功能.随着传统中药的多糖成分被分离和纯化,对他们的化学结构、理化性质、药理功能以及作用机制进行了多方面的研究.其中中药多糖的免疫调节作用作为多糖研究的一个热点,近年来取得了很大的进展.
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香加皮多糖分离提取及含量测定
目的 分离、提取及初步分析测定香加皮中的多糖.方法 取粉碎的香加皮粉末,置于索氏抽提器中,依次用石油醚(60~90℃)、乙醚、80%乙醇各500ml回流提取流6h,残渣于水浴上挥干溶剂后,再用水600ml回流提取.减压浓缩得相对较纯的多糖.用硫酸苯酚比色法测定香加皮中多糖的含量.结果 香加皮多糖经紫外吸收光谱扫描具有多糖特征吸收峰,多糖产率可达5.38%,初步分析香加皮多糖由D-甘露糖和乳糖等单糖组成.结论 从香加皮中可提取和分离多糖,其多糖含量为5.38%.
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永川豆豉多糖的分离纯化及初步分析
豆豉是由豆科植物大豆的成熟种子经发酵加工而成的制品,是我国民间广为食用的一种传统食品.作为药用早有记载,历年中国药典也将其收录作为祛风治疗感冒之用[1].近年来,日本人对中国豆豉的研究发现[2],豆豉不仅能减缓小肠对糖份的吸收,而且还能防止食后血糖迅速上升[3].目前国内有关豆豉成分防治糖尿病的研究工作尚未见报道.根据相关文献资料[4,5],可能豆豉中的多糖类成分起到了降血糖的作用.笔者就豆豉中的多糖类成分,探索其分离纯化及初级结构分析的方法,并对其含量、理化性质进行研究,为其进一步药理研究打下基础.
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内皮素与心脑血管疾病
内皮素(endothelin,ET)早在1988年由日本学者Yanagisawa等[1]从培养的猪主动脉内皮细胞上清液中分离和纯化而得到,故被称为猪内皮素(porcineendothelin).随着研究的逐渐深入,人们发现人主动脉内皮细胞分泌的内皮素与猪内皮素的结构完全一致,遂又将其称之为猪或人内皮素[2].ET具有促进细胞增殖和调节体内有关活性物质释放等一系列复杂的生物学特性[3].ET作为一种生长因子、激素调节肽、神经肽,在心脑血管类疾病的发病过程中,有着重要的病理生理作用.本文就ET与心脑血管类疾病的相关性研究作一综述.
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中药注射液的共同不良反应及避免措施
目前,中药注射液缺乏统一的质量标准,生产技术参差不齐,给质量控制和生产过程的管理带来很大的困难.由于中药注射液成分复杂,不能够确定真正的有效成分,给分离和纯化带来一定的盲目性,同时由于对中药不良反应的重视程度不够,因此其不良反应发生率逐年呈上升趋势,但中药制剂的临床疗效又是不可质疑的[1].对中药注射液的使用应该制定新的标准,应用中药尽量选择口服给药,在必要的情况下选择静脉给药.
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中药注射液的共同不良反应及避免措施
目前,中药注射液缺乏统一的质量标准,生产技术参差不齐,给质量控制和生产过程的管理带来很大的困难.由于中药注射液成分复杂,不能够确定真正的有效成分,给分离和纯化带来一定的盲目性,同时由于对中药不良反应的重视程度不够,因此其不良反应发生率逐年呈上升趋势,但中药制剂的临床疗效又是不可质疑的[1].对中药注射液的使用应该制定新的标准,应用中药尽量选择口服给药,在必要的情况下选择静脉给药.
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人瘦素分离纯化的实验研究
背景:瘦素是脂肪组织产生的一种激素,具有广泛的生理作用,也是近年能量代谢研究的热点之一,所用瘦素主要是大肠杆菌的表达产物,后者以不溶解的包含体形式存在,需要通过烦琐的复性过程才能获得具有生物学活性的人瘦素.目的:为获得天然溶解形式的人瘦素,探索其非亲和层析纯化条件,为进一步可能的产业化提供依据.设计:实验观察.单位:一所医学院的生化教研室分子生物学实验室.材料:选择强阴离子交换剂(Sepharose Q)和疏水介质(Phenyl Sepharose 6)在条件下进行层析的方法,以尽可能除去样品中的杂质.方法:将培养获得的上清液在pH 7.5的条件下首先经过Q柱柱层析纯化,收集目的蛋白;随后在高盐[mol/L(NH4)2SO4]状态下通过疏水层析进一步纯化.主要观察指标:经凝胶扫描分析,纯化前的培养上清液人瘦素纯度为42.3%,Q柱柱层析纯化后纯度达到89.6%,疏水层析进一步纯化后纯度达到96.2%.结果:纯化产物在SDS-PAGE上呈现单一条带.经凝胶扫描分析,纯化前的培养上清液人瘦素纯度为42.3%,Q柱柱层析纯化后纯度达到89.6%,疏水层析进一步纯化后纯度达到96.2%.结论:通过强阳离子交换层析和疏水层析的合并应用,可将毕赤酵母表达系统表达的人瘦素进行有效纯化,纯度可达镍柱亲和层析的纯化结果,为进一步可能的产业化生产人瘦素提供了可靠依据和方法,为围绕瘦素的相关领域研究奠定了实验学基础.
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应用两层法保存和运输成人胰腺的实验
目的:提高胰岛的分离纯化率是胰岛移植成功的关键,其中胰腺的冷缺血时间是主要影响因素之一.探讨并建立供体胰腺长时间(>8 h)保存和运送方法.方法:实验于2006-06/2007-02在解放军南京军区福州总医院全军器官移植中心完成,得到医院伦理道德委员会批准.①实验方法:应用两层保存法(University of Wisconsin 液/全氟化碳),将25例成人胰腺置于广口瓶中,充氧并盖紧,放入冰筒中送达实验室,按冷缺血时间的长短,分为>8 h组(n=17)和≤8 h组(n=8).参照改良后Ricordi方法分离胰岛,将胰腺切片置入消化罐中循环消化.应用连续密度梯度离心法在COBE 2991离心机中纯化胰岛组织,并用双硫腙、吖啶橙、碘化丙啶染色.②实验评估:分别进行纯化后胰岛计数、纯度和活率检测,同时检测胰岛对高、低糖的反应性.结果:①冷缺血时间>8 h组胰腺的冷缺血时间显著长于≤8 h组(P< 0.01).②经双硫腙染色后,两组分离纯化的总胰岛当量、胰岛收获量差异无显著性意义(P>0.05);两组胰岛纯度和活率差异也无显著性意义(P>0.05).③经低糖、高糖分别刺激后,两组胰岛素释放量及其刺激指数差异均无显著性意义(P>0.05).结论:应用两层保存法保存和运送供体胰腺,可明显延长保存时间,但对胰岛的分离纯化数量和功能没有明显影响,为胰岛移植远距离保存和运送腺体提供了有利条件.
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内皮素与肝脏疾病
内皮素(endothelin ,ET)是1988年日本学者Yanagisawa等从培养的猪主动脉内皮细胞上清中分离和纯化的一种由21个氨基酸组成的内皮衍生的血管收缩因子,是迄今发现的强的缩血管活性肽,参与了机体多种疾病的病理生理过程.
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保证输血与血液制品安全性的综合措施
自从第二次世界大战以来,由于战争规模的扩大加速了血站与血库的发展,且全血逐渐被分离和纯化的各种血液成分所取代,其中主要的进步是将引起严重输血反应的大部分白细胞成分从全血中去除掉,这不但可以明显减少由输血引起的不良免疫反应,而且还可减少由这种有形成分携带的许多致病因子.但去除这些有形成分以后,供体血液中仍然含有许多对受体可造成危害的成分,包括同种异型抗原、同种异型抗体以及各种潜在的感染性因子.此外,在血液收集和加工处理的过程中,血液或血液制品同各种人工材料接触,这种接触除了可造成交叉污染之外,还可产生某些化学物质,并在储存的过程中促使一些血液细胞产生新的生物学活性因子,这些因子对受体都可能造成非预期的不良损害.针对上述各种复杂因素,为保证输血与血液制品的安全性,必须采取一系列的综合措施.本文将只针对血液与血液制品中的主要感染性因子及其制定防范措施所面对的一些实际问题进行讨论.
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白术提高机体免疫功能的研究进展
本品为菊科植物白术 Atractylodes macrocephala Koiddz.的干燥根茎,主产于浙江、湖北、湖南等地,性苦,甘,温,归脾、胃经[1]。白术的化学成分较为复杂,据报道[2],现已知主要含有挥发油、内酯类、多糖类及其他成分。挥发油在白术根茎中约含1.4%,其主要成分为苍术酮( atratylon)、苍术醇等;内酯类成分有白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅳ等;多糖类含有白术多糖 PM、甘露聚糖AM-3等。池玉梅等[3]对白术中药材进行提取分离和纯化,得到2个多糖 PSAM -1和 PSAM -2,均为杂多糖,平均分子量分别为1.36×105、1.04×105,PSAM-1由半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖组成,PSAM-2由木糖、阿拉伯糖、半乳糖组成。现代医学发现白术药理作用广泛,其中具有增强机体免疫功能的作用,现具体综述如下。
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石莼多糖的提取分离及其降血脂作用的初步研究
药材石莼为石莼科 Ulvaceae绿藻石莼(Ulva lactuca L.)或孔石莼(UlvaPertusKjellm)的干燥叶体[1].始载于<本草拾遗>,曰:"石莼生南海,附石而生,似紫菜,色青",主"味甘无毒,入水,利小便";<本草纲目>中记载谓:"出闽、浙者,大叶似菜",故也名海青菜,有软坚散结、清热解毒、利水降脂等功效.药理研究表明,石莼藻体或多糖具有降胆固醇、抗病毒、抗凝血等作用[2-3].本文拟对浙江舟山海域产石莼中多糖进行提取、分离和纯化,并就其降血脂活性进行检测.