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布鲁丝虫属文献资料
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周期型马来丝虫副肌球蛋白基因克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测
目的 克隆周期型马来丝虫副肌球蛋白(BmPmy)基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测.方法 从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,RT-PCR法体外扩增BmPmy基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM T载体,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-T-BmPmy,经测序验证,并进行同源性比较.应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测.结果 RT-PCR扩增出一条约2 640 bp的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与基因库已知的基因序列同源性为99%.经表位预测分析,BmPmy的B细胞表位可能在54～66位、144～152位、770～780位和834～845位氨基酸区域.结论 成功构建了BmPmy重组质粒pGEM-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件.
