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球形芽胞杆菌S层蛋白基因的克隆及原核表达
目的 克隆球形芽胞杆菌S层蛋白的编码基因,实现其原核表达并纯化表达产物. 方法 提取球形芽胞杆菌菌体基因组DNA,根据GenBank公布的核酸序列设计并合成引物,扩增S层蛋白编码基因sllB,与pMD19-T载体连接；测序验证后,构建原核表达质粒pET28 a (+)-sllB并转化BL21( DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAG和Western blot鉴定表达产物,亲和柱层析纯化重组蛋白. 结果 扩增获得S层蛋白编码基因sllB全长(3 306 bp),与参考序列同源性为97.5％.构建的原核表达质粒pET28 a (+)-sllB转化BL21( DE3)后,SDS-PAGE显示表达蛋白的分子质量为116 ku,与理论值相符.Western blot显示其全蛋白、可溶性蛋白和不溶性蛋白中均被鼠抗Penta-His抗体识别.结论 获得了球形芽胞杆菌S层蛋白编码基因sllB,并实现了其原核表达.
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路氏乳杆菌JCM1081黏附相关蛋白的初步鉴定
目的研究路氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri,也称罗伊氏乳杆菌)JCM1081菌体表面蛋白对其黏附HT-29细胞的影响.方法将路氏乳杆菌JCM1081菌体进行胰蛋白酶、蛋白酶K处理;用氯化锂和盐酸胍对乳杆菌表面的蛋白进行抽提,进行SDS-PAGE后与黏蛋白受体进行Western blot,并对杂交阳性蛋白进行质谱分析鉴定.结果路氏乳杆菌JCM1081菌体经胰蛋白酶、蛋白酶K处理后,其对HT-29细胞的黏附力显著下降(P＜0.01);用氯化锂去除路氏乳杆菌JCM1081菌体外表面的S层蛋白后,路氏乳杆菌JCM1081对HT-29细胞的黏附力无显著变化;Western blot结果显示相对分子质量(Mr)为29×103和14×103的两种菌体表面蛋白与黏蛋白受体杂交中出现了强阳性;质谱分析结果显示29×103蛋白与路氏乳杆菌ATCC55730的lr0793蛋白相似性高达71.1%.结论路氏乳杆菌JCM1081菌体表面的蛋白参与了乳杆菌的黏附,其中29×103和14×103的两种胞壁表面蛋白能够特异地识别黏蛋白受体并与之结合,29×103蛋白属ABC转运蛋白家族.
