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转化生长因子β3对人乳牙牙髓干细胞增殖和矿化能力的影响
背景：目前已有研究报道转化生长因子β超家族对各类干细胞成骨矿化的作用，但转化生长因子β3与肝素联合作用后对人乳牙牙髓干细胞的增殖和矿化能力的作用仍有待研究。目的：观察转化生长因子β3对人乳牙牙髓干细胞增殖和矿化能力的影响。方法：采用酶消化法将人乳牙牙髓分离培养，测定细胞集落克隆形成率，流式细胞术鉴定细胞表面标记物CD146，细胞爬片行Vimentin和STRO1免疫化学染色进行人乳牙牙髓干细胞鉴定；对体外培养的第3代人乳牙牙髓干细胞给予肝素和质量浓度1，5，25μg/L的转化生长因子β3进行干预。MTS法测细胞生长曲线；茜素红染色；碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性的改变。结果与结论：实验所得细胞集落克隆形成率高，细胞表面标记物 CD146呈阳性， Vimentin和STRO1免疫化学呈强阳性，鉴定获得人乳牙牙髓干细胞。MTS结果显示，给予转化生长因子β3刺激人乳牙牙髓干细胞后并无明显的促增殖的作用。碱性磷酸酶活性检测结果显示，转化生长因子β3-肝素联合作用可随着浓度的增加而增强人乳牙牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性，其中质量浓度分别为5，25μg/L 转化生长因子β3和肝素联合作用组与转化生长因子β3单独作用组、肝素单独作用组以及对照组相比显著性升高(P<0.01)。转化生长因子β3-肝素联合作用组的茜素红染色均呈阳性，其中以5μg/L转化生长因子β3-肝素联合作用组染色强。结果证实，转化生长因子β3与肝素联合作用可促进人乳牙牙髓干细胞矿化能力。
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基质细胞衍生因子1对内源性神经干细胞的趋化迁移作用
背景：目前研究表明，基质细胞衍生因子1在参与趋化迁移内源性神经干细胞中起着非常重要的作用，但其具体迁移机制尚不明确。
目的：观察外源性基质细胞衍生因子1对大鼠内源性神经干细胞的趋化迁移作用及海马区神经干细胞的激活增殖情况。
方法：通过向SD大鼠海马区上大脑皮质内注射外源性基质细胞衍生因子1(注射量为5μL，质量浓度为500μg/L)建立动物模型，于3，7，14，21 d后灌注取脑，通过石蜡切片免疫组织化学检测大鼠皮质内注射区及海马区nestin阳性细胞表达情况，并设实验对照组与空白对照组。
结果与结论：石蜡切片免疫组织化学显示：实验组注射区周围及海马区nestin表达阳性细胞的数量随时间推移逐渐增多，3，7 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞少量表达，14 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞进一步增多，并向注射区形成明显的迁移趋势，21 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞更多。实验对照组及空白实验组未见上述表现。结果表明外源性基质细胞衍生因子1可能诱导海马区神经干细胞的增殖分化，参与内源性神经干细胞的趋化迁移过程。 -
体外扩增传代对骨髓间充质干细胞归巢相关因子的影响
背景：间充质干细胞移植后在体内的归巢能力，会随着供体细胞在体外的培养传代而下降，从而严重影响了间充质干细胞对靶组织的修复作用。
目的：探讨体外扩增传代对人骨髓来源间充质干细胞归巢相关因子的影响。
方法：应用 Ficol 密度梯度离心法将间充质干细胞自骨髓中分离出来，利用其贴壁生长的特性加以纯化，在常规培养条件下培养至第7代，观察原代及第3，5，7代细胞的形态学特点。采用MTT法检测第3，5，7代间充质干细胞的生长增殖特性，并绘制生长曲线。Real-time PCR法检测第3，5，7代间充质干细胞中归巢相关因子CXCR4、CXCR6、CXCL12(SDF-1)、CD44的表达，以2-△△Ct计算各代细胞目的基因的相对表达量，比较不同代次间充质干细胞中各细胞归巢因子表达的差异。
结果与结论：采用密度梯度离心法自骨髓获得单个核细胞，将其贴壁培养传至第3代，可获得纯度较高的间充质干细胞。其在体外的增殖能力较强，但随着传代扩增次数增加，形态从细长梭形逐渐缩短变宽，增殖速率、总体扩增倍数以及CXCR4、CXCR6、CXCL12、CD44等细胞归巢因子的表达亦随传代培养而呈下降趋势。结果显示，间充质干细胞的归巢能力随扩增传代而逐渐下降，其机制可能与CXCR4、CXCR6、CXCL12、CD44等归巢相关因子在间充质干细胞中的表达水平下降有关。 -
转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞的分化
背景：颞下关节盘软骨缺损修复在口腔临床上仍然是较大的挑战，具有多向分化潜能的脂肪间充质干细胞为成纤维软骨类组织修复带来了希望。目前使用转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞分化的研究很少。
目的：观察转化生长因子β3对脂肪间充质干细胞生长形貌及向成纤维软骨分化的影响。
方法：采用转化生长因子β3诱导SD大鼠脂肪间充质干细胞，观察成纤维软骨细胞分化的细胞形态，组织学和免疫荧光染色等方法检测脂肪间充质干细胞产生的细胞外基质Ⅰ，Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达情况，评价脂肪间充质干细胞作为纤维软骨组织工程种子细胞的可行性。
结果与结论：倒置荧光显微镜观察结果显示脂经转化生长因子β3生长因子诱导之后，细胞有明显的聚集生长现象，形态呈多角形、多边形，细胞外基质分泌增多。阿利新蓝染色结果表明，经转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞显示明显的深蓝色，表明脂肪间充质干细胞合成了大量的糖胺聚糖。免疫染色结果表明，在转化生长因子β3诱导下，脂肪间充质干细胞合成Ⅰ，Ⅱ型胶原细胞外基质。提示转化生长因子β3可诱导脂肪间充质干细胞向成纤维软骨样细胞分化，也意味着脂肪间充质干细胞具有作为工程化纤维软骨种子细胞的潜能。 -
脊髓损伤后运动功能恢复中粒细胞集落刺激因子的作用
背景：近期有文献报道了粒细胞集落刺激因子在脑梗死模型及急性脊髓损伤模型中的神经保护作用，但应用的动物模型均非击打模型，与人体脊髓损伤的病理生理过程存在一定差距。
目的：观察粒细胞集落刺激因子对Al en’s脊髓损伤大鼠模型运动功能恢复的影响。
方法：使用改良Al en’s法制作T10节段Wistar大鼠脊髓损伤撞击模型，随机分为2组，粒细胞集落刺激因子组应用粒细胞集落刺激因子治疗，vehicle组注射等剂量PBS。于造模后第1，7，14，21，28，35天分别应用BBB运动功能评分法和Rivlin斜板实验评估大鼠运动功能，造模后第7，14，21，28，35天使用网格步行实验评估大鼠四肢肌力。
结果与结论：所有大鼠造模后均出现后肢瘫痪症状。造模后第7，14，21，28，35天粒细胞集落刺激因子组BBB运动功能评分及Rivlin斜板实验评分高于vehicle组(P<0.05-0.01)，造模后第14，21，28，35天粒细胞集落刺激因子组网格行走实验错误数低于vehicle组(P<0.05-0.01)，结果显示，粒细胞集落刺激因子治疗后大鼠运动功能及四肢肌力恢复情况均优于vehicle组。提示粒细胞集落刺激因子疗法对脊髓损伤起到了积极的治疗效果。 -
转化生长因子β1与骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化
背景：转化生长因子β1是一种具有调控细胞增殖、分化、黏附和凋亡，在生物发育及组织修复过程中具有重要作用的细胞因子。
目的：观察转化生长因子β1对诱导大鼠骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的影响。
方法：取SD大鼠四肢骨骨髓，分离培养骨髓间充质干细胞，应用转化生长因子β1对第2代骨髓间充质干细胞定向诱导，以未诱导的骨髓间充质干细胞做对照。
结果与结论：①加入转化生长因子β1诱导后的骨髓间充质干细胞培养7d时，相差显微镜观察多紧密平行排列生长，呈类长柱形，少数呈不规则形；14 d后开始出现细胞间连接，形成数个相互连接的长柱形，28 d时骨髓间充质干细胞体积则变小，排列紧密呈条梭状。②转化生长因子β1诱导4周后，免疫细胞化学技术检测骨髓间充质干细胞均可见结蛋白、原肌球蛋白及间隙连接蛋白43的阳性细胞，诱导组各指标的积分吸光度值均显著高于对照组(P均<0.01)。③诱导组心肌肌钙蛋白I呈阳性表达。根据心肌肌钙蛋白I阳性率计算出的心肌样细胞转化率在诱导组显著高于对照组(P=0.000)。④荧光免疫双标技术检测结果显示，经转化生长因子β1诱导4周的骨髓间充质干细胞结蛋白及心肌肌钙蛋白I蛋白均定位于细胞质且呈共表达。⑤透射电镜结果显示，分化细胞的细胞质内可见到平行排列的肌丝，并富含线粒体、糖原和核糖体。提示骨髓间充质干细胞在转化生长因子β1诱导下可定向分化为心肌样细胞。
