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胶质母细胞瘤RTK/PI3K信号通路研究进展
胶质母细胞瘤（Glioblastoma，GBM）是成人常见且恶性程度高的原发性颅内肿瘤，它弥漫地浸润性侵袭瘤周组织，而且对放化疗治疗不敏感，从而增加了治疗的难度。近年来分子靶向治疗成为研究热点，多项研究表明酪氨酸激酶受体（ receptor tyrosine kinase ， RTK ）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）信号通路是参与GBM发生发展的核心途径之一。因此，本文将综述近年来关于RTK/PI3K信号通路靶向治疗胶质母细胞瘤的研究进展。
关键词： 胶质母细胞瘤 受体蛋白质酪氨酸激酶类 1-磷脂酰肌醇3-激酶 信号通路 -
血浆可溶性受体酪氨酸激酶Mer和Tyro3与急性冠脉综合征的相关性研究
目的 调查急性冠脉综合征(ACS)患者血浆生长抑制特异性蛋白6(Gas6)系统可溶性受体Axl、Mer和Tyro3的浓度,在实施冠状动脉介入手术(PCI)后的变化.方法 病例对照研究.收集2011年至2012年,北京大学人民医院心脏中心66例急性冠脉综合征患者为ACS组[平均年龄(63.5±14.5)岁,男40例,女26例],42例稳定型冠状动脉性心脏病患者为对照组[平均年龄(60.8±18.3)岁,男23例,女19例].ACS患者在PCI术前及PCI后1h、4h、24 h采集柠檬酸钠抗凝全血,稳定型冠状动脉性心脏病患者于门诊采血.分离血浆,ELISA试剂盒检测ACS患者血浆Gas6,可溶性受体Axl(sAxl)、可溶性受体Mer(sMer)、可溶性受体Tyro3(sTyro3).ELISA试剂盒检测凝血酶抗凝血酶复合物(TAT).ACS组与对照组数据比较,分析它们和临床生化指标及TAT的相关性.相关性分析采用Spearman's rank相关性检验,组间差别性检验使用Mann-Whitney U检验.结果 ACS组sMer(中位数28.02 μg/L,95％ CI 14.48～ 60.47)高于对照组(中位数14.91 μg/L,95％ CI7.87 ～25.86),U=42.5,P＜0.05.ACS组sTyro3(中位数16.91 μg/L,95％CI5.81～28.52)高于对照组(中位数9.53 μg/L,95％CI4.17～24.56),U=127.0,P＜0.05.PCI术后1～24 h其浓度变化无统计学意义,P值均＞0.05.sMer的浓度和凝血酶生成指标(TAT)相关(r=0.9218,P=0.014).结论 ACS患者血浆存在高水平可溶性受体酪氨酸激酶sMer和sTyro3,其浓度于PCI术后24 h变化无统计学意义.
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数字PCR技术在NSCLC患者EGFR-TKI靶向治疗检测中的应用
表皮生长因子受体（ EGFR）突变检测对非小细胞肺癌患者（ NSCLC） EGFR酪氨酸激酶抑制剂（ TKI）分子靶向治疗方案的选择具有重要参考意义。数字PCR作为新一代分子检测技术，因其独特原理而具有高灵敏性、高特异性、能够实现绝对定量的优势，联合外周血循环肿瘤DNA进行检测可真正实现肿瘤“液体活检”。使用数字PCR技术可准确检测血浆EGFR突变信息，更有助于精确筛选TKI靶向治疗获益人群，及时监测疗效，早期发现耐药。（中华检验医学杂志，2016，39：154-157）
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受体酪氨酸激酶基因及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达及意义
目的 探讨RON mRNA及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达与临床意义。方法选择63例膀胱移行上皮癌(TCCB)、7例膀胱内翻性乳头状瘤(IPB)、9例膀胱低度恶性潜能尿路上皮瘤(PUNLMP)患者和12例外伤性膀胱破裂且经病理证实无肿瘤细胞的正常膀胱黏膜组织患者。其中，病理Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级患者分别为30、15和18例，临床Tis+ T1和T2 +T3 +T4期患者分别为44例和15例；用实时荧光定量RT-PCR检测其RON mRNA相对表达量，以GAPDH mRNA为内标物，用RONmRNA/GAPDH mRNA比值表示RON mRNA相对表达量；用RT-PCR检测RON mRNA选择性剪切形成的变异体；用测序检测PCR产物中可能存在的变异体，并分析变异体在不同组织间及TCCB中不同病理分级及临床分期间阳性表达率的差异。结果RON mRNA在TCCB、IPB、PUNLMP及正常膀胱黏膜组织中均见阳性表达，其RON mRNA/GAPDH mRNA比值分别为4.9×10-3(1.8×10-3 ～1.0× 10-2)、3.8×10-3（2.4×10-3～1.7×10-2）、4.9×10-3（1.7×10-3～1.1 ×10-2）、1.0×10-3(4.5×10-4 ～2.8×10-3)，且不同组织间的表达差异均有统计学意义(x2K-W= 17.278，P＜0.05)；RON mRNA/GAPDH mRNA比值在TCCB病理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为3.7×10-3(1.3×10-3 ～7.5×10-3)、4.9×10-3（1.9X10-3～1.1 ×10-2）、8.9×10-3(2.7×10-3～8.0×10-2)，且差异有统计学意义(x2K-W=7.341,P＜0.05)；RON mRNA/GAPDH mRNA比值在TCCB临床Tis+ T1、T2 +T3 +T4期分别为3.5×10-3（1.2×10-3 ～7.7×10-3）、9.7× 10-3（2.9×10-3～5.3 ×10-2），差异也有统计学意义（Z= -2.306,P＜0.05）。但正常膀胱黏膜组未发现RON mRNA变异体，而在膀胱肿瘤组织中外显子11剪切缺失(E11△)的阳性表达率为70％( 55/79)。在TCCB、IPB、PUNLMP中E11△阳性表达率分别为71％ (45/63)、57％ (4/7)、67％ (6/9)，而不同病理组织中的E11△阳性表达率差异无统计学意义(x2=0.620,P＞0.05)；在不同TCCB病理分级和临床分期中其阳性率差异亦无统计学意义（Z值分别为0.221、0.538，P均＞0.05）。发现1种正常黏膜组织中没有的新变异体，即RON基因外显子的3 476～3 539 bp剪切缺失形成的变异体(E3 476 ～3 539△)。膀胱肿瘤组织中E3 476～3 539△的阳性表达率为56％ (44/79)，在TCCB、IPB、PUNLMP中E 3 476 ～3 539△的阳性表达率分别为57％( 36/63)、43％ (3/7)、56％ (5/9)，但各病理组织间的阳性率差异无统计学意义(x2=0.517，P＞0.05)；在TCCB不同病理分级和临床分期中其阳性率分别为40％ (12/30)、67％ (10/15)、78％ (14/18)、48％(21/44)、80％ (12/15)，差异有统计学意义（Z值分别为7.285、5.041,P均＜0.05）。结论 RONmRNA的表达与TCCB病理分级及临床分期相关，RON可能在TCCB发生发展的过程中发挥重要作用；在正常膀胱黏膜中未见RON mRNA剪切形成的变异体，而在膀胱肿瘤组织中都有不同程度的表达；E 3 476～3 539△的表达与TCCB病理分级及临床分期相关，RON mRNA变异体可能参与了膀胱肿瘤的发生。
关键词： 膀胱肿瘤 受体蛋白质酪氨酸激酶类 选择性剪接 -
脑卒中后抑郁大鼠海马小胶质细胞脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶受体B蛋白的表达
目的 研究脑卒中后抑郁(PSD)大鼠海马小胶质细胞脑源性神经营养因子(BDNF)及其高亲和力受体酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)蛋白的表达情况.方法 将40只健康成年SD大鼠随机分为正常组、抑郁组、脑卒中组及PSD组,每组10只.用线栓法建立局灶性脑缺血模型;用慢性不可预见的中等应激刺激结合孤养法建立大鼠慢性应激抑郁模型.各组造模后第29和57天用免疫荧光双标染色法测大鼠海马OX42标记的小胶质细胞BDNF及TrkB表达情况.结果 造模后第29天PSD组海马BDNF和TrkB阳性细胞吸光度(A)值分别为83.35±5.74和82.35±5.74,显著低于正常组、抑郁组和脑卒中组(P＜0.05);抑郁组A值较脑卒中组增多(141.23±9.16 vs133.31±7.89;141.23±8.07 vs128.62±6.92,P＜0.05).造模后第57天PSD组海马BDNF和TrkB阳性细胞A值分别为81.63±7.19,74.43±7.42,显著低于正常组、抑郁组和脑卒中组(P＜0.05);脑卒中组A值较正常组及抑郁组低(93.36±7.56 vs 124.11±11.39、116.65±10.55,87.14±6.56 vs 112.58±10.99、108.05±10.57,P＜0.05).结论 海马小胶质细胞在PSD发病过程中有重要意义,可能通过减少BDNF及TrkB的表达发挥作用.
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脑卒中后抑郁大鼠丘脑脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶受体B蛋白的表达变化
目的 探讨脑卒中后抑郁(PSD)大鼠丘脑脑源性神经营养因子(BDNF)及其高亲和力受体酪氨酸激酶受体B(TrkB)蛋白的表达变化,及其在PSD发病机制中的作用和意义.方法 选择成年SD大鼠24只,随机分为对照组、抑郁组、脑卒中组和模型组,每组6只.利用线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,加以慢性不可预见的中等应激刺激和孤养方法造成PSD动物模型,应用免疫组织化学方法检测各组大鼠造模后第29天丘脑BDNF和TrkB免疫阳性细胞数的表达变化.结果 模型组BDNF阳性细胞表达较对照组和抑郁组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组TrkB阳性细胞表达较对照组、脑卒中组和抑郁组明显减少,差异有统计学意义[(9.00±2.12)个 vs(41.22±11.91)个、(17.22±5.76)个和(33.67±8.32)个,P＜0.01].结论 PSD大鼠丘脑BDNF及其高亲和力受体TrkB蛋白表达减少可能与PSD发病机制有相关性.
关键词： 卒中 抑郁 丘脑 脑源性神经营养因子 受体蛋白质酪氨酸激酶类 -
血管生成因子对心脏微血管内皮细胞神经调节蛋白1表达和分泌的影响
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、血管形成蛋白1(Ang-1)和Ang-2对人源性心脏微血管内皮细胞(HCMEC)的神经调节蛋白1(NRG-1)表达和NRG-1β分泌的影响.方法 培养HCMEC至4～5代,在正常培养条件下,将其分为正常组、VEGF处理组、Ang-1处理组和Ang-2处理组,与HCMEC共孵育24 h,收集细胞和培养液,用蛋白印迹法和细胞酶联免疫吸附法分别检测NRG-1蛋白表达和NRG-1β分泌.蛋白印迹法检测酪氨酸激酶受体(ErbB2、ErbB3和ErbB4)蛋白表达.结果 ErbB2、ErbB3和ErbB4均表达于HCMEC.与正常组比较,VEGF处理组和Ang-1处理组NRG-1[(1.44±0.05)、(1.18±0.04) vs (1.05±0.06)]表达和NRG-1β[(534.07±6.89)ng/L、(505.19±22.82)ng/L vs (380.71±14.96) ng/L]分泌显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05),而Ang-2处理组NRG-1表达和NRG-1β分泌显著降低(P＜0.05).结论 VEGF和Ang-1显著增加HCMEC的NRG-1表达和NRG-1β分泌,Ang-2显著减少HCMEC的NRG-1表达和NRG-1β分泌.
关键词： 血管内皮生长因子类 内皮细胞 神经调节蛋白1 受体蛋白质酪氨酸激酶类 -
白蛋白治疗对大鼠脑缺血后海马血管内皮生长因子及其受体1的影响
目的 探讨人血白蛋白治疗对大鼠脑缺血早期海马血管内皮生长因子(VEGF)及fam样酪氨酸激酶受体1(flt-1)表达的影响.方法 雄性SD大鼠40只,采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组10只、生理盐水组15只和白蛋白组15只.采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白水平,RT-PCR检测脑缺血再灌注后6、24、48 h大鼠海马VEGF和flt-1 mRNA表达,免疫组织化学和Western blot法检测脑缺血再灌注24 h海马VEGF蛋白表达.结果 与生理盐水组比较,白蛋白组大鼠神经功能缺损评分于脑缺血再灌注后24、48 h明显降低(P＜0.05),海马VEGF mRNA和flt-1 mRNA表达于脑缺血再灌注后6、24 h明显降低(P＜0.05,P＜0.01),海马VEGF蛋白表达于脑缺血再灌注后24 h明显降低(P＜0.05).结论 白蛋白治疗可下调脑缺血早期海马VEGF和flt-1 mRNA表达,降低海马VEGF蛋白表达水平,改善神经功能缺损.
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癫痫伴发抑郁大鼠额前皮质脑源性神经营养因子及其受体的表达研究
目的 观察癫痫伴发抑郁(epilepsy-associated depression,EAD)大鼠额前皮质脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic fctor,BDNF)及其高亲和力受体原肌球蛋白受体激酶B(tropomyosin receptor kinase B,TrkB)的表达情况.方法 52只雌性SD大鼠随机分为正常组、抑郁组(采用慢性不可预见中等应激刺激结合孤养法建立大鼠慢性应激抑郁模型)、癫痫组和EAD组,每组13只,后2组利用氯化锂-匹罗卡品建立癫痫模型,于造模后第14天对癫痫模型进行抑郁筛选,每只大鼠以抑郁各指标评分分别入癫痫组和EAD组.于造模成功后第4周分别用免疫荧光染色检测额前皮质BDNF及TrkB免疫阳性细胞表达;用Western blot检测额前皮质BDNF及TrkB蛋白定量表达.结果 与癫痫组比较,EAD组额前皮质BDNF和TrkB阳性细胞数减少[(26.08±1.18)个/视野vs(32.86±2.28)个/视野,P＜0.05;(26.48±4.66)个/视野vs (35.86±4.37)个/视野,P＜0.05].与正常组和癫痫组比较,EAD组额前皮质BDNF和TrkB蛋白表达明显减少(0.522±0.028 vs 0.912±0.035和1.248±0.066,P＜0.05;0.494±0.015 vs 0.663±0.024和1.035±0.048,P＜0.05).结论 EAD大鼠额前皮质BDNF、TrkB蛋白的表达减少可能与EAD发病有关.
关键词： 癫痫 脑源性神经营养因子 受体蛋白质酪氨酸激酶类 抑郁 -
神经调节蛋白1治疗慢性心力衰竭的新进展
神经调节蛋白1(NRG-1)为表皮生长因子家族成员之一,是心血管系统中重要的信号蛋白,NRG 1通过酪氨酸激酶受体ErbB(ErbB2、ErbB3和ErbB4)介导生物学效应.NRG-l/ErbB信号传导是一条在心血管疾病研究发展中必不可少的途径,在治疗慢性心力衰竭中起到一定效果.目前研究表明,NRG-1治疗慢性心力衰竭,将成为新的治疗靶点.现对NRG-1治疗慢性心力衰竭的研究作一综述.
关键词： 心力衰竭 神经调节蛋白1 受体蛋白质酪氨酸激酶类 一氧化氮合酶 -
β-神经生长因子在脑缺血神经保护中作用机制的研究
目的 观察脑缺血后原肌球蛋白受体激酶(Trk)和蛋白激酶B(Akt)信号蛋白的动态变化规律,同时观察β-神经生长因子(β-NGF)对其影响,探讨β-NGF脑缺血保护的作用机制. 方法制作大鼠局灶性脑缺血模型,腹腔注射β-NGF,应用免疫组化和Western印迹法检测Trk及Akt磷酸化的变化. 结果缺血8 h后Trk受体在半暗带表达增加.缺血2 h后Trk磷酸化即丌始不断增加,Akt的磷酸化则先减少,后逐渐恢复,其中缺血8 h较正常对照组减少了76.5%(P<0.01).注射β-NGF后在缺血12 h,Trk磷酸化水平增加了 74.4%(P<0.01);Akt磷酸化水平在缺血8 h时明显恢复,在24 h 与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05). 结论脑缺血促使Trk受体表达增加与激活.β-NGF可能通过增强Trk磷酸化及调节Akt磷酸化发挥脑缺血保护作用.
关键词： 脑缺血 原肌球蛋白 受体蛋白质酪氨酸激酶类 蛋白激酶类 神经生长因子 -
血管内皮生长因子及其受体在月经周期子宫内膜中的表达
目的检测血管内皮生长因子(VEGF)及其受体fms样酪氨酸激酶(flt-1)、含插入区的激酶受体(KDR)在正常子宫内膜中的表达,探讨其在子宫内膜血管生成及内膜生长分化中的作用.方法采用免疫组织化学及原位杂交方法,对50例妇女正常月经周期子宫内膜中VEGF、flt-1、KDR蛋白质及mRNA进行检测,用蛋白印迹法分析子宫内膜中VEGF亚型,用内皮细胞标志物Ⅷ因子标记内膜微血管密度.结果 VEGF、flt-1、KDR蛋白质及mRNA主要分布在正常子宫内膜血管内皮细胞及腺上皮细胞,VEGF、flt-1在分泌中期、月经期的表达较强, KDR在增生中期即达高峰,三者在增生早期的表达均低.分泌期血管壁面积及血管腔面积大于增殖期 (P<0.05),血管密度无明显周期性改变(P>0.05).正常子宫内膜组织4种VEGF蛋白亚型中,以VEGF121、VEGF165为主,其免疫条带积分吸光度明显高于VEGF189 、VEGF206 (P<0.05).结论 VEGF、flt-1、KDR蛋白质及mRNA在正常子宫内膜中的表达呈明显周期依赖性,分泌期表达增强提示其可能参与胚胎着床,月经期表达增加可能与此期子宫内膜脱落缺氧有关.
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酪氨酸激酶受体B及其配体脑源性神经营养因子水平对神经母细胞瘤耐药的影响
目的研究酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor,TrkB)及其配体脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达水平对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞化疗敏感性的影响.方法Western-blot技术检测不同纳摩尔浓度全反式维甲酸(all trans-retinoic acid,ATRA)诱导后TrkB蛋白水平变化;四甲基偶氮蓝比色(MTT)法检测细胞存活率;流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测细胞凋亡率;透射电镜检测凋亡细胞的形态.结果(1)不同浓度ATRA(1、10、100 nmol/L)处理神经母细胞瘤细胞SY5Y 5 d,TrkB蛋白水平随ATRA浓度增加而增加;(2)BDNF10 ng/ml+ATRA 10 nmol/L+顺铂(Cisplatin,CP)5μg/ml作用组细胞存活率、凋亡率同单用CP组比较均无显著差异,BDNF(50、100ng/ml)加相同浓度ATRA及CP组细胞存活率均明显高于单用CP组,凋亡率均明显低于单用CP组,BDNF 100 ng/ml组存活率高于BDNF 50 ng/ml组,凋亡率低于BDNF 50 ng/ml组.ATRA 1 nmol/L+BDNF 50 ng/ml+CP5μg/ml组细胞存活率、凋亡率同单用CP组比较无显著差异,ATRA 10、100 nmol/L加相同浓度BDNF及CP组细胞存活率均明显高于单用CP组,凋亡率均明显低于单用CP组,ATRA 100nmol/L组细胞存活率高于ATRA 10 nmol/L组,凋亡率低于ATRA 10 nmol/L组.(3)透射电镜技术观察到CP作用组可见到较多细胞呈凋亡改变,而ATRA10 nmol/L+BDNF 50 ng/ml+CP 5μg/ml组细胞形态多数正常.结论SY5Y对化疗药顺铂的敏感性受TrkB及BDNF水平的影响,二者水平越高越容易产生化疗耐药.
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酪氨酸激酶受体RON与非小细胞肺癌
目的:探讨酪氨酸激酶受体RON与非小细胞性肺癌发生的可能机制.方法:应用PubMed和CHKD期刊全文数据库检索系统,以"RON、MSP和肺癌"为关键词,检索2000-01-2009-09相关文献,共检索到英文文献130篇和中文文献17篇.精选50篇,后纳入21篇进行归纳分析.结果:国外文献对RON有较深入的分析,论及RON在乳腺、结肠、肝、肺、肾、膀胱及卵巢肿瘤中,RON呈现过度表达,发生率波动于32.8%～59%,这取决于肿瘤的类型差异.国内时MSP/RON与肺癌发生的可能机制研究明显偏少,仅为3篇.结论:RON的过度表达与肺癌的进展、转移密切相关,检测RON的异常对判断肿瘤的临床进展及转移有一定的参考价值,RON可能成为诊断治疗的新靶点.MSP/RON在肺癌发生中的机制是极其复杂的,有待进一步的阐述.
关键词： 癌 非小细胞肺 受体蛋白质酪氨酸激酶类 综述文献 -
大肠癌组织c-Met和VEGF表达及其与微血管密度关系的初步研究
目的:探讨大肠癌组织c-Met和血管内皮生长因子(VEGF)的表达以及两者与肿瘤血管生成的关系及其临床病理学意义.方法:选取经病理确诊的51例大肠腺癌手术切除组织标本,免疫组化SP法检测c-Met和VEGF的表达及微血管密度(MVD).结果:大肠癌组织中c-Met和VEGF的阳性表达率分别为72.55％(37/51)和52.94％(27/51)；与Dukes分期密切相关,P＜0.05.大肠癌组织c-Met、VEGF均为阳性时MVD值为37.94±7.53,单一阳性时分别为30.67±1.45和23.82±7.45,均为阴性时MVD值小,为13.64±5.33.大肠癌组织中c-Met和VEGF的表达呈显著正相关,rs =0.614,P＜0.05.结论:c-Met和VEGF在大肠癌发生、发展和转移过程中起重要作用,并与肿瘤血管生成相关.
关键词： 肠肿瘤 受体蛋白质酪氨酸激酶类 血管内皮生长因子 -
胃癌组织DDR1a表达临床意义分析
目的:探讨盘状结构域受体1a(DDR1a)在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法:SP免疫组织化学法检测DDR1a蛋白在64例胃癌组织、20例癌旁组织和20例正常胃组织的表达,分析其与胃癌临床病理参数的关系.结果:DDR1a在胃癌组织、癌旁组织和正常胃组织阳性表达率分别为81.3％(52/64)、40.0％(8/20)和15.0％(3/20),在胃癌组织中阳性表达率显著高于在癌旁和正常胃组织中,P＜0.05.DDR1a表达与患者的年龄、肿瘤分化程度无关,而与胃癌肿瘤大小、TNM分期和淋巴转移显著相关,在Ⅲ～Ⅳ期,肿瘤直径＞5 cm,伴有淋巴结转移的胃癌组织中表达高于Ⅰ～Ⅱ期、≤5 cm及不伴有淋巴结转移,P＜0.05.结论:DDR1a在胃癌组织中高表达,可能参与了胃癌的发生、发展.
关键词： 受体蛋白质酪氨酸激酶类 胃肿瘤 免疫组织化学法 -
MerTK及其配体在视网膜色素变性中的研究进展
视网膜色素变性是一种遗传性致盲眼病,与吞噬相关的基因在人类和大鼠中为MerTk,在小鼠中为Mer.该基因编码的蛋白Mer是受体酪氨酸激酶亚家族中的一员,其配体为蛋白S和Gas6.当该基因功能缺陷时,视网膜发生类似视网膜色素变性的病理性改变,而基因治疗可以恢复视网膜色素上皮吞噬外节盘膜的能力.在吞噬过程中,两个配体均参与吞噬过程,但具体机制目前仍不清楚,尚需进一步深入研究.
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人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C关系的研究
目的 探讨人视网膜色素上皮(hRPE)细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C(PKC)的相互作用.方法 对照实验研究.采用1×1010个/L视细胞外节膜盘(ROS),于37℃下孵育体外培养的正常hRPE细胞,在孵育的不同时间终止吞噬反应.用双重荧光标记法,检测hRPE细胞的吞噬能力.用液闪记数γ-32P放射活性法,检测不同吞噬时间点的PKC活性.以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测MERTK基因的mRNA水平变化情况.以PKC激活剂和拮抗剂处理hRPE细胞后,再行MERTK基因mRNA表达水平检测.采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析,实验组与对照组hRPE细胞吞噬ROS能力、PKC活性比较采用Student't检验,MERTK基因mRNA表达水平比较采用单因素方差分析.结果 ROS孵育后的hRPE细胞结合及吞入ROS的数量逐渐增多,至24 h时,hRPE细胞吞噬ROS的数量达到高峰,为(2.85±0.11)×106个,与对照组(0.00±0.00)×106个比较,差异有统计学意义(t=47.64,P＜0.05).ROS孵育后的hRPE细胞胞质PKC活性降低,至24 h时,PKC活性降至低,细胞质的PKC活性为(151.13±17.67)nmol·g-1·min-1,细胞膜的PKC活性为(152.45±64.83)nmol·g-1·min-1;对照组细胞质的PKC活性为(329.63±14.26)nmol·g-1·min-1,细胞膜的PKC活性为(467.67±68.87)nmol·g-1·min-1;两组间PKC活性比较,差异有统计学意义(细胞质:t=89.66,P＜0.05;细胞膜t=10.31,P＜0.05).在hRPE细胞与ROS不同时段的孵育过程中,MERTK基因mRNA均呈现出高表达状态,孵育至90 min时,MERTK基因mRNA表达灰度值为1.8853±0.0077,与对照组灰度值0.7246±0.0062相比,差异有统计学意义(F=16 060.2167,P＜0.05);孵育至24 h时,MERTK基因mRNA表达灰度值为0.5946±0.0082,与对照组灰度值0.3343±0.0064比较,差异有统计学意义(F=919.8421,P＜0.05).上调hRPE细胞的PKC活性后,再行不同时段的ROS孵育,短时与长时孵育的MERTK基因mRNA表达灰度值均低于对照组(短时孵育:F=17 142.2331,长时孵育:F=1886.4614;P＜0.05).拮抗hRPE细胞的PKC活性后,再行不同时段的ROS孵育,30 min内MERTK基因mRNA表达灰度值为4.4670±0.0092至5.7034±0.0095范围,均高于对照组灰度值0. 9117±0.0021(F=199 012.9138,P＜0.05).结论 PKC的低活性和MERTK基因mRNA的高表达可促进hRPE细胞吞噬ROS的过程.PKC活性和MERTK基因mRNA表达水平作为上游调控信号,通过两条不同的信号通路,以负相关的方式调节hRPE细胞吞噬ROS的功能.
关键词： 色素上皮 眼 吞噬作用 蛋白激酶C 受体蛋白质酪氨酸激酶类 -
PTPN11第3内含子基因多态性与胃癌的相关性研究
目的 研究中国汉族人群中蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型11(PTPN11)第3内含子基因的rs2301756位点多态性与胃癌发生的相关性,并探讨基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)检测此多态性的可行性与准确性.方法 采用MALDI-TOF-MS对中国汉族的247例胃癌、212例非癌患者以及160例脐带血的PTPN11基因第3内含子rs2301756多态性位点进行基因分型,并用PCR产物直接测序技术对该位点的20例样本进行分型,以验证MAIDI-TOF-MS技术的准确性.应用组织涂片镜检、幽门螺杆菌(H.pylori)培养、快速尿素酶、ELISA和胶体金法等5种方法来检测受试者的H.pylori感染情况.结果 20例样本PTPN11第3内含子基因rs2301756位点MALDI-TOF-MS技术分型结果与测序结果完全相符,两种方法的基因型分型结果具有很好的一致性.胃癌组和非癌对照组H.pylori(+)者分别为182例(73.68%)和160(75.47%).H.pylori感染率在两组间无明显差异(P＞0.05).胃癌组和非癌对照组PTPN11基因在该位点的基因型频率分布符合遗传平衡状态.将G/A型和A/A型合并后与G/G型相比,带有A等位基因的个体不能影响胃癌的发生风险.根据年龄、性别、H.pylori感染对胃癌的易感性进行的分层分析发现,PTPN11基因该位点SNP与年龄、性别和H.pylori感染状态无关.结论 中国汉族人群PTPN11基因第3内含子rs2301756位点SNP与胃癌发病风险无关.
关键词： 受体蛋白质酪氨酸激酶类 胃肿瘤 多态性 单核苷酸 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 -
酪氨酸激酶类受体C-Met抑制剂研究进展
酪氨酸激酶类受体C-Met及其配体肝细胞生长因子(HGF)与肿瘤的发生、发展及预后密切相关,是肿瘤治疗的重要靶标.寻找高效C-Met抑制剂是目前抗肿瘤药物研究的热点之一.本文综述了这一领域的新研究进展.
关键词： 受体蛋白质酪氨酸激酶类 原癌基因蛋白质c-met 肝细胞因子 抗肿瘤药
