首页 > 文献资料
-
人巨细胞病毒感染对宿主细胞周期进程影响的实验研究
目的 观察人巨细胞病毒(HCMV)感染对宿主细胞DNA合成及细胞周期蛋白(Cyclins)表达的影响.方法 用HCMV感染同步化于G0/G1期的人胚肺成纤维细胞(HEL),分别于感染后0、3、6、12、24、48、72、96 h终止培养.用流式细胞术测定HCMV感染后细胞周期进程及DNA含量.用免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测CyclinE、CyclinA、CyclinD1蛋白的表达.结果 HCMV感染细胞后24h～96h,S期细胞明显增多,G2/M期细胞减少,至感染后96 h,未发现有G2/M期细胞.感染后24 h细胞保持2N DNA含量,全部感染细胞DNA含量在48 h内开始升高,感染后72h多数细胞的DNA含量大于2N DNA含量.在正常对照细胞DNA含量没有增加.HCMV+PAA组没有检测到DNA含量增加.HCMV感染接触抑制细胞12 h时CyclinE蛋白被诱导,感染后24 h出现CyclinE峰值;HCMV不能诱导CyclinA蛋白表达;CyclinD1在感染后24 h开始下降.结论 HCMV感染同步化于G0/G1期的细胞后,诱导CyclinE蛋白明显升高,激活CyclinE/Cdk2激酶,使细胞周期越过G1/S限制点,将细胞周期阻止于晚G1期.病毒感染未能激活细胞DNA合成,病毒感染后总DNA的增加由病毒DNA复制造成.
-
细胞分裂周期蛋白基因6半定量检测方法的条件建立
目的以beta-actin为内参基因,细胞分裂周期蛋白基因6(CDC6)为检测基因,探索半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)体系在检测CDC6基因时的条件建立.方法以膀胱癌细胞株为标本,提取总RNA,合成cDNA,优化PCR反应条件,建立针对CDC6的半定量PCR反应体系.结果通过对实验参数的优化,确定适宜的反应体系:退火温度58℃、Mg2+浓度2.0 mmol/L、循环次数37次;批内、批间变异系数分别为8.01%和14.53%,小检测限为总RNA 0.05 ng.通过重复性试验、敏感性试验和准确性实验分析,该方法具有良好的重复性、准确性和敏感性. 结论将内参基因与CDC6目的基因共同扩增,选择适当条件,可直接获得目的基因CDC6的mRNA的相对表达量.
-
膀胱移行细胞癌A激酶锚定蛋白12基因转录表达与其启动子区甲基化状态的相关性
目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中A激酶锚定蛋白12(A-kinase anchoring protein 12,AKAP12)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与临床病理参数之间的关系.方法 用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)和甲基化特异性PCR(MSP)检测30份膀胱移行细胞癌组织及其癌旁组织中AKAP12基因mRNA的表达水平及其启动子区CpG岛甲基化状态.并用亚硫酸盐修饰后PCR产物进行克隆测序.结果 在30份膀胱移行细胞癌患者组织标本中,AKAP12在癌组织中表达下调比率为73.3%(22/30),在病理Ⅱ和Ⅲ级膀胱移行细胞癌中下调比率明显高于Ⅰ级(P=0.02).MSP检测结果显示,膀胱移行细胞癌甲基化比率为53.3%(16/30),且与膀胱移行细胞癌TNM分期(r=0.52,Pn=0.03)和病理分级(r=0.61,Pn=0.01)有明显的相关性.结论 AKAP12基因启动子区出现的异常甲基化可导致其在膀胱移行细胞癌中的表达沉默,且与膀胱移行细胞癌的发生有关.
-
胰腺癌p57kip2、视网膜母细胞瘤蛋白和增殖细胞核抗原的表达及与临床病理的关系
目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p57kip2,视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)和增殖细胞核抗原(PCNA)在胰腺癌发生发展中的作用.方法应用免疫组化技术,对32例胰腺癌及癌旁组织中p57kip2、Rb蛋白和PCNA表达进行检测.结果 p57kip2蛋白阳性表达率在胰腺癌组织中为46.9%,显著低于癌旁胰腺组织的75.0%(χ2=5.317,P < 0.05),并与胰腺癌组织分化程度有关(P < 0.05),而与淋巴结转移无关(P > 0.05).Rb蛋白阳性表达率在胰腺癌组织中为50%,显著低于癌旁胰腺组织的78.1%(χ2=5.497, P < 0.05).PCNA阳性表达率在胰腺癌组织中为71.9%,显著高于癌旁胰腺组织的43.8%(χ2=5.189, P < 0.05),并与胰腺癌组织分化程度和淋巴结转移均有关(P < 0.05) .p57kip2蛋白阳性表达组Rb蛋白阳性表达率为53.3%;p57kip2蛋白阴性表达组Rb蛋白阳性表达率为47.1%,两组间无相关性(γ=0.16507, P ＞ 0.05).结论 p57kip2、Rb蛋白低表达和PCNA蛋白过度表达与胰腺癌的发生发展有关.
关键词： 细胞周期蛋白质类 视网膜母细胞瘤蛋白质 增殖细胞核抗原 胰腺肿瘤 免疫组织化学 -
辛伐他汀对支架置入后兔腹主动脉内膜增生的影响
目的 观察辛伐他汀对兔腹主动脉支架置入后内膜增殖的影响.方法 30只新西兰大白兔随机分为对照组和辛伐他汀治疗组.采用含1.5%胆固醇的高脂饮食加腹主动脉内皮剥脱术制作兔腹主动脉粥样硬化模型.内皮剥脱术后第12周实验组和对照组服用阿司匹林25 mg/d,氯吡格雷12.5 mg/d, 3 d后,分别行支架置入术.术后实验组继续服用辛伐他汀5 mg/d,服药至第30天处死动物,取腹主动脉含支架段血管,进行血管壁组织形态学变化观察和检测细胞周期抑制蛋白P27kip1、增殖细胞核抗原(PCNA)在各组的表达量的变化.结果 血管超声发现内皮剥脱术后第10周实验组和对照组腹主动脉均可见有不同程度的粥样硬化斑块和血管内狭窄.组织形态学观察发现服用辛伐他汀的实验组兔腹主动脉支架段内的血管内膜厚度(0.107±0.072 mm,与对照组0.133±0.047 mm比,P=0.006)、新生内膜面积(0.975±0.084 mm2,与对照组1.350±0.043 mm2比,P=0.001)均明显降低,且血管的狭窄程度较轻(20.460%±2.325%,与对照组31.020%±1.904%比,P=0.002).实验组兔腹主动脉支架段内的血管新生内膜中的血管平滑肌细胞(VSMC)的胞核P27kipl蛋白表达量明显升高(7.149±0.305,与对照组2.997±0.310比,t=9.551,P＜0.05),而血管新生内膜中VSMC的胞核PCNA表达量明显降低(着色强度IS为3.003±0.192, 与对照组着色强度IS 5.268±0.475比,t=4.423,P＜0.05).结论 辛伐他汀能明显抑制支架置入术后血管内膜增生.其机制可能为通过上调P27kip1蛋白表达量,使增殖标志物PCNA表达量降低,而对VSMC增殖周期起负调控作用,达到抑制VSMC增殖和新生内膜的增生.
-
雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖的影响
目的 探讨雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响及其可能涉及的途径. 方法 高糖培养GMC,以不同剂量雷帕霉素干预,MTT及流式细胞仪等方法 观察雷帕霉素对细胞增殖和周期的影响,RT-PCR、Western印迹观察细胞Cyclin D1、CyclinE和p27KIP1的变化. 结果 高糖刺激下,GMC增殖明显;雷帕霉素能抑制这一作用,且呈剂量依赖性,并下调Cyclin D1、Cyclin E的基因及蛋白水平,上调p27KIP1的蛋白表达;与对照组相比,高糖组G0/ G1期细胞减少,S期细胞比例增加(P均＜0-05);雷帕霉素干预后,G0/G1期细胞升高,S期细胞比例减少(P均＜0-05). 结论 雷帕霉素可抑制高糖状态下GMC的增殖,且呈剂量依赖性;其可能机制是通过下调Cyclin D1、Cyclin E及上调p27KIP1,参与了G1/S期阻滞.
-
维甲类化合物Ro40-8757对人胰腺癌JF-305细胞株的抗增殖作用及其机制的研究
目的研究维甲类化合物Ro40-8757对人胰腺癌JF-305细胞株的抗增殖作用及其作用机制.方法采用四甲基氮唑蓝实验、流式细胞技术、Western lot蛋白检测技术分别检测Ro40-8757对人胰腺癌JF-305细胞株的增殖、细胞周期和p27蛋白表达的影响.结果 Ro40-8757可明显抑制JF-305细胞株的生长,并呈剂量、时间依赖性作用.用10-5mol/L Ro40-8757处理细胞72h,G1期细胞由56%增加至76%,S期细胞由25%减少至7%,细胞周期阻滞于G1期;用10-5mol/L Ro40-8757处理12h,JF-305细胞p27蛋白表达增加至对照组的2.2倍、24h为1.9倍,48h为1.2倍、72h为0.7倍.结论 Ro40-8757对人胰腺癌JF-305细胞株具有明显的生长抑制作用,并可以导致其G1期细胞周期阻滞和上调p27蛋白表达.上调p27蛋白引起细胞周期阻滞可能是其抗肿瘤的机制之一.
-
自体移植静脉中sonic hedgehog表达水平的动物实验研究
目的 研究细胞周期相关因子sonic hedgehog(SHH)在大鼠自体移植静脉中的表达变化及其与内膜增生的关系.方法 雄性Wistar大鼠24只,8周龄,体质量140 g.建立颈静脉-腹主动脉移植模型,分别于术后14 d、28 d各处死12只大鼠,取材移植血管,免疫组化检测SHH蛋白在移植血管新生内膜中的表达,Western blot法观察SHH及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达,Real-time PCR定量检测SHH mRNA的表达;以对侧颈静脉作为对照.结果 免疫组化结果显示,正常静脉、术后14 d和术后28 d移植静脉SHH+细胞数比例分别为(2.0±0.5)%、(39.4±0.4)%和(63.0±0.3)%,正常静脉与移植静脉差异有统计学意义(P<0.01).Western blot法显示术后SHH表达水平增加并与PCNA表达呈正相关(r=0.808,P<0.01).Real-time PCR结果显示术后14 d组和术后28 d组的SHH mRNA表达增加,分别为对照组含量的9.5和23.8倍.结论 自体静脉移植术后,SHH在新生内膜中高表达并可能与细胞增殖相关.
-
沉默Cdc42对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨Cdc42-shRNA重组质粒对肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响.方法 Cdc42-shRNA重组质粒及空载体转染人肝癌细胞株SMMC-7721,建立Cdc42-shRNA组和对照组U6-control.采用MTT法检测细胞增殖情况,划痕愈合实验测定细胞迁移能力,Transwell法观察细胞的侵袭能力,免疫印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和甲胎蛋白(AFP)表达水平.建立裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型,观察裸鼠成瘤情况,免疫组化法检测裸鼠瘤块中Cdc42的表达情况.组间数据两两比较采用t检验.结果 MTT尿实验结果显示,Cdc42-shRNA2组、U6-contol组和SMMC7721组细胞倍增时间分别为42.7、34.9、35.1h;划痕实验结果显示,转染Cdc42-shRNA2组和U6-control组细胞36 h相对迁移距离分别为(47.1±4.1)％和(86.6±5.3)％,差异有统计学意义(t=-10.21,P＜0.05);Transwell法检测结果显示,Cdc42-shRNA2组24 h穿膜细胞数为(18.2±2.1)个,低于U6-control组的(41.0±3.5)个(t=-9.67,P＜0.05);与对照组相比,Cdc42-shRNA组细胞的AFP和PCNA的蛋白表达水平降低;裸鼠成瘤实验结果显示,接种28 d后Cdc42-shRNA2组平均肿瘤重量分别为(335.1±178.2) mg,低于SMMC-7721组的(925.3±241.4)mg和U6-contol组的(910.5±225.6)mg(t=-4.47、-4.39,P＜0.05).免疫组化结果显示Cdc42蛋白在肝癌细胞质内广泛表达.其中SMMC7721组及U6-control组呈强阳性表达;SMMC7721/Cdc42-shRNA2组呈弱阳性表达.结论 沉默Cdc42表达,可以降低人肝癌细胞种植瘤的增殖、迁移及侵袭能力,抑制肿瘤细胞生长.
-
自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷基因的表达及意义
目的 探讨自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷(hsMAD)2基因的表达,以及hsMAD2基因表达降低与染色体数目异常的相关性.方法 采集2006年3月至2007年3月重庆医科大学附属第一、第二医院妇产科自然流产患者的胚胎组织标本33份,其中流产1次者23份,流产2次及以上者10份;同时采集人工流产患者的胚胎组织标本35份.采用FQ-PCR和蛋白印迹法检测自然流产和人工流产胚胎组织中hsMAD2基因的mRNA和蛋白表达水平;原代培养人工流产胚胎组织并经染色体分析筛选出5例具有正常核型的胚胎细胞,构建hsMAD2基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,转染筛选出来的胚胎细胞以抑制其内源性hsMAD2基因的表达,将细胞分为实验1组(转染重组干扰质粒pshRNA-hsMAD2-1)、实验2组(转染pshRNA-hsMAD2-2)、实验3组(转染pshRNA-hsMAD2-3)、对照1组(未做任何处理)、对照2组(转染pTZU6+1干扰质粒空载体)、无关对照组(转染pshRNA-N1).用蛋白印迹法和定量PCR技术评价shRNA的干扰效果,四甲基偶氮唑蓝比色法测定胚胎细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测胚胎细胞周期的分布,并计算染色体数目的 变化.结果 (1)自然流产1次者、自然流产2次及以上者、人工流产者的胚胎组织中hsMAD2基因mRNA的表达量分别为0.00879±0.00035、0.00901±0.00033、0.00941±0.00026,3者分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);hsMAD2蛋白的表达量分别为0.2791±0.0311、0.0431±0.0020、0.5790±0.0331,3者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达,转染有效干扰质粒后,实验1组胚胎细胞的增殖抑制率为54%,分别与对照1组(4%)、对照2组(3%)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);G2/M期细胞比例实验1组为17.9%,与对照1组(8.2%)、对照2组(8.0%)比较均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);实验1组染色体异常率平均值为30.0%,与对照1组(4.8%)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 hsMAD2基因的表达下调可能是导致患者染色体数目异常、胚胎发育异常乃至自然流产发生的重要原因之一.
-
人巨细胞病毒感染对人胚肺成纤维细胞Cdt1与Geminin因子表达的影响
目的 研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人胚肺成纤维(human embryonic lung fibroblasts,HEL)细胞Cdtl与Geminin因子表达的影响.方法 用血清饥饿法同步化HEL细胞于G0/G1期,流式细胞术测细胞周期;用HCMV感染同步化的HEL细胞作为感染组,同时设模拟感染组为对照组.于感染后12、24、48、72和96 h收获细胞,提取总的RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应检测Cdtl-mRNA和Geminin-mRNA的表达水平.结果 (1)血清饥饿后的HEL细胞82.8%处于G0/G1期.(2)12、24、48和72 h两组HEL细胞Cdtl mRNA表达水平比较均有统计学意义(t值分别为32.231,6.349,-5.846,-1.573;P均为0.000),12和24 h时感染组较模拟感染组明显降低,48和72 h时感染组较模拟感染组明显升高.(3)12、24、48和72 h两组HEL细胞Geminin mRNA表达水平比较均有统计学意义(t值分别为-8.891,-6.483,13.010,10.572;P均为0.000),12和24 h时感染组较模拟感染组明显增加,48和72 h时模拟感染组较感染组明显升高.结论 (1)血清饥饿法将绝大部分细胞同步于G0/G1期,血清饥饿法同步化HEL细胞效果较佳.(2)HCMV能诱导Cdtl及Geminin因子表达异常,使Geminin/Cdtl平衡失调,这可能是HCMV感染导致细胞周期阻滞于G1期的机制.
-
子痫前期胎盘中生长阻滞和DNA损伤45α基因及p38丝裂原活化蛋白激酶的表达
目的 探讨子痫前期胎盘组织中生长阻滞和DNA损伤45α(growth arrest and DNA damage-inducible 45 alpha,Gadd45α)基因和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号分子的表达,及其与血清中可溶性血管内皮生长因子受体-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1,sFlt-1)和可溶性endoglin(soluble endoglin,sEng)的相关性分析.方法 选择2009年9月至2010年3月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的孕妇54例为研究对象,按病情分为子痫前期轻度组20例、子痫前期重度组16例,以足月择期剖宫产孕妇18例为对照组.采用免疫组织化学SP法检测Gadd45α及磷酸化p38 MAPK(phospho-p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白在各组胎盘组织中的定位;实时荧光定量PCR检测各组胎盘组织中Gadd45α mRNA水平;Western印迹法检测各组胎盘组织中Gadd45α蛋白的表达水平、p38 MAPK及p-p38 MAPK的蛋白表达差异;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测各组孕妇血清样本中sFlt-1及sEng的含量,并进行单因素方差及LSD-t检验分析.结果 (1)免疫组织化学检测Gadd45α与p-p38 MAPK蛋白均定位于胎盘滋养层细胞胞质及胞核、血管内皮细胞胞核及少量间质细胞胞核.(2)子痫前期重度及轻度组Gadd45α mRNA相对表达水平(3.33±0.13和2.10±0.11)较正常对照组(1.01±0.18)明显上调,且子痫前期重度组高于轻度组,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)Western 印迹法检测正常对照组、子痫前期轻度组及重度组患者胎盘组织中Gadd45α蛋白表达水平分别为0.22±0.11、0.65±0.15、1.34±0.17;p-p38 MAPK蛋白的表达水平分别为0.32±0.08、0.72±0.12、1.45±0.21,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);p38 MAPK蛋白水平组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).(4)子痫前期轻度组、重度组孕妇血清sFlt-1、sEng水平明显高于正常对照组,且子痫前期重度组高于轻度组,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(5)各组Gadd45α蛋白水平与孕妇血清中的sFlt-1、sEng含量呈正相关(r分别为0.88和0.87,P均＜0.05).结论 Gadd45α在子痫前期患者胎盘组织中的表达明显升高,其可能通过调控p38 MAPK信号转导通路,诱使循环中的sFlt-1、sEng释放增加,从而加重胎盘血管重铸障碍和抑制滋养细胞浸润,参与子痫前期的发病.
关键词： 先兆子痫 核蛋白质类 细胞周期蛋白质类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 血管内皮生长因子受体1 受体 细胞表面 抗原 Cd -
腺病毒介导的p21基因转染肺动脉高压大鼠模型的研究
目的 探讨腺病毒介导的抗增殖性p21基因转染对左向右分流肺动脉高压大鼠模型的肺动脉高压形成的影响.方法 将携带目的 基因的重组腺病毒AdCMV-p21采用脂质体转染法包装、扩增,并稀释成滴度为1.67×108 pfu/L的溶液.将大鼠随机分为空白对照组(n=10)、模型组(n=15)、实验组(n=10)、实验对照组(n=10).模型组和实验组采用套管连接法建立左向右分流肺动脉高压模型,实验组和实验对照组均采用气管吸入法转染AdCMV-p21.测量各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室平均压(mRVP)、右心肥厚指数(RVHI),比较肺高压程度,左肺行免疫组化染色,观察转染效果,右肺HE染色观察肺动脉形态学改变,计算管壁厚度与血管外径比值(WT%).结果 模型组大鼠的mPAP、mRVP、RVHI、WT%较空白对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05),表示肺动脉高压模型建立成功;实验组和实验对照组经免疫组化染色可见大鼠肺血管壁平滑肌细胞核内含棕黄色颗粒,表示转染重组腺病毒成功,实验组转基因阳性细胞率为(42.8±11.6)%,与实验对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);实验组大鼠mPAP为(20.06±3.40)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),mRVP为(22.53±2.53)mm Hg,管壁厚度为(9.64±2.14)μm,WT%为(30.8±3.5)%,与模型组各指标相比水平较低(P＜0.05),与实验对照组和空白对照组相比水平偏高(P＜0.05).结论 腺病毒介导的p21基因可通过气管吸入法成功转染至肺高压大鼠模型的肺动脉平滑肌细胞内,并可在一定程度上抑制肺动脉高压的发展.
-
p21WAF1在小儿肾母细胞瘤组织中的表达及临床意义
目的:探讨p21WAF1在肾母细胞瘤中的表达水平,评价p21WAF1的检测对肾母细胞瘤的诊断和预后判断的应用价值.方法:用免疫组织化学技术检测32例小儿肾母细胞瘤(肿瘤组)和7例小儿非瘤肾组织(对照组)石蜡标本中p21WAF1的表达,分析p21WAF1的表达与肾母细胞瘤组织学分型、临床肿瘤分期和淋巴结转移间的关系.结果:1)p21WAF1在非瘤肾组织中存在基础水平的表达;2)p21WAF1在肾母细胞瘤中的表达与其组织学分型、临床肿瘤分期和淋巴结转移相关.结论:p21WAF1的表达在一定程度上有助于肾母细胞瘤的诊断和预后判断.
-
熊果酸抗肿瘤机制研究进展
目的:总结国内外对熊果酸抗肿瘤机制的研究现状.方法:应用CNBI及中国期刊全文数据库检索系统,以"熊果酸、细胞凋亡、肿瘤"等为关键词,检索1979-01-01～2005-12-30相关熊果酸的文献.纳入标准:1)熊果酸对细胞周期影响的研究;2)熊果酸对凋亡相关基因Caspase蛋白表达影响的研究;3)熊果酸对凋亡相关基因Bcl-2/Bax、Fas/FasL和Survivin表达影响的研究.粗选有70余篇关于熊果酸方面的文章,根据纳入标准,精选42篇文献,后纳入分析29篇文献.结果:熊果酸对结肠癌、黑色素瘤和胃癌等多种细胞系具有抑制作用,并诱导其凋亡.其机制可能是通过影响细胞周期及癌相关基因的表达而实现的.结论:熊果酸具有很好的抑制肿瘤生长作用,并且毒副反应小,来源丰富,有待开发.
-
细胞周期调控因子p27kip1和DI及SPF值在食管癌检测中的意义
目的:研究细胞周期调控因子p27kip1、DNA指数(DI)和细胞周期S期细胞比值(S-phase fraction,SPF)在食管癌组织中共同检测的意义.方法:对48例食管癌组织采用免疫组织化学方法检测其p27kip1蛋白含量的表达;同时,应用流式细胞术检测DI和SPF.结果:48例癌组织p27kip1蛋白高表达率为33.33%(16/48),而癌周正常组织为78.12%(25/32);癌组织的SPF(1.48±0.32)及DI[(19.48±12.35)%]明显高于癌周组织[1.02±0.17,(9.39±5.75)%],P＜0.05;p27kip1低表达组的DI(1.66±0.28)和SPF[(19.78±6.12)%]高于p27kip1高表达组[1.10±0.19,(5.56±5.18)%],P＜0.05.并且随着组织学分级和TNM分期的升高,DI和SPF有增加趋势,在Ⅰ、Ⅱ级之间及Ⅰ、ⅡA期之间的差异有统计学意义,P＜0.05.结论:p27kip1、SPF和DI共同检测可作为辅助临床判断食管癌的生物学行为及预后的指标.
-
慢性粒细胞性白血病中Cyclin D2与Cyclin E及p27 mRNA的表达和细胞周期分布
目的:探讨Cyclin D2、Cyclin E和p27在慢性粒细胞性白血病(CML)发病过程中的作用机制.方法:以RT-PCR和FCM方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中Cyclin D2、Cyclin E和p27 mRNA的表达及细胞周期分布情况,并以正常人骨髓单个核细胞做对照分析.结果:与对照组相比CML患者白血病细胞和K562细胞中Cyclin D2 mRNA的表达增高,tCML＝2.842, PCML＜0.01;tK562＝2.908,PK562＜0.01.Cyclin E mRNA的表达也增高,tCML＝2.109,PCML＜0.05;tK562＝2.193,PK562＜0.05.p27 mRNA的表达降低,tCML＝2.688,PCML＜0.01;tK562＝2.357,PK562＜0.05.G0/G1期细胞减少(tCML＝2.386,PCML＜0.05;tK562＝2.408,PK562＜0.05),而S期细胞增多(tCML＝2.114,PCML＜0.05;tK562＝2.203,PK562＜0.05).结论:Cyclin D2、Cyclin E和p27 mRNA的表达在CML中发生了明显改变,致使G0/G1期缩短,细胞快速通过G1/S转换点进入S期,加速细胞周期进程和细胞增殖,导致CML的发生.
-
CUL4B低表达抑制神经胶质母细胞瘤增生的实验研究
目的 通过抑制Cullin 4B(简称为CUL4B)在神经胶质母细胞瘤U87和U251细胞中的表达,探讨CUL4B在神经胶质母细胞瘤形成中的作用及其机制.方法 体外实验设立3组,分别为空白对照组、Lv-shCon组以及Lv-shCUL4B组;体内实验设立2组,分别为Lv-shCon组和Lv-shCUL4B组.采用CUL4B siRNA构建慢病毒并感染U87和U251细胞株,以下调细胞中CUL4B的表达.通过实时定量PCR(qPCR)和Western blot方法检测各组细胞中CUL4B的表达.以MTT法和细胞集落形成实验分别检测细胞增殖能力和集落形成能力.通过Transwell实验检测细胞的迁移能力.采用流式细胞术进行细胞周期分析.以Western blot方法检测细胞周期和细胞迁移的相关调控因子的表达.建立U87和U251细胞移植瘤裸鼠模型,观察各组动物的瘤体生长情况.结果 qPCR和Westem blot结果表明,与空白对照组和Lv-shCon组相比,Lv-shCUL4B组U87细胞和U251细胞的CUL4B表达均下降(均P＜0.01).MTT实验表明,与空白对照组相比,Lv-shCUL4B组的生长均明显受到抑制,U87细胞的增殖能力降低了63.7％,U251细胞降低了45.5％(均P＜0.01).与空白对照组和Lv-shCon组相比,Lv-shCUL4B组U87和U251细胞集落均数均减少(均P＜0.01).Transwell实验结果显示,U87和U251细胞Lv-shCUL4B组发生迁移的能力均低于空白对照组和Lv-shCon组(均P＜0.01).流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组及Lv-shCon组相比,U87和U251细胞Lv-shCUL4B组处于G1期的比例上升,处于S期的比例下降.与空白对照组和Lv-shCon组相比,U87和U251细胞Lv-shCUL4B组Cyclin D1和MMP-9的表达水平下降(均P＜0.01),pl6(INK4A)和PTEN的表达水平升高(均P＜0.01).体内实验结果表明,与Lv-shCon组相比,Lv-shCUL4B组U87细胞种植裸鼠的肿瘤重量下降57.7％,U251细胞种植裸鼠的肿瘤重量下降75.4％(均P＜0.01).结论 CUL4B低表达可抑制神经胶质母细胞瘤的增生,敲除CUL4B有可能成为靶向治疗神经胶质母细胞瘤的一种新方法.
-
CDCA7L蛋白在脑胶质瘤中的表达及功能研究
目的 分析细胞分裂周期相关7样蛋白(CDCA7L)在脑胶质瘤患者中的表达情况、临床意义和可能参与的生物学过程,并通过实验初步验证该蛋白在脑胶质瘤中的功能.方法 回顾性纳入中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA) mRNA芯片数据库中309例脑胶质瘤患者的临床资料及mRNA芯片数据,分析CDCA7L蛋白的表达特征.同时以TCGA RNA测序数据库中的胶质瘤数据作为独立验证数据集,采用t检验、方差分析和秩和检验分析CDCA7L基因的表达特征.利用Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank检验评价CDCA7L蛋白对胶质瘤患者预后的作用.通过基因本体分析获得CDCA7L蛋白相关基因的功能和可能参与的信号通路.采用Transwell小室检测敲低CDCA7L蛋白表达对胶质瘤细胞株垂直迁移的影响.应用流式细胞术检测敲低CDCA7L蛋白对胶质瘤细胞株凋亡的作用.结果 在世界卫生组织(WHO)Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级脑胶质瘤中,CDCA7L的表达量随着病理级别的增加而逐渐升高[分别为0.053(0.051)、0.083(0.078)和0.133(0.152),均P＜0.05];CDCA7L在异柠檬酸脱氢酶(IDH)野生型脑胶质瘤中的表达水平高于突变型[分别为0.123(0.165)和0.068(0.068),P＜0.001].在胶质瘤中CDCA7L蛋白高表达组患者的累积生存率明显低于低表达组(P＜0.001).在胶质瘤细胞株中敲低CDCA7L抑制细胞的垂直迁移,增加了凋亡细胞的百分比(均P＜0.01).结论 CDCA7L蛋白可能与胶质瘤细胞的细胞周期、细胞分裂、DNA复制、DNA损伤修复和染色体分离等生物学过程和信号通路有关.CDCA7L蛋白可促进脑胶质瘤的发展和肿瘤细胞的迁移,抑制肿瘤细胞的凋亡,可作为患者预后判断的指标及潜在的治疗靶点.
-
喉癌及癌前病变中细胞周期调控基因甲基化的研究
目的 探讨细胞周期调控基因P14,P15及p16在喉癌发生发展中的作用.方法 选取20例喉癌癌前病变(包括喉角化8例、白斑4例和成人复发性喉乳头状瘤8例)、30例喉鳞状细胞癌(声门型)及10例癌旁组织.采用甲基特异性聚合酶链反应(methylationspecific PCR,MSP)检测P14,P15及P16基因启动子区过甲基化.结果 P14,P1 5及P16基因启动子过甲基化发生率在癌前病变中分别为10%(2/20)、15%(3/20)、20%(4/20);在喉癌中分别为30.0%(9/30)、40.0%(12/30)、36.7%(11/30);在癌旁组织中未检测到过甲基化事件.结论 细胞周期调控基因p14,p15及p16启动子区过甲基化发生于喉癌早期病变中,可作为喉癌前病变及早期喉癌筛查的指标之一.
