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干扰素序贯或联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效的基因诊断指标
我们采用PCR-微流芯片技术检测HBV基因型、HBVYMDD、HBV DNA含量来判断抗病毒的疗效,报道如下.
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多重聚合酶链反应-微流芯片检测人血小板抗原系统基因型方法的建立与应用
目的 建立人血小板抗原(HPA)-2、4、5系统基因型的检测方法.方法 用多重聚合酶链反应和微流芯片检测方法,通过设计9条特异性引物、优化反应体系和反应条件,在一个体系中同时扩增HPA-2、4、5系统特异性的目的基因片段,利用微流芯片快速检测HPA-2、4、5系统基因型;并把分型结果与采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)获得的结果进行比较.结果 对35名健康单采血小板者进行HPA-2、4、5系统分型的结果为:33名为2a/2a型,2名为2a/2b型;34名为4a/4a型,1名为4a/4b型;29名为5a/5a型,6名为5a/5b型.未发现2b/2b、4b/4b及5b/5b纯合子个体.该结果与PCR-SSP方法获得的结果完全一致.结论 该方法可快速、准确地用于血小板血型抗原基因分型,尤其适合于大样本检测.
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慢性乙肝不同基因型与拉米夫定耐药关系的探讨
目的 探讨连云港市慢性乙肝基因型分布及其与拉米夫定的耐药关系,以利于临床医生针对不同基因型的患者采取不同的治疗方法,使患者可以用很少的投入得到更好的治疗.方法 对63例高HBV-DNA的慢性乙型肝炎患者作微流芯片基因型检测,并对其进行拉米夫定治疗48周后作YMDD检测.结果 基因分型为B型12例,C型45例,B+C混合型4例,未分型2例;其中B型YMDD检测阳性1例,C型12例,B+C混合型及未分型1例.结论 我市HBV基因型以C型为主,B型次之.C型拉米夫定耐药水平显著高于B型.
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微流芯片在出入境人群中对HBV HCV HIV联合检测的研究
目的 探讨在出入境人群中应用微流芯片技术联合检测HBV、HCV、HIV的模式及可行性.方法 收集经两种ELISA试验验证的江西口岸出入境体检人员HBV、HCV、HIV230份血液标本,提取核酸后进行扩增,采用微流芯片进行HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA检测,用芯片所带的内对照体系监控试验的有效性.结果 206份HBV、226份HCV抗体和228份HIV抗体阴性标本经微流芯片检测DNA/RNA,阴性符合率分别为99％、100％、100％；24份HBV、4份HCV抗体、2份HIV抗体阳性标本经微流芯片检测DNA/RNA,阳性符合率均为100％；206份江西口岸出入境体检人员HBV阴性标本中检出2份HBV DNA(+),2份标本两对半结果为抗- HBe(+)、抗- HBc(+),HBV DNA检出率为0.97％.结论 本次建立的微流芯片法检测结果准确可靠,可用于出入境人员乙肝、丙肝、艾滋病三种传染病的联合检测.
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应用电化学测菌法检测变形链球菌效果的评价研究
目的 应用基于ITO叉指电极微流芯片的电化学测菌法,探讨该方法检测变形链球菌的可行性.方法 利用基于ITO叉指电极微流芯片的电化学测菌法检测变形链球菌,建立特定频率下细菌浓度与系统电阻抗值之间的函数关系,依据上述函数关系和测得的电化学阻抗值,分析待检样品内变形链球菌的浓度.结果 在1.2KHz固定频率下、变形链球菌浓度为104～109cells/ml时,所测细菌浓度的对数与系统电阻抗值呈良好的线性关系(Rrro2=0.995)；从进样到获得稳定阻抗数值的时间为6分钟；进样速度采用1ml/h时电化学测菌法的灵敏度高.结论 基于ITO叉指电极微流芯片的电化学测菌法,可为变形链球菌的快速检测提供新的途径.
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PCR微流芯片与基因芯片、基因测序在HBV基因型、病毒变异上应用比较
目的 对PCR微流芯片与基因芯片、基因测序在HBV基因型、病毒变异上应用进行比较.方法 分别采用PCR-微流芯片、基因芯片法对15例临床考虑拉米呋定耐药的患者血清进行HBV多点变异检测,从中随机抽取8例患者标本采用PCR-微流芯片、基因测序法进行HBV基因型、HBVYMDD检测.结果 基因芯片法与PCR-微流芯片检测HBV多点变异9/15三项完全一致,3/15两项一致;8例患者双份标本两种方法检测HBV基因型结果完全一致均为HBV C型;基因测序法8例患者中1例HBVYMDD阳性,PCR微流芯片法8例患者中检出2例HBVYMDD.结论 PCR-微流芯片法与基因芯片法、基因测序法有较好的一致性,适用于临床和流行病学调查研究.
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微流芯片检测流感病毒多重逆转录聚合酶链反应产物的实验研究
[目的]建立应用微流芯片检测甲1型、甲3型、乙型流感病毒多重逆转录聚合酶链反应(mRT-PCR)产物的方法,在mRT-PCR扩增核酸的基础上自动化灵敏的定量检测扩增产物,快速检测甲亚型、乙型流感病毒,帮助临床快速诊断和鉴别诊断其他呼吸道病毒感染,以及明确流感病毒在人群中感染、流行情况.[方法] 采用经MDCK细胞分离培养的甲1型、甲3型、乙型流感病毒毒株病毒液,使用3组特异引物经mRT-PCR扩增核酸,扩增产物分别采用毛细管电泳技术经Caliper1000微流芯片分析仪自动化检测和经2%琼脂糖凝胶电泳法检测.[结果] 设计三组引物对相应甲1型、甲3型、乙型流感病毒靶基因的mRT-PCR扩增产物片段分别为430bp、210bp、391bp,本实验mRT-PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳,与Marker比照,DNA条带基本在此位点附近;产物采用毛细管电泳法经Caliper1000微流芯片分析仪后,分别于413bp、203bp、379bp处出现陡峭的峰,如图所示.[结论] 应用微流芯片采用毛细管电泳法可对流感病毒mRT-PCR产物进行定位及相对定量,有助于快速诊断流感病毒感染,有助于对流感的监测.
关键词： 微流芯片 多重逆转录聚合酶链反应 流感病毒 -
微流芯片在乙型肝炎病毒基因分型检测中的应用
乙型肝炎病毒(HBV)基因高度变异,根据全序列差异可将其分为A～H 8个基因型.HbV基因型呈一定的地域性分布,人类感染HBV后的疾病谱、肝脏病变程度以及治疗效应与HBV基因型存在一定的相关性[1,2].本文应用Caliper-1000微流芯片分析仪检测762例慢性乙型肝炎患者的HBV基因型.
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微流芯片检测HBV前C区nt1896/BCP区nt1762基因突变的临床意义
目的探讨HBV前C区nt1896/BCPnt1762基因突变的临床意义.方法在418例血清HBeAg阴性/抗-HBe阳性的慢性乙型肝炎患者,采用微流基因芯片检测HBV前C区nt1896/BCPnt1762基因突变.同时观察血清ALT患者、HBV DNA水平和临床表现.结果nt1896变异195例(46.7%),1762变异192例(45.9%),ALT＞正常上限值198例(47.4%),HBV DNA＞1×105copiel/ml150例(35.8%),乏力,纳差,肝区胀痛213例(50.9%).结论HBV前C区nt1896/BCP1762基因突变与HBeAg阴性患者ALT异常,HBV DNA升高及其临床表现具有相关性.
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乙型肝炎病毒前核心区及基本核心启动子变异的检测及其对患者疾病谱的影响
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前核心区(前C区,nt1896)及基本核心启动子(BCP,nt1762/1764)变异在慢性HBV感染者疾病谱的分布及对患者疾病谱的影响.方法416例血清HBsAg阳性、HBVDNA定量大于1.0×104拷贝/毫升的患者,采用微流基因芯片检测HBV前C区及BCP变异.结果416例HBV感染者中302例为HBeAg(-)患者,其中248例(82.12%)有前C区或BCP变异,41.06%为前C区变异,31.12%BCP变异,2种同时变异为9.94%.HBeAg(-)的慢性乙型肝炎和肝硬化患者前C区变异分别为64.72%和83.33%(x2=0.89,P＞0.05),均大于HBeAg(-)无症状携带者的28.47%(x2=54.20,P＜0.01;x2=5.29,P＜0.05);而HBeAg(-)无症状携带者BCP变异达77.19%,大于HBeAg(-)慢性乙型肝炎和肝硬化患者(x2=69.73,P＜0.01;x2=10.58,P＜0.01).而在114例HBeAg(+)患者中28.95%有前C区或BCP变异.结论前C区或BCP变异在慢性HBV感染者疾病谱的分布不同,在HBeAg(-)/HBV DNA(+)与HBeAg(+)/HBV DNA(+)患者变异率差异显著.HBV前C区可能是该病变反复及加重的一个重要原因,但BCP变异临床意义不明确.
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连云港地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型的研究
[目的]了解连云港地区慢性乙型肝炎患者HBV 基因型特点及其临床意义.[方法]用PCR结合微流芯片技术对2003 年7 月至2005 年7 月门诊及病房收治的慢性乙型肝炎患者感染的HBV 进行基因分型,并与其临床生化结果、病毒定量进行相关性分析.[结果]乙肝病毒基因分型为B 型12例(19.05%),C型45 例(71.43%),B+C混合型4例(6.35%),未定型2例(3.17%);其中年龄大于35岁的7例B基因型和21例C基因型的谷丙转氨酶(ALT)水平分别为(174.0±124.7)IU/L 和(247.8±212.6)IU/L(P＜0.05);HBV-DNA病毒载量分别为(5.0±2.1)lg.copies/ml和(6.4±2.71) lg.copies/ml,两项指标经t检验差异有统计学意义(P＜0.05);年龄在18～34岁的B型和C型患者ALT水平、HBV-DNA病毒载量和HBeAg阳性率无统计学差异(P＞0.05).[结论]连云港地区慢性乙型肝炎患者基因型有B 型、C型、B+C混合型和未定型,但以C 型为主,B型次之.发现在年龄大于35岁的慢性乙型肝炎患者中,感染C基因型的ALT水平、HBV 病毒载量显著高于B基因型患者(P＜0.05),提示C基因型HBV感染致肝脏损害较重.
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PCR微流芯片技术检测HBV基因分型
目的:探讨PCR微流芯片技术检测HBV基因分型的临床意义以及沈阳地区慢性HBV感染者基因型的分布.方法:应用PCR微流芯片技术对55例慢性HBV感染者血清进行HBV基因分型,HBVDNA定量检测采用FQ-PCR方法.结果:55例慢性HBV感染者中,C型38例(69.0%),B型14例(25.5%),3例(5.5%)未检出基因型.B型患者HBV病毒载量为8.43±2.95、C型患者HBV病毒载量为9.14 4±3.48,二者比较差异不显著(P＞0.05).B、C型患者的发病年龄无差异(P＞0.05).结论:沈阳地区慢性HBV感染者基因型分布以C型为主.B型和C型患者的发病年龄和病毒复制水平无差异.PCR微流芯片技术灵敏、特异,结果客观,简便易行,可用于临床分型诊断和流行病学调查.
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PCR-微流芯片法检测HBV基因型及其临床应用
根据HBV全基因序列异质性≥8%或S基因序列异质性≥4%,可将HBV分为A～H8种基因型[1,2].文献报道基因型存在一定的地理区域分布,并可能与感染途径、感染谱、疾病的进展有一定的相关性[3～6].我们采用PCR-微流芯片法对96例乙型肝炎患者进行HBV基因型检测,并与病毒指标、肝纤维化、肝功能等指标进行相关性分析,报道如下.
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浙江温州地区1020例乙型肝炎患者HBV基因分型研究
目的:了解浙江温州地区乙肝病毒基因型分布,初步评价微流芯片分析仪在乙肝病毒基因分型中的应用特点.方法:用HBV基因型特异引物经聚合酶链反应扩增温州地区1 020例慢性乙型肝炎患者血清HBV,其扩增产物应用微流芯片检测.结果:该地区1 020例患者中966例有基因分型结果,其中B型20.49%(198/966)、C型66.46%(642/966),B、C混合型4.87%(47/966),C、B混合型6.21%(60/966),D型1.97%(19/966).结论:浙江温州地区乙型肝炎病毒基因型分布具有北方流行特点,微流芯片在同类检测方法中具有灵敏、准确、快速优势.
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应用电化学测菌法检测变形链球菌的初步探讨
目的:探讨应用电化学测菌法检测变形链球菌的可行性.方法:利用本课题组前期建立的电化学测菌法检测变形链球菌,记录检测参数,并将电化学测菌法的检测结果与细菌培养结果进行比较.结果:①微流芯片样本通道内层流形成时间为(3.17±0.16)min,从进样到获得稳定电阻抗数据的时间为(10.20±0.16)min.②当变形链球菌浓度为104～109 cells/mL时,细菌浓度C的对数与系统阻抗值Z呈良好的线性关系(R2=0.98).③与细菌培养的检测结果相比,电化学测菌法获得的细菌数多,差异有统计学意义(P＜0.05).④变形链球菌浓度为105 cells/mL时,电化学测菌法检测值与细菌培养法检测值之间的线性函数关系式为:y=0.94x+0.32E4(R2＝0.95),两种方法的检测值高度正相关(P=0.001＜0.01).结论:电化学测菌法能为变形链球菌的快速检测提供新的思路.
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PCR-微流芯片在血液HBV DNA HCV/HIV RNA筛查中的初步应用
目的 探讨在血液筛查中应用PCR-微流芯片技术检测献血者HBV DNA,HCV/HIV RNA的模式及可行性.方法在常规ELISA初、复检全项测定合格基础上,将献血者的血清按5人份×200μL进行汇集,用大容量磁珠法提取样本核酸,PCR-微流芯片检测技术进行扩增和检测.将国家标准质控血清进行系列稀释考评方法的灵敏度和重复性.结果 342份 (69个汇集池) 无偿献血标本中有3份HBsAg(-)HBVDNA(+),HBV DNA阳性率为0.89%,其中1份标本两对半结果全阴性,2份标本抗-HBs(+)及抗-HBc(+).PCR-微流芯片法检测HBV DNA、HCV RNA及HIV RNA的95%的灵敏度分别为11.5 IU/mL、167.7拷贝/mL和57.9 IU/mL结论 PCR-微流芯片法具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好特点.可应用于血液HBV DNA HCV/HIV RNA的筛查工作,以进一步提高输血的安全性.
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竞争PCR-微流芯片法检测血清HBV-DNA含量
目的 评价微流芯片法检测乙型肝炎病毒(HBV)基因的竞争PCR扩增产物含量的准确性.方法 通过竞争PCR-微流芯片法的重复性试验、稀释试验及与竞争PCR-微孔板杂交法、荧光PCR法的比较,判断HBV-DNA检测的准确性.结果 竞争PCR-微流芯片法重复性、稀释试验的线性相关性较好;检测线性范围高于竞争PCR-微孔板杂交法,竞争PCR内对照的含量对检测结果有一定影响;与荧光PCR法检测有较好的一致性.结论 竞争PCR-微流芯片法是临床检测HBV-DNA含量可行的一种方法.
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营养缺乏和碱性环境对粪肠球菌侵入人工微管系统的影响
目的:研究不同环境因素对粪肠球菌侵入人工微管系统能力的影响和微流芯片的适用性.方法:采用软光刻技术制作微流芯片,观察细菌在牛脑心浸出液(BHI)、PBS和pH 10的情况下在微流芯片中的生长情况,测定和比较细菌在相应微管内的大侵入深度.结果:粪肠球菌在营养缺乏和碱性环境下生长速度明显下降,侵入小管径微管的深度显著下降(P＜0.01).结论:营养缺乏和碱性环境可显著降低粪肠球菌侵入微管系统的能力.微流芯片具有高通量、平行对比和可观察性好等特点,有望为今后相关研究提供标准化的实验平台.
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微流芯片在口腔细菌定量检测中的初步应用
微流芯片定量测菌法是利用微加工技术在芯片上进行细菌定量检测的一种先进方法,关于口腔细菌学研究涉及的方法技术十分广泛,随着科技快速发展,微流芯片技术也引入到口腔细菌定量检测中,本文就该领域研究现状做一综述.
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微流芯片技术在耐药株结核杆菌检测中的应用
目的探讨微流芯片技术检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变的可行性.方法根据rpoB基因为常见的三种突变形式(531 TCGTTG,526 CACTAC,516 GACGTC)设计引物,用于微流芯片检测结核分枝杆菌利福平耐药性,同时与常规药敏试验和DNA测序结果进行比较.结果引物比例1∶5,杂交温度52℃,杂交时间10min为佳条件.在20株常规药敏试验为利福平敏感株中,微流芯片测出2株耐药株,并经DNA测序证实;而28株药敏试验为利福平耐药株中,1株微流芯片测定为敏感株,DNA测序证实为513位CAACTA突变.该法与常规药敏试验和DNA测序的总符合率分别为93.8%(45/48)和97.9%(47/48).结论微流芯片技术快速、灵敏、准确,可用于结核分枝杆菌利福平耐药性的快速检测.
