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乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度、核膜Ca2+/Mg2+-ATP 酶活性及c-jun表达的影响
利用荧光探针和免疫组织化学方法,研究了乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度、核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性及c-jun表达的影响.结果发现,乌贼墨使H22癌细胞内Ca2+浓度分别降低了69%和79%,核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性分别降低了21%和37%,c-jun表达明显减少.结果提示乌贼墨可能通过降低细胞内Ca2+浓度,继而影响到核膜上Ca2+依赖性Ca2+/Mg2+-ATP酶活性,减少了Ca2+向细胞核内的转运,使Ca2+对c-jun表达的促进作用减弱,抑制了细胞的分裂增殖.这可能是乌贼墨抑制肿瘤生长的机制之一.
关键词： Ca2+ Ca2+/Mg2+-ATP酶 C-Jun 乌贼墨 -
乌贼墨的药理作用研究进展
乌贼属于软体动物门头足纲乌贼目乌贼科.乌贼墨由墨囊中的分泌腺合成,在墨囊中储存,是乌贼遇到天敌时喷出来染黑周围水域的黑色物质.我国医药对乌贼的应用历史悠久,对乌贼墨的药用始于止血.现代对乌贼墨的研究是从乌贼墨中黑色素的结构及其生物合成开始的.自从日本学者发现乌贼墨的抗肿瘤活性以来[1],对其免疫调节作用、抗肿瘤作用的研究已成为热点.然而在生产中乌贼的墨囊一般是作为废弃物弃去的,因此挖掘其潜在药用价值对于充分利用海洋资源、扩大药源有深远意义.现重点就乌贼墨的理化性质和药理作用,尤其是抗肿瘤作用综述如下.
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乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响
目的:研究乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响.方法:实验组小鼠每天灌胃5%的乌贼墨0.5 ml,连续7 d.对照组小鼠给予等量生理盐水.流式细胞术检测小鼠外周血CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-2αR(CD25)表达.结果:实验组小鼠外周血CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-2αR(CD25)表达较对照组小鼠均有明显升高.而CD8+T细胞却无显著性变化.结论:乌贼墨通过增高CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-2αR(CD25)表达对小鼠免疫功能进行调节.
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乌贼墨的抗感染作用
目的:研究乌贼墨的体外抗菌作用和对小鼠感染模型的体内抗感染作用.方法:琼脂打孔法检测乌贼墨体外抗菌活性,并通过小鼠死亡率观察乌贼墨对小鼠抗感染能力的影响.结果:新鲜乌贼墨与粗提乌贼墨在体外对琼脂打孔法中的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎双球菌无抑菌圈产生.但实验组小鼠大肠埃希菌感染后与对照组小鼠比较,其死亡率有明显降低.结论:用琼脂打孔法测新鲜乌贼墨与粗提乌贼墨在体外无抗菌活性,但粗提乌贼墨在体内可以提高小鼠对大肠埃希菌感染的抵抗力.
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小鼠自然杀伤细胞在乌贼墨作用下的活性表达
目的: 研究乌贼墨对BALB/c小鼠脾细胞自然杀伤(NK)细胞活性的诱生作用.方法:用5%的乌贼墨给小鼠灌胃,连续5 d后取不同时间的小鼠脾细胞,应用乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性.同法观察乌贼墨对S180和Meth A荷瘤鼠的抑瘤作用.结果:口服乌贼墨后可使小鼠NK细胞杀伤活性增强,实验组与对照组比较有显著性差异,(P<0.01);诱生后24 h至7 d NK细胞杀伤活性处于高峰期,2周左右恢复正常水平;乌贼墨可使荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性增强,瘤体缩小.结论:乌贼墨能诱导小鼠NK细胞杀伤活性,抑制荷瘤鼠瘤体的生长.
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乌贼墨中主要活性成分的定性定量分析
目的:建立乌贼墨主要活性成分的定性鉴别与定量分析方法.方法:通过黑色素溶于碱性溶液、在酸性环境中有黑色物质析出的性质对黑色素进行定性鉴别,采用HPLC-AccQ-Tag法测定乌贼墨中甘氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸和丙氨酸的含量,采用原子吸收分光光度法测定乌贼墨中微量铁元素的含量.结果:在鉴别反应中,乌贼墨黑色素可溶于2 mol/L氢氧化钠溶液,并在2 mol/L盐酸溶液中有黑色飘浮状物析出.4种氨基酸和铁元素的加样回收率均在95%～105%之间, RSD均小于5%(n＝6),3批乌贼墨样品中甘氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和铁元素的平均含量分别为7.37、11.23、12.05、7.32和0.206 mg·g-1.结论:乌贼墨活性成分的定性定量方法准确可靠,重复性好,可用于乌贼墨的质量控制.
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乌贼墨抗肿瘤作用研究进展
乌贼墨含有多种生物活性和药理作用,并有抗肿瘤作用.文章综述了有关乌贼墨抗肿瘤作用机理,包括增强免疫细胞活性、诱生细胞毒性因子、影响细胞内Ca2+浓度和蛋白酶活性等.
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乌贼墨抗癌活性的实验研究
乌贼墨作为一种中药,文献上早有记载.它主要作为止血剂,治疗出血性疾病,如功能性子宫出血、胃出血等[1].实验证明它可以预防实验动物放射病[2].1991年日本学者发现乌贼墨囊中含有高效抗癌物质[3].1994年吕昌龙[4]也证明乌贼墨具有抗癌活性.我们观察了乌贼墨对荷人肝癌HHC15裸小鼠的抑瘤作用,现将实验结果报道如下.
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乌贼墨多糖对环磷酰胺损伤小鼠生精功能的影响
目的 本文旨在探讨乌贼墨多糖对环磷酰胺诱导的小鼠生精功能损伤的缓解作用.方法 昆明小白鼠随机分组,腹腔注射环磷酰胺(CP,15 mg/kg),每周1次,连续10周,制备小鼠生精功能损伤模型；同时多糖治疗组每天灌胃不同剂量乌贼墨多糖1次,连续10周.检测精子总数、存活率、畸形率及睾丸组织中SOD酶活力,并与模型组进行比较.结果 相较于模型组小鼠,治疗组小鼠虽然精子总数变化不明显(P＞0.05),但存活率、畸形率及SOD酶活力均有明显的改善(P＜0.01),甚至接近正常水平.结论 乌贼墨多糖对环磷酰胺损伤小鼠生精功能具有一定的保护作用.
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乌贼墨提取物对环磷酰胺所致小鼠肺纤维化的保护作用
目的 探讨乌贼墨提取物对环磷酰胺所致小鼠肺纤维化的改善或治疗作用及在不同乌贼墨提取物浓度条件下的保护效果.方法 腹腔注射环磷酰胺以制作肺纤维化模型,试验组灌服不同剂量的乌贼墨提取物,观察小鼠肺重系数,血液与肺组织中MDA、SOD、HYP、CAT及GSH-Px含量.结果 与对照组相比,环磷酰胺能显著地改变小鼠肺重系数(P＜0.01),也能不同程度地改变小鼠血液及肺组织中MDA、SOD、HYP、CAT及GSH-Px的含量,从而促进肺的纤维化过程.适当剂量的乌贼墨提取物能显著改善由环磷酰胺所致肺纤维化小鼠各项指标的变化(P＜0.05或P＜0.01),但在提取物浓度太高的情况下,对环磷酰胺所致肺纤维化小鼠各项指标变化的影响较小.结论 乌贼墨提取物对环磷酰胺引起的小鼠肺纤维化具有一定的保护作用.
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乌贼墨对高脂血症大鼠血脂代谢和抗氧化能力的影响
目的 探讨乌贼墨对实验性高脂血症大鼠血脂代谢和抗氧化能力的影响.方法 饲喂高脂饲料建立高脂血症大鼠模型,同时灌胃乌贼墨,剂量分别为50和200 mg·kg-1,连续30d.分别测定大鼠血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和一氧化氮(NO)含量,以及大鼠血清和肝脏丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果 乌贼墨能显著性降低模型大鼠血清中的TC,TG和LDL-c含量,升高HDL-c,降低动脉粥样硬化指数(LDL-c/HDL-c);显著提高高脂血症大鼠血清中NO含量;显著降低血清及肝组织中MDA含量,提高SOD和GSH-Px活性.结论 乌贼墨可通过调节机体血脂代谢、提高机体内源性抗氧化酶活性,降低机体的过氧化水平,有效预防高脂血症的形成.
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乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周白细胞的影响
目的 探讨乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周血WBC的影响.方法 用不同剂量的乌贼墨灌胃正常小鼠、环磷酰胺(Cy)和辐射骨髓损伤模型小鼠,采用造血祖细胞体外培养方法和实验血液学技术,检测小鼠骨髓造血干细胞生成数(CFU-S)、粒-单系祖细胞集落生成数(CFU-GM)和外周血WBC数量.结果 乌贼墨能够显著提高正常小鼠CFU-S,CFU-GM和外周血WBC数量,有效拮抗模型小鼠体内CFU-S,CFU-GM及外周WBC的降低,并显著促进模型小鼠上述各指标的恢复.结论 乌贼墨具有显著的促进小鼠骨髓粒系造血作用.其作用机制可能通过调节机体的免疫机能,诱导机体产生粒/单核细胞集落刺激因子和多种细胞因子,促进造血细胞的增殖,并诱导造血细胞向粒单系细胞分化.
关键词： 乌贼墨 骨髓损伤 追血干细胞生成数 粒-单系祖细胞集落数 外周血白细胞数 -
乌贼墨对小鼠脾细胞和巨噬细胞NO生成及 IFN-γ分泌水平的影响
目的:探讨乌贼墨对脾细胞和巨噬细胞NO生成及IFN-γ分泌的影响.方法:用Griess法和ELISA法分别检测了经乌贼墨灌胃处理后小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞培养上清中NO和IFN-γ的水平的变化.结果:乌贼墨灌胃处理小鼠后的第4、6天脾细胞及腹腔巨噬细胞(Mψ)可产生较高水平的NO;脾细胞可产生较高水平的IFN-γ,并且小鼠脾细胞NO的产生水平与IFN-γ产生水平呈正相关(r=0.98);用LPS和L-NMMA(NO抑制剂)分别同乌贼墨灌胃第6d小鼠的脾细胞一起培养,结果显示LPS可协同IFN-γ促NO水平升高.L-NMMA可抑制小鼠脾细胞的NO生成.结论:乌贼墨可促进巨噬细胞NO生成;脾细胞NO的产生与IFN-γ分泌水平呈正相关.
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乌贼墨糖胺聚糖的制备与理化性质研究
本实验采用胰蛋白酶、链霉蛋白酶两次酶解,乙醇沉淀和DEAE-纤维素离子交换柱分离,从新鲜无针乌贼(Sepiella maindroni de Rochebrune)墨中提取得到乌贼墨糖胺聚糖(GAG);经醋酸纤维素薄膜电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳证明乌贼墨GAG为均一性多糖;紫外扫描无蛋白质的特征吸收峰;红外光谱分析,样品具有典型的GAG吸收峰;对该GAG酸水解产物的薄层色谱、纸色谱研究表明该GAG主要由氨基半乳糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖3种单糖组成,含量分别为25.6%,29.2%,23.3%;硫酸根和蛋白质含量分别为8.2%,3.5%.
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乌贼墨诱导小鼠巨噬细胞产生白细胞介素-1的研究
目的:应用乌贼墨,研究其诱导BALB/C鼠巨噬细胞产生白细胞介素-1(interleukin-1).方法:给小鼠ig灌入乌贼墨,抽取腹腔液,应用成纤维细胞增殖实验检测诱导巨噬细胞产生IL-1的生物学活性,体内持续时间和不同稀释浓度促细胞增殖的结果.结果:乌贼墨能诱导BALB/C鼠巨噬细胞产生IL-1,且分泌活性较强,与对照组比较有显著性差异.体内跟踪检测可见停止诱生后第2天达高峰,第5天分泌活性仍明显,第9天接近正常.IL-1待检液稀释8倍时活性无明显变化,32倍时近正常水平.结论:乌贼墨能诱导小鼠巨噬细胞产生IL-1,48h分泌活性高.
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鱿鱼墨和乌贼墨部分成分及微量元素含量比较
目的:比较鱿鱼墨和乌贼墨中微量元素含量.方法:原子吸收法测定金属元素,原子荧光法测定Hg,银盐法测定As.结果:鱿鱼墨和乌贼墨中常量元素以钙含量高,分别达到0.34%和1.07%.微量元素中以铁、锶和铜含量较为丰富.乌贼墨中有毒微量元素铅、镉和砷的浓度分别比鱿鱼墨高121%、127%和319%,但汞的含量相近.鱿鱼墨的无机物含量仅为乌贼墨的1/3左右,但有机物含量比乌贼墨高.结论:除铁和锌外,其它微量元素在乌贼墨中的浓度均比鱿鱼墨高.两种墨在成分上明显差异除和两种动物生物学差异有关外,可能和生活海域中海水的微量元素组成有关.
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乌贼墨对H22癌细胞TPK、PKC及PKA活性的影响
利用Υ-32P-ATP作为反应启动剂掺入外源性底物的方法测定TPK、PKC及PKA活性.研究了乌贼墨对H22癌细胞TPK、PKC及PKA活性的影响.结果发现:癌细胞质膜、胞浆及线粒体TPK活性均显著升高而以质膜TPK活性升高为显著;胞浆、线粒体及胞核PKC活性均显著升高而以胞核PKC升高为明显;胞浆内PKA活性升高.给予乌贼墨作用后,癌细胞质膜、胞浆及线粒体TPK活性均显著下降;线粒体及胞核PKC活性均显著下降;胞浆PKA活性却继续明显升高.结果提示:乌贼墨能明显的逆转癌细胞异常改变的TPK、PKC和PKA活性,引起Ras-MAPK信号传导系统的正调节作用减弱和负调节作用增强,结果抑制或阻断了Ras-MAPK信号传导系统的信号级联传导,使癌细胞由去分化性增殖向分化性增殖转变.产生抗癌促分化作用.
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乌贼墨诱生小鼠IFN-γ及调节LAK细胞活性的研究
为进一步研究乌贼墨对免疫功能的刺激作用,本文采用ELISA技术和生物活性测定技术分别检测了经乌贼墨灌胃后小鼠血清中的IFN-γ的水平和LAK细胞活性的变化.结果显示,实验组小鼠IFN-γ的水平于乌贼墨灌胃后24h开始升高,48h达高峰,72h降至正常水平.LAK细胞杀伤活性也有明显增强,与对照组小鼠相比,差异显著(P＜0.01).结论进一步证实了乌贼墨可诱导机体产生多种细胞因子和促进免疫活性细胞作用的发挥.
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乌贼墨抗肿瘤活性研究进展
乌贼墨具有抗肿瘤、止血、抗菌、抗辐射等多种药理活性,是一种很有潜力的海洋药物资源.目前研究的热点是它的抗肿瘤活性.本文综述了乌贼墨抗肿瘤活性的作用机理,包括影响免疫细胞活性、诱生多种细胞因子、影响细胞内蛋白激酶活性和Ca2+浓度,为乌贼墨的进一步研究利用提供参考.
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乌贼墨的药用研究概况
乌贼属于软体动物门头足纲乌贼目乌贼科,常见种类有:金乌贼(Sepia esculenta Hoyle,别名:乌鱼、墨鱼)、虎斑乌贼(Sepia pharaonis Ehrenberg,别名:花旗、花西、墨姆)、白斑乌贼(Sepia Latimanus Quoy et Gaimard, 别名:花斑墨)、拟目乌贼(Sepia Lycidas Gray、别名:眼墨、花鸡姆、墨公)、罗氏乌贼(Sepia robsoni Sasaki)、曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni de Rochebrune,别名:日本无针乌贼、花拉子、麻乌贼、墨鱼、目鱼、疴血乌贼、血墨)等[1].它们在中国近海的地理分布见表1.
