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膀胱移行细胞癌A激酶锚定蛋白12基因转录表达与其启动子区甲基化状态的相关性
目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中A激酶锚定蛋白12(A-kinase anchoring protein 12,AKAP12)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与临床病理参数之间的关系.方法 用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)和甲基化特异性PCR(MSP)检测30份膀胱移行细胞癌组织及其癌旁组织中AKAP12基因mRNA的表达水平及其启动子区CpG岛甲基化状态.并用亚硫酸盐修饰后PCR产物进行克隆测序.结果 在30份膀胱移行细胞癌患者组织标本中,AKAP12在癌组织中表达下调比率为73.3%(22/30),在病理Ⅱ和Ⅲ级膀胱移行细胞癌中下调比率明显高于Ⅰ级(P=0.02).MSP检测结果显示,膀胱移行细胞癌甲基化比率为53.3%(16/30),且与膀胱移行细胞癌TNM分期(r=0.52,Pn=0.03)和病理分级(r=0.61,Pn=0.01)有明显的相关性.结论 AKAP12基因启动子区出现的异常甲基化可导致其在膀胱移行细胞癌中的表达沉默,且与膀胱移行细胞癌的发生有关.
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小鼠白蛋白增强子在肝癌细胞系中无增强功能
目的:鉴定小鼠白蛋白增强子序列在肝癌细胞系中对白蛋白启动子转录活性的影响.方法:以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,将小鼠白蛋白增强子序列(-10.21～ -8.43kb)之间的不同区段与白蛋白启动子相融合,转染不同组织来源细胞系,用荧光显微镜和流式细胞仪分别对GFP的表达情况进行分析.结果:瞬时转染小鼠肝癌细胞系Hepa 1-6,上游的不同增强子区段均不能增强白蛋白启动子的转录活性,相反,它们都不同程度地下调了启动子的转录活性;稳定转染期,E1E3能极弱地增强启动子的转录活性.稳定转染人肝癌细胞系HepG2,上游的不同增强子区段均能抑制白蛋白启动子的转录活性,导致报告基因不能表达.在非肝脏组织的细胞系中,小鼠白蛋白启动子无转录活性.结论:只使用白蛋白启动子在肝癌细胞系中表达目的基因较同时使用白蛋白启动子和增强子效果会更好.
