首页 > 文献资料
-
狂犬病防制工作不容忽视
我国在公元前300多年就有狂犬病的记载,从发现狂犬病的那一天就开始了狂犬病的防治,并且随着医学生物学的发展和新技术的应用,有关狂犬病研究的各个领域也取得了可喜的成果。如狂犬病毒全基因序列的测定和分子结构的阐明,狂犬病毒致病的分子机理的日益明确和狂犬病毒基因工程口服疫苗的研究和应用。我国在狂犬病预防和研究领域也取得了可喜的成绩,如人狂犬病已从80年代的每年数千例降至目前的数百例;Vero细胞纯化狂犬病疫苗的研制成功;人腺病毒和禽痘病毒为载体表达狂犬病毒糖蛋白和/或核蛋白制备基因工程疫苗已在动物实验中证实有保护作用。与此同时我们也应看到仍有许多问题有待于继续努力和解决。 目前人狂犬病多见于亚洲的印度、泰国、斯里兰卡、柬埔寨、孟加拉国、越南和缅甸等国家,而北美和欧洲,狂犬病主要限于野生动物中。我国仍属于人狂犬病严重流行的国家之一,我国周边地区很多也是狂犬病高发病国家。从这种人、动物狂犬病的分布可以看出,人狂犬病流行的国家大都属于尚不够发达或比较落后的国家,这也揭示了一个社会整体治理的水平问题。因为狂犬病的流行很多是人为造成的,是与整个社会的文明程度和法规秩序有着直接的关系。目前在国际上,我国已逐步被列入发达国家行列,在许多领域,我们已经居世界领先地位。可是我们在狂犬病的防制方面与众多飞速发展的领域不相符合。因为一个国家的发展和先进要体现在方方面面,疾病预防与控制是其中非常重要的一个方面。狂犬病是我国《传染病防治法》中明确规定必须报告的乙类传染病之一。在过去,死亡数一直位居35种法定报告传染病之首,从80年代到90年代中期,由于国家和各级政府的重视,我国在狂犬病的控制方面卓有成效。但令人遗憾的是随着狂犬病疫情的下降,这种政府参与的多部门的联手协作没有能够继续下去,致使各部门各自为政,有些地区甚至处于无人管理状态,这种缺乏整体和全面有序的工作现状很难使狂犬病从根本上得到控制。
-
基于狂犬病病毒载体的基因工程疫苗研究进展
对HIV-1和HCV等重大传染性疾病传统疫苗研制的失败,让科学家们把目光转向开发新型疫苗研制策略.其中之一就是用减毒的重组病毒载体表达外源抗原来免疫,可以保护个体免受相应病原体的暴露威胁.一种新的手段就是从cDNA克隆拯救单股负链RNA病毒,这一技术为弹状病毒科成员用于疫苗载体和生物医学工具打开了一扇窗.
-
不同载体表达核酶对HBV mRNA细胞内表达的阻断作用
目的:探讨多位点自剪切核酶及突变核酶对细胞内HBVmuRNA的切割作用.方法:构建5个不同的多位点核酶及突变核酶的真核表达载体,将他们分别与乙型肝炎病毒全基因序列共转染HepG2细胞,用ELISA,共聚焦定量及图像分析的方法观察多位点核酶在细胞内对HBV mRNA切割作用.结果:构建的真核表达载体在细胞内确可表达出多位点核酶,核酶及突变核酶在细胞内对HBV基因的表达均有抑制作用,不同表达载体的抑制率不同,以tRNA启动子的表达载体抑制效率高,达81%,突变核酶亦有部分反义RNA的抑制效果.结论:抗乙型肝炎病毒核酶在细胞内可抑制HBV基因的表达,不同表达载体其核酶的表达效率不同.
-
抗表皮生长因子受体单抗基因治疗胰腺癌的实验研究
目的 EGFR靶向治疗和AAV介导的基因治疗在胰腺癌治疗方面具有广泛前景.本实验将上述两种手段相结合,构建表达人抗EGFR单链可变区抗体的rAAV载体,并筛选出对抗EGFR治疗敏感的胰腺癌细胞株.方法 以包含人IX因子基因的rAAV载体中的FIX基因替换成目的基因,转染293细胞,Western Blot法检测目的蛋白:同时将C225作用于六株胰腺癌细胞,通过CCK-8法测定生长曲线,PI染色法及Annexin V-FITC试剂盒检测细胞凋亡.结果 Western Blot 法检测到目的条带;生长曲线显示C225仅对AsPC-1的生长有明显的抑制作用(P<0.01),Annexin V-FITC试剂盒可检测C225引起AsPC-1细胞的早期凋亡(P<0.05).结论 rAAV载体构建成功,并在293细胞中获得表达;AsPC-1对C225的敏感性明显高于其它五株胰腺癌细胞.
-
反义寡核苷酸阻断黑质多巴胺神经元多巴胺转运载体表达的大鼠对MPTP反应性的改变
研究表明多巴胺转运载体(dopamine transporter, DAT)是神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)特异性载体,DAT选择性摄取MPTP进入黑质多巴胺神经元,造成神经元损伤.DAT表达水平受其基因多态性的影响.众多病例对照研究显示,多巴胺转运载体的多态性可能与PD遗传易患性有关,但尚有争议,也缺少直接的证据.我们采用反义寡核苷酸阻断大鼠黑质多巴胺神经元多巴胺转运载体表达,观察大鼠对神经毒素MPTP反应性的改变.
-
狂犬病毒3aG株核蛋白基因的克隆及序列分析
狂犬病毒的包膜糖蛋白(glycoprotein,GP)和核蛋白(nucleoprotein,NP)是主要的保护性抗原,一般认为,NP诱导的细胞免疫在狂犬病毒感染后起更为重要的作用.文献报道以不同病毒载体表达的NP,可使受攻击的小鼠具有更强的保护效力和较长的存活时间.为研究狂犬病毒3aG株NP的分子生物学特性及其在狂犬病毒基因工程疫苗中的作用,本研究对NP基因进行了克隆和序列分析.
-
沙门菌减毒基因的研究进展
沙门菌( Salmonella )属于肠道致病菌,是一种重要的食物源性病原体,其具有广泛感染的宿主谱,在公共卫生方面具有重要的意义。用沙门菌作为重组疫苗的载体具有安全、免疫方式类似自然感染等无可比拟的优越性。弱毒的沙门菌活疫苗可以经口服途径表达传递重组的抗原到机体的黏膜表面,从而诱导机体产生保护性的免疫应答来对抗病原体的感染。近年来,出现的许多令人振奋的医学新发现和新技术都是以减毒的沙门菌作为载体来实现的。本文结合国内外近年来构建的一些沙门菌减毒菌株进行说明,为进一步研制安全高效的沙门菌弱毒疫苗以及将其用作活载体表达外源基因的研究奠定基础。
-
PRRSV-PCV2重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究
目的 本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为猪圆环病毒(PCV2)的主要免疫原开放阅读框架2(ORF2)表达载体的可行性,以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行解剖.方法 以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,分别在pAPRRS的ORF1和ORF2间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2 ORF2,且对拯救病毒vPCV进行了病毒学及分子生物学鉴定.结果 vPCV的sgmRNA2.1利用了PRRSV mRNA2的转录调控序列(TRS),形成由PRRSV GP2和PCV2衣壳蛋白组成的sgmRNA2.1.外源基因的插入同时也导致重组病毒启用新的TRS 而产生3条新亚基因组,其中sgmRNA2.2和sgmRNA2.3采用PCV2上的序列来取代PRRSV RNA2本身的TRS;另一条sgmRNA2.4则为非经典型亚基因组,其TRS在PRRSV相应的AUG下游.结论 2株PRRSV-PCV2重组病毒可以稳定传代,为进一步研发PRRSV遗传标疫苗奠定了基础;插入片段上一些类似TRS序列的引入及插入片段(718bp)过长导致PRRSV ORF2 TRS 本身和其两翼序列的RNA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性的主要原因;PRRSV可以利用TRS样外源序列作为转录启动子,这为进一步解剖PRRSV复制转录过程奠定了基础.
关键词: 猪繁殖与呼吸道综合征病毒 猪圆环病毒Ⅱ型 载体表达 转录调控序列 -
Tet-Off对GDNF重组腺相关病毒载体表达的调控作用
胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对多巴胺能神经元、运动神经元等都具有神经营养作用,是帕金森病等中枢神经系统退行性病变常见的治疗基因[1,2].以腺相关病毒(AAV)为载体将GDNF导入尾状核头部等功能核团能缓解帕金森病症状、促进多巴胺能神经元再生[3].本研究在AAV介导GDNF体内高效表达的基础上,在GDNF上游插入Tet-Off反式激活子及其反应元件启动子复合物,从而降低转基因后可能的致瘤作用及其它潜在危险.
-
单纯疱疹病毒Ⅱ型PCR检测引物设计及其价值探讨
生殖器疱疹(GH)大多是由单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染所致.主要通过性接触传播.其发病率迅速上升,成为人们关注的公共卫生问题[1].现今生殖器疱疹不典型表现和无症状感染相当多见[2].建立一种快速、简便、特异的检测HSV-2的方法很有必要.糖蛋白D(gD)为HSV-2主要的激活机体免疫的抗原,本试验针对HSV-2糖蛋白D基因序列设计引物并扩增的片断,均符合进一步克隆重组载体表达的要求,所以为研究HSV-2基因疫苗提供了有利的条件.现将结果总结如下.
-
RNA干涉胰岛素样生长因子1类受体的研究
RNAi技术的关键是siRNA的制备,实验结果证实,通过发卡结构的小RNA(shRNA)载体表达siRNA可以抑制特定靶基因表达[1].我们通过将针对IGFIR基因的RNA干扰片段装入特定质粒PSUPER中,再转染入人肝癌细胞株SMMC7721中,并筛选出稳定株.
-
沉默Sam68基因抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖
目的:探讨Sam68对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响。方法:针对Sam68 mRNA的第531~552靶位点,构建pLKO-Tet-On载体,制备慢病毒并感染、筛选Jurkat细胞,诱导干扰载体表达;采用real-time PCR和Western blot技术验证干扰效率;用体外细胞集落形成实验观察干扰Sam68基因表达后对细胞集落形成能力的影响;用流式细胞术检测分析Jurkat细胞细胞周期的变化。结果:Sam68基因表达下调能抑制了细胞的增殖和集落形成能力,导致S期细胞比例显著增加,G2期细胞比例显著降低,G1期细胞比例无明显差异。结论:shRNA靶向干扰Sam68基因的表达能有效抑制急性淋巴细胞白血病细胞系Jurkat细胞的增殖。
-
下调Sam68基因表达促进急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡
目的:探讨Sam68蛋白对白血病细胞Jurkat凋亡的影响。方法:针对Sam68靶点构建pLKO-Tet-On条件性真核表达干扰载体,制备慢病毒并感染Jurkat细胞,诱导干扰载体表达,筛选稳定表达shRNA细胞;采用实时荧光定量和免疫印迹技术检测干扰效率;应用流式细胞术检测细胞凋亡,采用免疫印迹技术检测凋亡相关蛋白表达水平变化情况。结果:Sam68基因表达下调的细胞凋亡数量增多,伴随caspase-3活化水平增加和PARP活化水平下降,Akt磷酸化水平下降,Erk和Bcl-xL表达水平无明显变化。结论:Sam68基因表达下调可通过影响Akt信号通路影响caspase-3和PARP蛋白表达,从而促进Jurkat细胞凋亡。
-
登革病毒重组包膜蛋白表达及其应用的研究进展
登革病毒(dengue virus,DV)是当前严重影响人类健康的虫媒传播病毒,无特效的疫苗和药物.目前在DV的诊断、疫苗的研发以及对抗体依赖性增强效应(ADE效应)机制的研究上,DV包膜蛋白越来越受到人们的关注.研究人员通过不同的载体表达不同形式的DV包膜蛋白,对研究目的以及研究结果的应用有着巨大的影响.本文主要就DV包膜蛋白在不同表达系统中的表达方式进行综述,尝试比较分析各种表达系统表达包膜蛋白的关键点以及其应用范围.
-
细胞膜核苷载体表达与肿瘤化疗关系的研究进展
5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、吉西他滨(gemcitabine)及阿糖胞苷(cytarabine)等核苷类药物是很多抗肿瘤化疗方案的基础用药,临床应用广泛.细胞膜核苷载体对核苷类化疗药物的细胞内外转运起着决定性作用,细胞膜核苷载体的表达水平,直接决定了细胞内核苷类药物的浓度,从而决定了肿瘤的化疗效果.
-
肿瘤免疫基因治疗策略的临床应用及评价
尽管传统的治疗方法在不断地改进,肿瘤仍然是全世界导致死亡的主要原因之一.免疫治疗是其中一种可供选择的疗法.本文侧重介绍基于基因转导的免疫治疗方法,这种方法通过构建质粒或者病毒载体表达目的基因,以人细胞为对象首先在体外进行研究并逐渐进入临床试验阶段,同时也介绍了结合化疗的组合治疗方法.通过对这些治疗方法的优缺点进行分析评价有助于我们得到一个更为优化的综合免疫治疗策略.
-
X基因突变乙型肝炎病毒表达质粒的构建及细胞转染
对HBV X基因进行改造,通过插入合成DNA片段,造成X基因的缺陷,构建真核细胞表达质粒,研究X基因缺陷的HBV在肝癌细胞株的表达复制效果.