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新型百日咳疫苗的研发
细菌蛋白-多糖结合物疫苗能有效诱导保护性抗体,并维持较长时间,这种蛋白-多糖结合疫苗的特性已经在肺炎球菌疫苗、b型流感嗜血杆菌( Hib)疫苗以及脑膜炎球菌疫苗的长期使用中已得到验证。近年来,全球百日咳发病例数大幅度上升,称为“百日咳再现”。目前百日咳疫苗主要以PT、FHA等蛋白成分为主要抗原,免疫诱导抗体持久性较弱,不能对百日咳博德特菌有直接杀菌活性等问题,研究者设计了针对百日咳的新型蛋白-多糖结合疫苗,将气管炎博德特菌的核心寡糖与化学处理后的小牛血清白蛋白结合,结合物注射小鼠后,能有效诱导产生针对百日咳博德特菌有杀菌活性的抗体,研究计划通过基因工程方法对百日咳类毒素进行改造,未来用作百日咳蛋白-多糖结合疫苗的载体蛋白。
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b型嗜血流行性感冒杆菌疫苗的预防接种及可行性分析
b型嗜血流行性感冒杆菌(Hib)多糖结合疫苗适用于2月龄~5岁的婴幼儿,预防Hib引起脑膜炎、肺炎、败血症、蜂窝组织炎、关节炎、会厌炎等感染性疾病.据估计,Hib所致疾病在全世界范围内每年至少发生300万例和导致数10万人死亡.
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黏膜免疫佐剂与多糖结合疫苗的研究进展
机体95%以上的感染发生在黏膜或由黏膜入侵机体.目前对人类生命与健康危害极大和难以防治的重要传染病,多起源于黏膜表面.传统疫苗大多是采用肌肉或皮下注射等方式,与大多数病原的自然感染途径不同,在诱发全身免疫的同时,难以产生有效的黏膜局部免疫应答.
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B族链球菌表面蛋白Sip的制备及其免疫原性的研究
20世纪70年代以来,B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS)成为引起新生儿感染的首位原因.疫苗是预防GBS疾病简便有效的方法,传统的荚膜多糖疫苗及单一的荚膜多糖结合疫苗因其保护作用范围有限而使其应用受到限制.用GBS表面保守的蛋白作为疫苗成分可能会对多种血清型GBS的感染提供保护作用,因此引起人们的关注.GBS表面免疫原性蛋白Sip是较保守的表面蛋白[1],本研究中用Sip的两种融合蛋白PET-Sip[2]、GP-Sip研究了Sip蛋白的免疫原性,为进一步研究Sip蛋白在GBS感染中的作用及GBS蛋白疫苗提供了基础资料.
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肺炎球菌表面蛋白A的原核表达及其作为多糖结合疫苗载体的可行性
目的 原核表达肺炎球菌表面蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA),并探讨其作为多糖结合疫苗候选载体的可行性.方法 合成PspA基因,定向克隆至pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pET-30a-rPspA,转化E.coli Star( DE3)菌株,IPTG诱导表达.表达产物经Ni离子亲和层析纯化后,经Western blot鉴定.取破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)及纯化的rPspA,分别与A群脑膜炎球菌多糖(Group A meningococcal capsular polysaccharide,GAMP)通过溴化氰活化法进行偶联,获得rPspA-GAMP与TT-GAMP多糖蛋白结合物,对其进行纯化及检定.多糖结合物分别以滴鼻和肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,评价其诱发的体液免疫和黏膜免疫水平.结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定构建正确;表达产物主要以可溶形式存在,表达量约占菌体总蛋白的20%,经纯化后纯度可达90%,可与His单抗特异性结合;肌肉注射途径显示,两种蛋白载体的结合物均能诱发较高水平的体液免疫,不同载体间差异无统计学意义(P>0.05);滴鼻途径显示,载体蛋白rPspA的结合物刺激产生sIgA的能力优于传统载体TT,差异有统计学意义(P<0.05).结论 原核表达并纯化了rPspA,其具有新型多糖蛋白载体的潜力,也可作为黏膜投递型多糖结合疫苗的候选载体.
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多糖结合疫苗中残余CDAP检测方法的建立及验证
目的 建立测定多糖结合疫苗中残余1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟化硼(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)的高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),为多糖结合疫苗的质量监控提供依据.方法 HPLC色谱条件:色谱柱:TSK gel ODS-100V(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-水-三氟乙酸(60∶40∶0.1);检测波长:300 nm;流速:1 ml/min;进样体积:15 μl;理论塔板数按CDAP峰面积计算不低于2 000.以峰面积对浓度进行线性回归,确定该方法的线性范围,并对该方法进行专属性、检测限、定量限、精密度、稳定性及准确度验证.结果 该方法检测CDAP专属性良好,低检测限和定量限分别为35 ng/ml和40 ng/ml;CDAP浓度在160 ~4 000 ng/ml范围内,标准曲线的线性关系良好,R2=0.999 9;供试品和CDAP标准品连续6次进样,RSD分别为0.26%、0.57%;供试品在8h内稳定,平均加样回收率为94.5%,RSD为2.5%.结论 建立了测定多糖结合疫苗中残余CDAP含量的HPLC测定方法,该方法准确、简便、可靠,能有效控制多糖结合疫苗的质量.
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A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性
目的观察A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性.方法疫苗放不同温度和不同时间后,用乙醇沉淀法测定A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的游离多糖含量,Sepharose CL-4B凝胶层析法测定分子大小.结果液体疫苗放置2~8℃9个月,游离多糖含量为30%以上;4℃放置18个月,Kd<0.2的多糖回收率<60%.冻干疫苗放置25℃和37℃ 12个月,或放置2~8℃18个月,游离多糖含量均不高于25%,Kd<0.2的多糖回收率>60%.结论冻干A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的稳定性.
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脱氧胆酸钠酸沉淀法定量测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗中游离多糖的含量
目的 建立一种b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗中游离多糖含量新的检测方法.方法 分别对标准蛋白溶液、多糖溶液和标加衍生多糖(A H-PRP)的结合物原液进行脱氧胆酸钠(NaDC)酸沉淀处理,观察该方法 对蛋白和多糖的沉淀效果.分别采用NaDC酸沉淀法和乙醇分步沉淀法测定结合疫苗原液中的游离多糖含量.结果 不同浓度的标准蛋白溶液经NaDC酸沉淀法处理后,沉淀中蛋白的回收率在96%~ 99%之间;不同浓度的多糖溶液经NaDC酸沉淀法处理后,上清中的多糖回收率在99%~106%之间;该方法 对结合物中的游离多糖能起到很好的分离效果;两种方法 测定结合疫苗原液中的游离多糖含量差异有统计学意义(P<0.01).结论 NaDC酸沉淀法能专一性地沉淀蛋白物质,对游离多糖无沉淀作用,该方法 具有良好的重复性和准确性,可用于测定Hib结合疫苗中的游离多糖含量.
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冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性
目的 观察冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2~8℃条件下的稳定性.方法 将冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗放置在2~8℃条件下,定期取样,检查其物理外观,检测多糖含量、水分含量和分子大小,并进行鉴别试验以及异常毒性和免疫原性试验,考察其稳定性.结果 冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗于2~8℃保存30个月,各项质量控制指标仍符合该疫苗企业注册标准.结论 冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2~8℃条件下,其质量稳定.
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Hib-CRM197多糖结合疫苗经皮免疫诱导的抗Hib抗体应答
经皮免疫(TCI)是一种新型免疫方法,英国国立生物制品标准和控制研究所Mawas等检测了TCI b型流感杆菌(Hib)-白喉毒素(DT)交叉反应物质(CRM197)多糖结合疫苗加霍乱毒素(CT)或大肠杆菌不耐热肠毒素突变体(LTK63和LTR72)诱导的抗Hib和DT抗体应答.
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025 在2岁以下儿童中对由两种载体蛋白制备的肺炎球菌多糖结合疫苗的干扰作用研究
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030 脑膜炎球菌多糖结合疫苗在婴儿中的粘膜免疫应答
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007 以修饰的白喉毒素和重组鸭乙型肝炎核心抗原为载体的B族链球菌多糖结合疫苗的临床前评价
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032 鼻内接种肺炎球菌多糖结合疫苗后的抗体应答鉴定及不耐热肠毒素对IgG亚类的影响
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119 对蛋白-多糖结合疫苗中的未结合蛋白的高效快速吸附
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062 Ⅱ型B群链球菌荚膜多糖结合疫苗在健康妇女中的安全性和免疫原性
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WHO关于脑膜炎球菌疫苗的意见书
本文介绍了脑膜炎球菌疫苗的背景资料、多糖疫苗和C群结合疫苗的免疫效果以及世界卫生组织(WHO)对该疫苗的意见.
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WHO关于脑膜炎球菌疫苗的意见书
此文介绍了脑膜炎球菌病的流行病学、目前国际上使用的脑膜炎球菌多糖疫苗和多糖蛋白结合疫苗的免疫效果和使用疫苗的成本效益以及WHO对使用该疫苗的建议.
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A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗与百白破疫苗联合接种的免疫原性初探
脑膜炎球菌、b型流感嗜血杆菌(Hib)、肺炎链球菌等细菌的荚膜多糖是重要的保护性抗原,其抗体可以保护机体免受侵害.
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肺炎球菌—脑膜炎奈瑟球菌联合疫苗研究进展
肺炎球菌和脑膜炎球菌感染是引起婴幼儿肺炎、化脓性脑膜炎及爆发性败血症的主要致病菌[1].目前接种疫苗是预防肺炎球菌和脑膜炎球菌感染为有效的方法.1938年研究人员首次进行了1型和2型肺炎球菌荚膜多糖双价疫苗大规模接种临床试验;1978年14价肺炎球菌荚膜多糖疫苗在美国正式上市;我国从1966年开始研制流脑疫苗,1980年卫生部正式批准生产流脑多糖疫苗[2-4].研究证明,肺炎球菌和脑膜炎球菌疫苗在实际应用中还存在一些问题,其中很重要的一个问题是接种次数多.如肺炎球菌多糖结合疫苗标准接种程序是出生后第2,3,4月龄各接种一针,一周岁后加强免疫一针.