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人鼻病毒感染的研究进展
鼻病毒与流感病毒、呼吸道合胞病毒一起被认为是儿童呼吸道感染的主要致病病毒[1-3].鼻病毒与其他呼吸道病毒相比,可导致大约三分之二的普通感冒以及其他疾病.美国每年花费在普通感冒上的研究经费可达400亿美元[4].分子生物学研究表明,鼻病毒逐渐成为哮喘恶化和呼吸困难等慢性肺疾病的主要病因.严重的哮喘恶化与鼻病毒密切相关,人鼻病毒是鼻窦炎和中耳炎的单独的病原,还可继发二次细菌感染.鼻病毒感染的发病机制是当前的重点研究项目.
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人鼻病毒分型变异研究进展
人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)是引起普通感冒症状的主要病毒之一,超过50％的哮喘与慢性阻塞性肺炎(obstructive pulmonary emphysema diseases,COPD)患者可检测到鼻病毒感染.自1956年Pelon等人分离培养出第一株HRV以来,已经发现了100多个血清型[1].HRV 主要经过呼吸道传播,可通过手到鼻或飞沫直接传播,其他传播途径尚不明确[2].人感染HRV以后表现为一般感冒症状,主要包括发热、头痛、流涕、咽喉肿痛等.HRV不仅可以引起上呼吸道感染,而且与细支气管炎、肺炎、哮喘加重等下呼吸道疾病也密切相关.HRV感染在全年均有发生,主要在春秋两季高发,人群普遍易感,儿童感染率较高,发病率随年龄增长而下降,随后在高龄人群中随年龄增长而升高[3-5].随着鼻病毒研究的进一步深入,近年发现了不同于已知HRV-A与HRV-B的新亚型:HRV-C,作为新发现的呼吸道病原得到了全世界的广泛关注.
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北京地区急性呼吸道感染儿童中人鼻病毒感染状况研究
为了解北京地区急性呼吸道感染儿童中人鼻病毒(HRV)-A、B、C型(尤其是HRV-C)的感染状况及分子生物学特征,本研究收集了2011年1月至12月急性呼吸道感染患儿呼吸道标本703例,采用半巢式PCR方法同时进行HRV-A、B、C检测,并对HRV阳性标本进行VP4/VP2衣壳蛋白编码区基因序列测定及进化树分析.结果显示703例标本中共有54例HRV检测阳性,总阳性检出率为7.7％(54/703)；HRV感染的儿童中年龄在5岁以下的占94.4％(51/54)；HRV检出率在毛细支气管炎患儿中高(23.1％),其次是哮喘(20.0％)、肺炎(11.0％)、急性支气管炎(4.3％)、急性上呼吸道感染(4.1％)患儿；序列分析表明54例HRV检测阳性标本中25例为HRV-A(46.3％,25/54),8例为HRV-B(14.8％,8/54),21例为HRV-C(38.9％,21/54);HRV同一基因型内各核苷酸序列同源性为70.0％～100.0％,不同基因型间核苷酸序列同源性为55.5％～65.8％.上述结果提示,HRV是引起北京地区儿童急性呼吸道感染(尤其是下呼吸道感染)重要的病毒病原之一；HRV-C阳性检出率与HRV-A相近,较HRV-B高；HRV各个基因型间具有较高变异性.
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2011年甘肃地区急性呼吸道感染儿童患者中鼻病毒感染规律的研究
探讨人鼻病毒(Human rhinovirus,HRV)在甘肃地区急性呼吸道感染儿童患者中的流行特征.2011年1月至12月,从甘肃地区急性呼吸道感染儿童患者中采集咽拭子标本286份,用多重PCR方法对常见呼吸道病毒性病原体进行筛查.多重PCR结果中HRV阳性的标本再用nested-PCR分别扩增HRV的VP1和VP4/VP2结合区基因片段,阳性结果进行序列测定和基因分析.286份咽拭子标本中,27份标本多重PCR检测结果显示为HRV阳性,检出率为9.44％.本研究中,HRV感染病例的平均年龄为3岁,其中,1岁以内儿童感染比例高,占总阳性数的44.4％ (12/27);在27例HRV阳性病例中,男性占16例(16/185,8.64％),女性占11例(11/101,10.89％),两者无显著性差异;HRV感染的高峰出现在5月份(6/27,22.2％);从HRV感染的疾病构成看,普通感冒的比例高,占12.24％(12/98);其次为肺炎,占8.50％(13/153);剩余2病例均为支气管炎.基因序列特征分析发现:A组HRV是甘肃地区2011年的优势流行基因型,占阳性病例的84.62％(22/26),其次为C组HRV,占11.54％(3/26),B组HRV仅发现1例.HRV感染在2011年甘肃地区全年均可发生,主要感染以1岁以内儿童.A组HRV是该地区2011年急性呼吸道感染儿童患者中的主要流行基因型,并存在多个基因型和多个HRV血清型共同流行的特点.
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病毒在哮喘发作的研究进展
哮喘的本质是气道的炎性反应,规律吸入糖皮质激素和β2受体激动剂可控制哮喘,但在此治疗基础上乎吸道病毒感染仍可导致哮喘的发作.固有及适应性免疫缺陷削弱抗病毒反应,而过敏性炎性反应有协同作用.随着对其机制的深入了解,为开辟新的防治提供新思路.
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成人重症肺炎患者EB病毒和人鼻病毒混合感染的病原学分子鉴定
目的 对1例有禽类接触史的成人重症肺炎患者进行病原学研究,确定其病原体. 方法 采集患者的下呼吸道标本,应用荧光PCR方法检测禽流感H5N1和SARS病毒及甲型H1N1和季节性流感病毒；应用多重PCR方法检测12种常见呼吸道病毒；应用普通PCR方法检测EB病毒和臣细胞病毒,扩增阳性的病毒基因片段测序后,与GenBank 数据库参考序列进行同源性分析. 结果 荧光PCR法检测禽流感病毒H5N1病毒和SARS病毒核酸阴性,甲型H1N1和季节性流感病毒核酸阴性；多重PCR检测人鼻病毒、EB病毒均阳性；普通PCR检测EB病毒核酸阳性.基因序列比对显示,EB病毒核苷酸序列与GenBank数据库中参考序列同源性为99.5％～100％；人鼻病毒的核苷酸序列与GenBank数据库中A组鼻病毒(73血清型)同源性高,为94.7％. 结论 该例重症肺炎患者为EB病毒和A组(73血清型)人鼻病毒混合感染,排除禽流感H5N1和SARS感染.
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青海地区急性呼吸道感染症候群中人冠状病毒及鼻病毒分子流行病学研究
目的 了解青海地区急性呼吸道感染人群中人冠状病毒(human coronavirus,HCoV)及鼻病毒(human rhinovirus,HRV)的分布,探讨其分子流行病学特征.方法 采集2010年5月至2015年5月青海地区急性呼吸道症候群病例鼻咽拭子445例,采用荧光定量反转录聚合酶链式反应(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法对HCoV 6种亚型(OC43,HKU1,229E,NL63,SARS和MERS)及HRV进行检测,并分析其分子流行病学特点.结果 445例样本中共检出HCoV 34例,检出率7.64％,其中HCoV-OC43 19例(4.26％)、HCoV-HKU1 15例(3.37％),其他亚型未检出.HRV检出16例,检出率3.59％.HCoV-OC43在20-60岁年龄组检出率高,为9.48％,且不同年龄组差异有统计学意义(Fisher's确切概率P =0.0011).HRV在门急诊病例中的检出率比住院病例高,为6.72％,且差异有统计学意义(Fisher's确切概率P =0.0432).HCoV-OC43与HCoV-HKU1夏季检出率高,分别为为7.20％ (9/125)、9.60％(12/125);不同季节HCoV检出率差异有统计学意义(x2=25.08,P＜0.0001).HRV春季检出率高,为10.17％ (6/59),不同季节检出率差异有统计学意义(Fisher's确切概率P=0.0449).HCoV感染阳性样本Ct值中位数36.81(35.54-37.49),在住院病例中为36.93(35.54-37.53),在门急诊病例中为36.68(31.18-36.84),差异无统计学意义.HRV阳性样本Ct值中位数31.83 (27.16-33.65),在住院病例中为28.97(26.39-33.79),在门急诊病例中为32.34(30.85-33.65),差异无统计学意义.结论 HCoV及HRV流行高峰主要为夏季和春季,其中HCoV-OC43/HCoV-HKU1是HCoV感染的主要亚型.Ct值在一定程度上反映了HCoV和HRV在不同病例类型中病毒载量的差异.
关键词： 急性呼吸道症候群 人冠状病毒 人鼻病毒 荧光定量反转录聚合酶链式反应 流行病学 -
人鼻病毒感染与儿童哮喘的关系研究进展
已有研究表明儿童早期由某些病毒感染引起的喘息发作是随后哮喘性疾病的独立危险因素.人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)作为人类呼吸道感染常见的病毒病原体之一,在儿童急性喘息性疾病中发挥重要作用,其中尤以HRV-C感染的作用更为显著.该文就近年国内外对HRV感染与哮喘发作或加重的关系及可能的潜在机制进行综述.对于HRV感染与哮喘之间的关系的进一步了解将有助于儿童哮喘新防治策略的形成.
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2016—2017年上海秋冬季重症急性呼吸道感染住院儿童中人鼻病毒感染亚型分布特点
目的 调查上海重症急性呼吸道感染(SARI)患儿中常见呼吸道病毒感染及鼻病毒(human rhinovirus,HRV)亚型分布特点.方法 收集2016年10月—2017年3月上海重症急性呼吸道感染患儿199份鼻咽抽吸物样本.采用分子检测方法对15种常见呼吸道病毒感染进行分析.用针对5′-UTR区引物筛选鼻病毒,阳性样本再用 VP4-VP2区引物进行扩增与序列分析分型.结果在199份样本中,检出率高的病毒为 HRV(26.1%),其次是流感病毒 A 型(6.5%)、腺病毒(6.5%)、呼吸道合胞病毒(6.5%)和博卡病毒(5%).52份HRV阳性样本,经VP4-VP2序列分析发现:A亚型30例(18种型别,以A21、A12、A38、A78、A88、A96亚型为主)、B亚型7例(5种型别,以B72为主)、C亚型15例(共9种型别,以C27、C40为主),其中2份样本存在2种亚型共感染,2份样本未能分型,HRV存在型内、型间共感染及与其他呼吸道病毒合并感染情况.HRV-A和HRV-C在不同年龄组SARI患儿中感染率及临床特征无统计学差异.结论 HRV是上海地区儿童重症急性呼吸道感染主要的病原之一,包括HRV-A,HRV-B和HRV-C型,并呈32种HRV亚型散在分布,主要亚型是A21、A12、A38、A78、A88、A96、B72、C27、C40.
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直接免疫荧光法与多重逆转录聚合酶链反应对呼吸道感染常见病毒的诊断价值
目的 探讨直接免疫荧光法(DFA)和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对呼吸道常见病毒人鼻病毒(HRV)感染患者分泌物的检测,判断其临床诊断价值.方法 选取2010年2月-2011年12月收集的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物210例,分别用DFA和RT-PCR进行检测,对两组测定方法的检测结果进行判定.结果 多重RT-PCR检出112份阳性标本,阳性率为53.33％,DFA检测出89份阳性标本,阳性率为42.38％,两组比较,差异有统计学意义(x2=27.623,P＜0.01).结论 DFA检测方法可以广泛适用于临床检测中；多重RTPCR检测方法的敏感性高,检测病毒的范围广,可以做亚型鉴定方法,适用于呼吸道病毒流行病学的调查研究.
关键词： 直接免疫荧光法 多重逆转录聚合酶链反应 呼吸道 人鼻病毒 -
用离体兔气管平滑肌建立抗鼻病毒药物的药效学评价模型
人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)是引起病毒性呼吸道感染的常见病原体,目前尚无有效治疗药物.由于HRVs绝大多数血清型仅对灵长类动物易感,对常用实验动物不感染,目前多在细胞水平对抗HRVs药物进行筛选与评价,这对抗HRVs药物的有效性研究明显不足.本文根据HRVs对呼吸道感染的特点,以离体气管平滑肌(ASM)收缩反应变化为评价指标,建立了可模拟呼吸症状的筛选模型,在此模型上接种鼻病毒后ASM对于激动剂引发的收缩反应显著增强150%,舒张反应明显减弱至63%,而预先加入已经过细胞初筛有效的化合物后,可显著改善鼻病毒引发的收缩反应异常,表明所建立的评价模型可用于抗鼻病毒药物的进一步筛选.
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抗鼻病毒感染药物的研究进展
人鼻病毒属小核糖核酸病毒.40%～60%的普通感冒由鼻病毒感染引起.它还能导致急、慢性支气管炎以及其他呼吸道感染疾病,并引发并发症,研究抗鼻病毒感染药物来有效地预防和治疗鼻病毒感染是非常必要的.现根据抗鼻病毒感染药物的作用机制,将其分为鼻病毒蛋白合成抑制剂、鼻病毒吸附和脱壳抑制剂以及鼻病毒RNA复制抑制剂等3类,分别对其作用机制、化学结构、抗鼻病毒活性以及临床应用进行了综述.
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人鼻病毒致重症肺炎1例
人鼻病毒（ human rhinovirus ， HRV ）是小核糖核酸病毒科中的一种RAN病毒，因为这种病毒特别适应在鼻腔中生长，故被称为“鼻病毒”。急性呼吸道疾病中30％～50％都与人鼻病毒有关，目前发现人鼻病毒逐渐在下呼吸道感染患者中检测到［1-2］，但主要出现在小婴儿［3］，学龄儿童［4］，老人［5-6］和具有慢性疾病、癌症或免疫缺陷及移植后患者中［7-10］。本文报道北京协和医院收住的1例成人人鼻病毒感染引起的重症肺炎病例。
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急性弛缓性麻痹合并鲍曼不动杆菌、鼻病毒感染1例
在控制、消灭脊髓灰质炎的进程中,疫苗使用和疾病监测是主要的策略[1-2].目前,我国仍然主要使用口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral live attenuated poliovirus vaccine,OPV).实践证明,OPV是非常安全有效的,但也有极个别受种者发生了不良反应,可有皮肤过敏反应、胃肠道反应、精神性反应,并可诱发和偶合多种疾病及婴儿猝死等[3].近年来引起广泛关注的是疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎病例(vaccine associated paralytic poliomyelitis,VAPP)[4-5],在2005 ～2008年中,我国部分省区预防接种异常反应监测发现,VAPP发病率分别为0.17/106[6]、0.18/106[7].2011年4月～2013年10月菏泽市某乡镇预防接种门诊观察到1名男童在接种OPV后32 d发生了急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP),先后在市级和省级医院就诊与治疗.为确定二者之间的关联性,市、县两级预防接种异常反应调查诊断专家组对该病例的发病情况进行了调查,现有关情况报道如下:
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喜炎平注射液对人鼻病毒感染小鼠的抗病毒作用研究
目的：观察喜炎平注射液对人鼻病毒致小鼠感染的抗病毒作用。方法采用人鼻病毒感染小鼠作为模型，测定不同浓度喜炎平注射液对感染小鼠病死率及平均生活日的影响；测定其对感染小鼠气管—肺脏匀浆中的病毒滴度的影响，观察其抗病毒的能力。结果在观察的时间内，喜炎平注射液中剂量组与模型组比较，可显著减少病死率；与模型组相比，喜炎平可显著延长动物平均生存时间；喜炎平不同剂量组对病毒感染小鼠的肺脏病变均有不同程度的改善作用；喜炎平注射液可明显降低气管—肺脏组织匀浆中病毒滴度。结论喜炎平注射液具有抗人鼻病毒的治疗作用，在体内可有效抑制人鼻病毒增殖，能减轻受试动物呼吸道病变，提高存活率，不良反应很低，为进一步临床推广应用提供了实验依据。
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湖北省十堰市2015年流感样病例暴发疫情分析
目的 分析十堰市2015年流感样病例暴发疫情的流行病学特征和病原谱构成,为疫情的诊断、预防与控制提供科学依据.方法 对十堰市2015年报告的5起流感样病例暴发疫情进行描述流行病学分析;采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)方法对疫情标本进行14种常见呼吸道病毒的核酸检测.结果 5起流感样病例暴发疫情均发生于城乡中小学校,平均罹患率为3.09％,1、5、9、11、12月各一起,依次由A(H3)型流感病毒、腺病毒、鼻病毒、B型Yamagata系流感病毒及B型Yamagata系流感病毒引起.结论 十堰市2015年流感样病例暴发疫情病原主要是流感病毒,其次是腺病毒、鼻病毒等,暴发疫情调查时应开展多种呼吸道病毒检测.
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人鼻病毒3C蛋白酶基因的克隆、表达、纯化及活性
目的 获得重组3C蛋白酶,开发一种新型的基因工程工具酶.方法 通过RT-PCR方法获得人鼻病毒3C蛋白酶基因,克隆入表达载体pBV220,构建非融合表达载体pBV220-3C,转化大肠杆菌BL21(Gold)进行表达.表达产物经变性阳离子交换层析纯化后复性,再经Superdex-75凝胶过滤进一步纯化,获得的3C蛋白酶在4℃条件下,酶切融合蛋白IL-11,进行活性测定.结果 3C蛋白酶在大肠杆菌中获得了稳定、高效表达,表达量约占菌体总蛋白的25%,以包涵体形式存在.经过纯化、复性,纯度达90%以上,获得的3C蛋白酶能够有效切割含3C酶切位点的融合蛋白.结论 已成功开发了一种新型的基因工程工具酶.
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人鼻病毒C组在上海三家医院儿童呼吸道感染的分子流行病学研究
目的 了解上海三家医院人鼻病毒(HRV)C组(HRV-C)在儿童急性呼吸道感染中的分子流行情况和临床特点.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR),对2012年1月至12月在上海交通大学医学院附属第三人民医院、上海交通大学医学院附属新华医院、上海市普陀区中心医院收集的271例急性呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物进行HRV-C基因检测、阳性产物测序、同源性和进化分析.计数资料采用卡方检验或核正卡方检验.结果 271份标本中共检出HRV-C阳性扩增产物8份,检出率为3.0％,次于HRV-A(5.9％);HRV-C核苷酸同源性为93％～100％,氨基酸同源性为97％～100％,其中5份存在混合感染,10月份检出较多,年龄均＜3岁,均诊断为下呼吸道感染,临床表现包括发热、阵发性咳嗽、咳痰、咽充血、肺部湿啰音、喘息等,无死亡病例.结论 在上海三家医院急性呼吸道感染患儿中检出HRV-C,是次于HRV-A的流行基因型,其临床症状及诊断无特异性.
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基于结构设计的鼻病毒3C蛋白酶抑制剂的研究进展
人鼻病毒(HRVs)是引起人类普通感冒的主要致病因素,并可导致严重的后遗症.3C蛋白酶是HRVs复制和感染中重要的必需蛋白酶,是目前抗病毒药物的重要选择性靶标.本文对3C蛋白酶的结构与功能及基于结构设计的3C蛋白酶抑制剂研究进展进行了简要概述.
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苏州地区儿童急性下呼吸道鼻病毒感染流行特点及与气候因素的相关性研究
目的:探讨苏州地区儿童急性下呼吸道鼻病毒感染的流行特点及与气候因素的相关性.方法:2013年1-12月对因急性下呼吸道感染住院的1 926例儿童,运用实时定量PCR法检测鼻咽抽吸物(NPA)人鼻病毒(HRV),收集同期苏州地区月平均气温、平均湿度、总降水量、总日照时间、平均风速等气象资料.采用Spearman秩相关法分析鼻病毒活性与气候因素的相关性.结果:2013年1-12月间苏州地区下呼吸道感染儿童HRV的检出率为11.1％,且多见于3岁以下患儿(81.3％);HRV感染好发于夏、秋季;HRV检出率与月平均气温呈正相关.结论:HRV是苏州地区儿童急性下呼吸道感染的重要病原之一,气候因素尤其是气温对HRV的流行可能有影响.
