首页 > 文献资料
-
直接免疫荧光法与多重逆转录聚合酶链反应对呼吸道感染常见病毒的诊断价值
目的 探讨直接免疫荧光法(DFA)和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对呼吸道常见病毒人鼻病毒(HRV)感染患者分泌物的检测,判断其临床诊断价值.方法 选取2010年2月-2011年12月收集的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物210例,分别用DFA和RT-PCR进行检测,对两组测定方法的检测结果进行判定.结果 多重RT-PCR检出112份阳性标本,阳性率为53.33％,DFA检测出89份阳性标本,阳性率为42.38％,两组比较,差异有统计学意义(x2=27.623,P＜0.01).结论 DFA检测方法可以广泛适用于临床检测中；多重RTPCR检测方法的敏感性高,检测病毒的范围广,可以做亚型鉴定方法,适用于呼吸道病毒流行病学的调查研究.
关键词： 直接免疫荧光法 多重逆转录聚合酶链反应 呼吸道 人鼻病毒 -
用两种聚合酶链反应方法检测流感病毒
目的建立特异敏感的快速检测流感病毒的分子生物学方法.方法用多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应扩增甲1、甲3和乙型流感病毒的HA基因的HA1片段.根据扩增产物的大小检测流感病毒.结果以流感病毒的HA基因为模板设计的3对引物能特异性地扩增出942bp、1117bp和751bp的核酸片段,它们分别和甲1,甲3和乙型流感病毒有稳定对应关系.根据扩增产物的大小可以检测流感病毒.用这个方法能检测病毒浓度为0.1TCID\{50\}的样品.结论多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应是检测流感病毒的特异敏感的方法.
关键词： 流感病毒 血凝素基因 多重逆转录聚合酶链反应 半巢式多重聚合酶链反应 -
多重逆转录聚合酶链反应检测主要上呼吸道病毒
目的建立用多重逆转录聚合酶链反应(mRT-PCR)检测甲1型、甲3型、乙型流感病毒以及呼吸道合胞病毒(RSV)A型、B型等主要上呼吸道病毒的方法,以快速检测上呼吸道感染主要病毒及对甲型、甲亚型、乙型流感病毒在上海地区人群感染、流行情况调查.方法采用经MDCK细胞接种培养的甲3型、乙型流感病毒和Hep-2细胞接种培养的RSV A型、B型标准毒株病毒液,以及甲1型、甲3型、乙型流感病毒和RSV A型、B型混合毒株病毒液,使用5组引物,分别为 HA1-5a1和HAl-3a1(甲1型流感病毒)、HA3-5a1和HA3-3a1(甲3型流感病毒)、NP-5b1和NP-3b1(乙型流感病毒)、RSVAF和RSVAR(RSVA型)、RSVBF和RSVBR(RSVB型),经mRT-PCR,琼脂糖凝胶电泳,于紫外灯下观察上述病毒特异核苷酸条带.结果甲1型、甲3型、乙型流感病毒,RSVA型、B型分别在431,210,390,334,183bp处出现清晰的5条DNA条带.结论应用5组引物,mRT-PCR可用于快速检测临床上呼吸道感染标本中的流感病毒和RSV,并可对其进行分型,对上呼吸道病毒感染性疾病的诊断和流感的监测方面是非常重要的.
关键词： 多重逆转录聚合酶链反应 流感病毒 呼吸道合胞病毒 -
猪瘟和猪蓝耳病病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用
目的 建立猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)和猪蓝耳病病毒(Porcine respiratory and reproductive syndrome virus,PRRSV)多重RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用.方法 根据GenBank中登录的CSFV和PRRSV疫苗株基因组序列,分别设计针对CSFV和PRRSV的两对引物,建立多重RT-PCR检测方法,并进行敏感性及特异性验证.用建立的多重RT-PCR法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料,并与市售RT-PCR试剂盒的检测结果进行比较；检测病料的部分PCR产物测序后,与9株具有代表性的CSFV毒株和10株具有代表性的PRRSV毒株进行核苷酸序列同源性比对.结果 以CSFV和PRRSV混合引物扩增,分别可扩增出286和664 bp的特异性条带.建立的多重RT-PCR检测方法可检出100倍稀释的病毒RNA；该方法可检出CSFV、PRRSV及CSFV与PRRSV混合病毒,而猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastro-enteritis virus,TGEV)、猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)的检测结果均为阴性；该方法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料的结果与市售RT-PCR试剂盒比较,灵敏度达100％；选取的两份CSFV扩增片段与9株具有代表性的CSFV毒株的核苷酸序列同源性在92.3％ ～ 98.2％之间,扩增的PRRSV与10株具有代表性的PRRSV毒株的核苷酸序列同源性在94.1％～97.9％之间.结论 成功建立了CSFV和PRRSV多重RT-PCR检测方法,为猪瘟和猪蓝耳病的早期诊断及流行病学调查奠定了基础.
关键词： 猪瘟病毒 猪蓝耳病病毒 多重逆转录聚合酶链反应 -
微流芯片检测流感病毒多重逆转录聚合酶链反应产物的实验研究
[目的]建立应用微流芯片检测甲1型、甲3型、乙型流感病毒多重逆转录聚合酶链反应(mRT-PCR)产物的方法,在mRT-PCR扩增核酸的基础上自动化灵敏的定量检测扩增产物,快速检测甲亚型、乙型流感病毒,帮助临床快速诊断和鉴别诊断其他呼吸道病毒感染,以及明确流感病毒在人群中感染、流行情况.[方法] 采用经MDCK细胞分离培养的甲1型、甲3型、乙型流感病毒毒株病毒液,使用3组特异引物经mRT-PCR扩增核酸,扩增产物分别采用毛细管电泳技术经Caliper1000微流芯片分析仪自动化检测和经2%琼脂糖凝胶电泳法检测.[结果] 设计三组引物对相应甲1型、甲3型、乙型流感病毒靶基因的mRT-PCR扩增产物片段分别为430bp、210bp、391bp,本实验mRT-PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳,与Marker比照,DNA条带基本在此位点附近;产物采用毛细管电泳法经Caliper1000微流芯片分析仪后,分别于413bp、203bp、379bp处出现陡峭的峰,如图所示.[结论] 应用微流芯片采用毛细管电泳法可对流感病毒mRT-PCR产物进行定位及相对定量,有助于快速诊断流感病毒感染,有助于对流感的监测.
关键词： 微流芯片 多重逆转录聚合酶链反应 流感病毒 -
上海市儿童下呼吸道感染常见病毒诊断方法比较
目的 应用直接免疫荧光法(DFA)和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对呼吸道感染患儿鼻咽分泌物的常见病毒进行检测,比较2种方法的符合率并评估其临床应用价值.方法 选取急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物540例,分别用DFA和多重RT-PCR进行检测,分析其结果.结果 DFA检测阳性率为43.9%(237/540),多重RT-PCR检测阳性率为55.7% (301/540),多重RT-PCR阳性检出率显著高于DFA的阳性检出率(x(2)=29.093,P<0.01).DFA和多重RT-PCR同时阳性163例,DFA阳性而多重RT-PCR阴性74例,多重RT-PCR阳性而DFA阴性138例,DFA和多重RT-PCR同时阴性165例.DFA和多重RT-PCR同时为阳性的163例标本中,有15例标本两者检测结果不一致,符合率为91.0%.结论 DFA快速、简便、特异性及敏感性高,适用于临床检测.多重RT-PCR的敏感性高,检测病毒谱广,且可以做亚型鉴定,适用于呼吸道病毒流行病学的调查.
关键词： 呼吸道病毒感染 直接免疫荧光法 多重逆转录聚合酶链反应 儿童 -
流感病毒快速检测方法特异性和敏感性研究
目的 比较多重逆转录聚合酶链反应(mRT-PCR)和胶体金法检测流感病毒的敏感性和特异性.方法 采用mRT-PCR和胶体金法检测经细胞培养和红细胞凝集抑制试验(HI)鉴定为A/H1、A/H3、B型流感病毒的鼻咽拭标本78份,阴性鼻咽拭标本40份,并对已稀释成101～105病毒半数感染量(TCID50)/0.1 mL的3株H1、H3、B型流感病毒进行敏感性试验.结果 mRT-PCR对A型流感病毒的检测敏感性为44.8%,特异性为97.5%;对B型流感病毒检测敏感性为20.0%,特异性为100.0%.胶体金法对A型流感病毒检测敏感性为44.8%,特异性为100.0%;对B型流感病毒检测敏感性为5.0%,特异性为97.5%.对经20代内狗肾细胞(MDCK)分离培养阳性的4份A/H1、4份A/H3和3份B型流感培养液,mRT-PCR和胶体金法检测的阳性符合率与型别符合率均为100.0%.mRT-PCR检测流感病毒敏感性为103 TCID50/0.1 mL;胶体金法检测的敏感性为103 TCID50/0.1 mL.结论 mRT-PCR和胶体金法的敏感性与特异性无差异;mRT-PCR和胶体金法均可用于人群流感鼻咽拭标本流感病毒快速检测,特别是聚集性暴发流感患者,建议采样时标本数要适当放大2～3倍.mRT-PCR可进一步确定流感病毒的H1和H3亚型.
关键词： 流感病毒 分离 多重逆转录聚合酶链反应 胶体金法 -
人感染H7 N9禽流感监测病例中分离到一株A型呼吸道合胞病毒
目的：对H7 N9型禽流感病毒（简称H7 N9病毒）监测病例进行病原学检测，以明确呼吸道感染的诊断与鉴别诊断。方法采用多重逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对H7 N9病毒进行监测的同时对22种呼吸道常见病原体核酸进行检测，并对检测到的病原体进行分离鉴定。结果在一例重症肺炎患者的H7 N9病毒监测标本中检出A型呼吸道合胞病毒（RSV-A），并利用人胚肺成纤维细胞（MRC-5）对该标本进行了病毒分离，成功分离到了一株RSV-A。结论多重RT-PCR能同时对22种呼吸道病原核酸进行检测，有助于疫情的及时诊断和控制。RSV-A的成功分离为呼吸道合胞病毒的进一步研究打下基础。
关键词： H7N9型禽流感病毒 呼吸道合胞病毒 人类感染 多重逆转录聚合酶链反应 -
多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应快速检出含漱液中的乙型流感病毒
目的建立特异敏感的快速检测含漱液中的流感病毒的分子生物学方法.方法用多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应扩增甲1、甲3和乙型流感病毒HA基因的HA1片段,得到各病毒与特异性大小的扩增产物的对应关系.用同样的方法扩增含漱液中流感病毒的HA基因的HA1片段.根据这对应关系检测含漱液中的流感病毒.结果以流感病毒的HA基因为模板设计的三对引物,用多重逆转录聚合酶链反应能特异性地扩增出942bp、1117bp和751bp的核酸片段,它们分别和甲1、甲3和乙型流感病毒有稳定对应关系.用多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应扩增含漱液中流感病毒HA基因的HA1片段,根据扩增产物的大小检出含漱液中的乙型流感病毒.结论多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应能特异敏感地检出含漱液中的乙型流感病毒.
关键词： 含漱液 乙型流感病毒 血凝素基因 多重逆转录聚合酶链反应 半巢式多重聚合酶链反应 -
多重逆转录聚合酶链反应检测流感病毒
目的:建立特异敏感的快速检测流感病毒的分子生物学方法.方法:用多重逆转录聚合酶链反应连接多重聚合酶链反应扩增甲1、甲3和乙型流感病毒的HA基因的HA1片段.根据扩增产物的大小检测流感病毒.结果:以流感病毒的HA基因为模板设计的三对引物能特异性地扩增出942 bp、1117 bp和751 bp的核酸片段,它们分别和甲1、甲3和乙型流感病毒有稳定对应关系.根据扩增产物的大小可以检测流感病毒.用这个方法能检测病毒浓度为0.1TCID50的样品.还可直接从疑似流感病人的含漱液中检测到乙型流感病毒.结论:多重逆转录聚合酶链反应连接多重聚合酶链反应是检测流感病毒的特异敏感的方法,此法还能直接从疑似流感病人的含漱液中检测到乙型流感病毒.
