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日本血吸虫原肌球蛋白编码基因克隆和表达
目的克隆和表达日本血吸虫大陆株原肌球蛋白(tropomyosin,TM)编码基因.方法应用RT-PCR方法体外扩增日本血吸虫原肌球蛋白编码基因,并采用T载体对该PCR产物直接进行克隆并用于核苷酸序列的测定.将目的基因亚克隆入原核表达载体pQE30,以IPTG诱导重组原肌球蛋白的表达.结果 PCR扩增产物约823bp,符合预计大小,并成功地克隆入T载体,对其中一克隆pGSjcTM12的插入片段的核苷酸序列分析表明,该序列和推测的氨基酸序列与曼氏血吸虫原肌球蛋白基因分别有91.1%和98.1%的同源性.该编码基因亚克隆入原核表达载体pQE30获得高效表达,分子量约32 kDa,并能被日本血吸虫天然原肌球蛋白免疫血清特异识别.结论日本血吸虫原肌球蛋白编码基因克隆和原核表达成功.
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日本血吸虫(大陆株)23kD分子(SjC23)大亲水肽段(HD)在PGEX-5X-1中表达
应用聚合酶链反应技术,从日本血吸虫(大陆株)23kD分子基因中扩增出其大亲水肽段的DNA序列,将此片段插入到表达载体pGEX-5X-1中进行表达,经IPTG诱导产生分子量约33.5kD的融合蛋白(GSTHD)。用Factor Xa对融合蛋白进行切割获得纯化的大亲水肽段,Western blotting分析表明,融合蛋白及大亲水肽段均能为血吸虫病人血清识别。
关键词: 日本血吸虫(大陆株) 大亲水肽段 重组表达