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阻断传播疫苗文献资料
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恶性疟原虫11.1基因3个重复片段的克隆及表达
目的克隆和表达恶性疟原虫(Pf)11.1基因产物中的3个重复片段3R、6R和9R.方法利用设计的引物从培养的恶性疟原虫3D7株的基因组DNA中扩增出3个重复片段.PCR产物被克隆入pT7载体中以进双向测序.测序结果用GENETYX-MAC软件进行分析.扩增的片段亚克隆入pET32a(+)或pET32b(+),并由IPTG诱导在大肠杆菌B121中表达重组蛋白.结果用PCR方法成功地扩增出3R、6R和9R片段,大小分别为552、630和444 bp.测序结果显示,3D7株的Pf11.1基因比Palo Alto株的Pf11.1基因多4个3AA和1个6AA重复单元,两原虫株的3R和6R片段的同源性分别92.8%和95.1%.扩增出的9R片段含有13个9AA重复单元.在BL21菌株中表达出三个重组蛋白,分子量分别为45、60和42 kDa.结论用PCR方法分别获得3R、6R和9R重复片段并在大肠杆菌中成功表达.3D7株的Pfl1.1基因与Palo Alto株具有高度同源性.
