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人乳牙牙髓干细胞体外表达和分泌胶质细胞源性神经营养因子的研究
目的 研究人乳牙牙髓干细胞(SHED)表达和分泌胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的能力及规律,为进一步探讨SHED治疗帕金森病的作用机制提供依据.方法 通过酶消化法体外分离培养人乳牙牙髓中的干细胞,当传代至第3代时,加入神经干细胞的特殊培养基Neurobasal A和细胞因子进行神经球诱导培养,通过Real-Time PCR、免疫荧光和ELISA等方法,分别从mRNA和蛋白水平检测体外培养SHED和神经球中GDNF的表达.结果 Real-Time PCR检测结果显示,在mRNA水平,SHED和神经球中都有GDNF的表达.在蛋白水平,免疫荧光结果可见SHED和神经球中都有GDNF的表达;采用ELISA法在培养第3天的SHED培养液和神经球的培养上清中均可检测到GDNF,并随着时间的延长,培养液中GDNF浓度明显升高.结论 SHED具有表达和分泌GDNF的能力.
关键词： 人乳牙牙髓干细胞 神经球 胶质细胞源性神经营养因子 -
转化生长因子β3对人乳牙牙髓干细胞增殖和矿化能力的影响
背景：目前已有研究报道转化生长因子β超家族对各类干细胞成骨矿化的作用，但转化生长因子β3与肝素联合作用后对人乳牙牙髓干细胞的增殖和矿化能力的作用仍有待研究。目的：观察转化生长因子β3对人乳牙牙髓干细胞增殖和矿化能力的影响。方法：采用酶消化法将人乳牙牙髓分离培养，测定细胞集落克隆形成率，流式细胞术鉴定细胞表面标记物CD146，细胞爬片行Vimentin和STRO1免疫化学染色进行人乳牙牙髓干细胞鉴定；对体外培养的第3代人乳牙牙髓干细胞给予肝素和质量浓度1，5，25μg/L的转化生长因子β3进行干预。MTS法测细胞生长曲线；茜素红染色；碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性的改变。结果与结论：实验所得细胞集落克隆形成率高，细胞表面标记物 CD146呈阳性， Vimentin和STRO1免疫化学呈强阳性，鉴定获得人乳牙牙髓干细胞。MTS结果显示，给予转化生长因子β3刺激人乳牙牙髓干细胞后并无明显的促增殖的作用。碱性磷酸酶活性检测结果显示，转化生长因子β3-肝素联合作用可随着浓度的增加而增强人乳牙牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性，其中质量浓度分别为5，25μg/L 转化生长因子β3和肝素联合作用组与转化生长因子β3单独作用组、肝素单独作用组以及对照组相比显著性升高(P<0.01)。转化生长因子β3-肝素联合作用组的茜素红染色均呈阳性，其中以5μg/L转化生长因子β3-肝素联合作用组染色强。结果证实，转化生长因子β3与肝素联合作用可促进人乳牙牙髓干细胞矿化能力。
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转化生长因子β3诱导人乳牙牙髓干细胞向成牙本质样细胞的分化
背景：转化生长因子β3与肝素联合作用后对人乳牙牙髓干细胞的增殖和矿化能力的作用目前仍有待研究。目的：探讨转化生长因子β3对人乳牙牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化的作用。方法：采用酶消化法将人乳牙牙髓分离培养，获得人乳牙牙髓干细胞；对体外培养的第3代人乳牙牙髓干细胞单独加入25μg/L重组转化生长因子β3、10 U/mL 肝素，或者二者联合进行培养；通过Q-PCR和Western-blotting 方法，分别检测乳牙牙髓干细胞中牙本质涎磷蛋白基因及牙本质涎蛋白表达的情况；通过碱性磷酸酶试剂盒检测乳牙牙髓干细胞碱性磷酸酶活性的改变。结果与结论：乳牙牙髓干细胞在诱导体系中生长状态良好。25μg/L转化生长因子β3+10 U/mL肝素联合作用组的碱性磷酸酶活性明显增强，与转化生长因子β3单独作用组、肝素单独作用组以及对照组相比差异有显著性意义(P <0.01)；转化生长因子β3+肝素联合作用组的茜素红染色呈强阳性，Q-PCR和Western-blotting结果均显示，转化生长因子β3+肝素联合作用组的牙本质涎磷蛋白 mRNA 和蛋白表达均明显升高。结果可见在转化生长因子β3与肝素联合作用的诱导下，可促进乳牙牙髓干细胞分化为成牙本质样细胞。
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人乳牙牙髓干细胞分化的研究进展
人乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)是口腔来源的干细胞,因高度增殖能力和多分化的潜能,而成为再生医学的热点.本文就其多方向分化潜能进行综述.1 SHED的发现及其基本生物学特性2000年,Gronthos等[1]利用酶消化的方法,将人类健康第三磨牙的牙髓制成单细胞悬液并培养,得到具有细胞克隆能力和高度增殖能力的细胞,将其命名为牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,DPSCs).该细胞具有干细胞能力,包括自我更新的能力及多分化能力,可分化为成牙本质细胞、脂肪细胞、神经细胞等.
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人乳牙牙髓干细胞对干燥综合征患者CD4+T细胞的免疫抑制效应
目的 探讨在体外人乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)及其联合IL-6抗体对干燥综合征患者(Sj(o)gren syndrome,SS)外周血活化的CD4+T细胞的免疫抑制效应.方法 培养并鉴定SHED;流式细胞术检测健康者和SS患者外周血CD4+T细胞中Th1、Th2、Th17、Treg及Tfh的比例;将健康者和SS患者PBMC各自单独培养或与SHED共培养,ELISA法检测培养上清液中IL-6浓度,在各组中添加或不添加IL-6抗体,72 h后流式细胞术检测CD4+T细胞增殖情况.结果 SS患者外周血CD4+T细胞中Th17及Tfh比例较健康者升高(P＜0.05);健康者与SS患者共培养组的Th17比例显著降低(P ＜0.001),SS患者共培养组的Treg比例有所升高(P＜0.05);在SS患者共培养组中添加IL-6抗体,可显著降低CD4+T细胞中Th2的比例(P＜0.05).结论 SHED可抑制SS患者CD4+T细胞的增殖,降低SS患者CD4+T细胞中Th17的比例且增加Treg的比例;IL-6抗体可降低与SHED共培养的SS患者PBMC中CD4+T细胞Th2亚型比例.
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CM-DiI体外标记人乳牙牙髓干细胞的可行性研究
目的:筛选CM-DiI用于人乳牙牙髓干细胞标记的佳浓度,并对标记后细胞的生物学行为进行评价,为下一步细胞活体移植和体内示踪打下基础.方法:酶解组织块法培养人乳牙牙髓细胞并纯化,免疫组化鉴定细胞来源,进行细胞体外多向诱导分化能力实验.将第3代细胞分别使用浓度2 mg/L、3 mg/L及4 mg/L的CM-DiI进行标记,比较标记后细胞乳酸脱氢酶释放率及细胞增殖情况,并观察经体外多次传代后细胞荧光的表达情况.结果:酶解组织块法可获得成集落状生长的人乳牙牙髓细胞;免疫组化确定细胞为间充质而非造血来源;细胞具有成脂、成骨及成牙本质等多向分化能力.3种标记物浓度均未对细胞乳酸脱氢酶释放及细胞增殖产生显著的不利影响;随体外多次传代,标记荧光强度逐渐减退.结论:CM-DiI操作简便、染色速度快,可有效的标记人乳牙牙髓干细胞,其中3 mg/L的标记浓度细胞毒性极小,标记效率高,在体外多次传代后荧光信号仍能稳定表达.
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转化生长因子β3联合肝素在人乳牙牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化中的作用
目的：探讨转化生长因子β3（TGF-β3）诱导人乳牙牙髓干细胞（SHED）向成牙本质样细胞分化的能力。方法：采用酶消化法将人乳牙牙髓分离培养，获得SHED；对体外培养的第3代SHED 分别单独加入25 ng/mL 的重组 TGF-β3，或与肝素联合进行培养；通过 Q-PCR 和 Western-blotting 方法，分别观察SHED 表达成牙本质细胞特异性标志物-牙本质涎磷蛋白（ DSPP ）基因及其基因表达产物-牙本质涎蛋白（ DSP ）的情况；通过碱性磷酸酶（ AKP ）试剂盒检测 SHED 的 AKP 活性的改变；细胞爬片行免疫化学染色和茜素红染色。结果：SHED 在诱导体系中生长状态良好。25 ng/mL TGF-β3联合10 U/mL 肝素作用组的AKP 活性明显增强，与 TGF-β3单独作用组、肝素单独作用组以及对照组相比差异具有统计学意义（ P ＜0．01）；TGF-β3联合肝素作用组的茜素红染色呈强阳性，Q-PCR 和 Western-blotting 结果均显示，该组的DSPP表达在mRNA水平和蛋白质水平上均明显升高。结论：在TGF-β3与肝素联合作用的诱导下，可促进SHED分化为成牙本质样细胞。
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大豆黄素促脱落乳牙干细胞成骨的作用及其机制
目的 探讨大豆黄素促进脱落乳牙干细胞(SHED)成骨的作用及其机制.方法 对体外培养的第3 代SHED 分别用100、10 和1 μmol·L-1的大豆黄素培养基进行培养,以普通培养基作为对照,于3、6、9 d 检测其碱性磷酸酶(AKP)活性,于7、14、21 d检测其骨钙蛋白(OC)的质量,以RT-PCR 检测其3、6、9 d 的核心结合因子(cbf)-α1mRNA 的表达.结果 SHED 经大豆黄素干预培养3 d,10 μmol·L-1的大豆黄素显著提高了细胞内AKP的质量(与对照组比较,P<0.05);培养6～9 d,3个浓度的大豆黄素均显著提高了AKP的表达量(与对照组比较,P<0.001).中高浓度(10和100 μmol·L-1)的大豆黄素可在成骨分化的中期(14 d)显著提高SHED内OC的质量(与对照组比较,P<0.001),21 d 时各浓度的大豆黄素均可促进OC的表达(与对照组比较,P<0.001).SHED 培养3 d,10 和100 μmol·L-1大豆黄素明显上调其cbf-α1mRNA 的表达,1 μmol·L-1的大豆黄素部分上调了cbf-α1mRNA的表达;在第6和9天,1、10和100 μmol·L-1的大豆黄素均促进了cbf-α1mRNA 的表达,对照组在各时间点均呈阴性.结论 大豆黄素可促进SHED向成骨方向分化,其机制可能与上调cbf1基因表达有关.
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人乳牙牙髓干细胞在干细胞治疗中的应用
乳牙牙髓干细胞(SHED)是牙源性干细胞的一种,属外胚间充质干细胞.作为一种理想的干细胞来源,SHED在干细胞治疗中有良好的应用前景.本文阐述了SHED的生物学特征及其在干细胞治疗中的优势,探讨了SHED在组织再生和修复中发挥的多向分化潜能、细胞分泌功能和免疫调节功能等方面的功能作用.此外,本文还介绍了SHED在各系统、器官疾病治疗中的临床应用,重点阐述了用SHED进行干细胞移植在牙髓—牙本质再生、颌骨再生、神经系统疾病治疗和免疫系统疾病治疗方面的研究进展.
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大豆苷元对人乳牙牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响
目的 探讨大豆苷元对人乳牙牙髓干细胞(SHED)增殖和分化的影响.方法 对体外培养的第3代SHED用浓度分别为0.1、1、10、100 μM的大豆苷元培养基进行培养,采用MTT法检测细胞生长曲线,通过碱性磷酸酶(ALP)试剂盒、放免法和TGF-β1 Elisa试剂盒检测大豆苷元对SHED碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OCN)以及TGF-β1表达的影响.结果 0.1 μM的大豆苷元能够显著促进SHED的增殖,而高浓度(100μM)的大豆苷元则对SHED的增殖具有明显的抑制作用.大豆苷元剂量依赖性地促进了SHED ALP、OCN和TGF-β1的表达.结论 大豆苷元对SHED的增殖和成骨分化具有促进作用,其促成骨分化机制可能与增加TGF-β1表达有关.
