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探讨磁珠偶联血型抗体过程对抗体活性的影响
目的 探讨磁珠与血型抗体偶联过程对抗体活性的影响,为后续利用液相芯片技术检测血型提供实验依据.方法 分别将抗D血型抗体直接或者利用抗人IgG间接与磁珠偶联,再利用磁力架、显微镜观察其与D抗原阳性红细胞的反应情况.结果 IgM型抗D与磁珠偶联后与D阳性红细胞可反应,但IgG型抗D与磁珠偶联后与D阳性红细胞不反应;利用抗人IgG作为桥联间接偶联磁珠的IgG型抗D不能与D阳性红细胞结合;IgG型抗D与D阳性红细胞形成的抗原抗体复合物与磁珠可进一步偶联.结论 血型抗体与磁珠偶联后会对其活性产生一定影响,尤其是IgG型血型抗体.
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抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护剂的探讨
目的 比较硫糖铝和多种糖类对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础.方法 诱导DH5α-vacA-pQE30大量表达VacA蛋白,制备纯化的VacA IgY.在不同酸性的IgY液中加入同浓度各种保护剂,在相同酸性的IgY液中加入不同浓度的各种保护剂,然后加入不同浓度硫糖铝和正常胃内浓度或高浓度的胃蛋白酶,以ELISA法测定试验组IgY的剩余抗体活性(AR).结果 在pH2.0和3.0条件下,各保护剂均能提高IgY抗体活性,且硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,在此条件下50%和40%硫糖铝均可完全保持IgY抗体活性.在pH2.0~3.0及正常或高胃蛋白酶浓度下,30%以上硫糖铝均可有效保护IgY的活性.结论 低pH下硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,且30%以上硫糖铝可增强VacA IgY对胃蛋白酶的耐受能力,是较理想的IgY保护剂.
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不同血清稀释度对动物莱姆病酶联免疫吸附试验检测结果分析
在当前尚无动物莱姆病诊断试剂和操作技术规程情况下,在引用人莱姆病诊断试剂及方法时,考虑人和动物抗体活性、血清学反应差异等因素,不能完全按人莱姆病检测标准.为选择动物佳血清稀释度,故进行了本项试验.1 材料和方法被检血清(牛、羊)共1 083份,分别采集于陈巴虎旗、鄂温克族自治旗、海拉尔市及我市所属各镇;莱姆病酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断试剂盒、莱姆病抗原包被载玻片和兔抗羊、兔抗马荧光抗体,均由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所提供;每份血清样品均以100、200、400倍稀释后分别进行ELISA测试.ELISA、间接免疫荧光法(IFAT)按中国疾病预防控制中心传染病预防控制所暂定的操作规程实施.
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疫苗中和抗体体外检测方法的研究进展
中和抗体是抗病毒免疫的主要因素,也是疫苗免疫治疗效果的重要检测指标之一.预防疫苗的免疫保护性主要体现于是否可诱导出高滴度的中和抗体,因此中和抗体活性也是疫苗评估和质控的重要依据.迄今为止,根据已知抗原特性、抗原与抗体反应特点以及结果判定方法的不同,已建立了多种病毒中和抗体活性的体外测定方法.本文就近年来关于中和抗体活性体外测定方法的新研究进展做一综述.
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静注人免疫球蛋白抗补体活性测定影响因素的探讨
静注人免疫球蛋白(pH 4)(IVIG)是我公司生产的具有多种抗体活性的血液制品,因具有广泛的应用价值而受到临床重视.其低pH值能更好地保证Fc段生物学活性,一般认为少量的IgG多聚体能暴露出Fc段补体结合位点,从而促使抗补体活性(ACA)产生[1-3].ACA是ICIG中一项重要的指标,它指IVIG中IgG多聚体在没有结合抗原的情况下,激活补体的能力.IgG多聚体通过激活补体使补体消耗,从而使机体的免疫防御能力下降.头痛、潮红、颤抖、背痛、恶心是较常见的不良反应症状[4].因此,ACA的高低对IVIG的质量起着至关重要的作用.据文献报道[5],影响AcA的因素可能与IgG多聚体含量、Na+浓度、pH值、葡萄糖的浓度有关.据此,我们进行了研究.另外,还研究发现枸橼酸含量对ACIA也有一定影响.本文就以上因素对其进行实验分析.
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卵黄抗幽门螺杆菌抗体的制备及特性研究
幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)与慢性胃炎、消化性溃疡和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤有密切关系.采用抗生素三联或四联疗法治疗Hp感染,但 Hp易耐药.用特异性抗体防治传染病是经典的方法,抗Hp IgG是防治Hp感染的途径,因此,我们采用鸡卵黄免疫球蛋白G抗体(又称IgY)防治Hp.IgY是母鸡血中的IgG选择性地转移到卵黄中,是卵黄中惟一的免疫球蛋白类,具有与血清IgG一样的抗体活性.这提示,可以从免疫母鸡的蛋中获得大量特异性抗体.
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髓鞘蛋白P0致敏豚鼠无听觉功能障碍迹象
有资料表明梅尼埃病、特发性感音神经性聋和突聋等病人血清中内耳组织30kDa蛋白的抗体活性升高,Cao(1996)等人认定此蛋白是周围神经髓鞘糖蛋白P_0,特异性表达于周围神经系统施旺细胞,其氨基酸序列具有种间高度保守性。在内耳,P_0蛋白主要在螺旋神经节和螺旋器表达。该作者用猪坐骨神经分离、纯化并……
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拟除虫菊酯类农药-抗体活性定量构效关系研究
目的:研究拟除虫菊酯类农药与其类特异性抗体的免疫识别机理。方法:采用逐步多重线性回归法研究了拟除虫菊酯类农药及其类似物和抗体活性( IC50:半数抑制浓度)之间的定量构效关系。在计算拟除虫菊酯及其类似物结构描述符的基础上,构建了二维定量构效模型,分析筛选影响抗体活性的主要因素,并用留一法交叉验证了模型的预测能力。同时,采用偏小二乘法对计算所得拟除虫菊酯分子片段的结构参数进行了分析,建立了分子亚结构和抗体活性之间的全息定量构效模型,运用不同颜色编码来反映分子片段对抗体活性的贡献。结果:二维定量构效模型和全息定量构效模型的决定系数( R2)分别为0.920和0.917,二者的交叉验证系数( Q2)分别为0.875和0.660,表明两模型具有良好的预测能力。由二维定量构效模型还可得,拟除虫菊酯类农药的疏水性越小,往往和抗体的结合能力就越强。此外,在尝试了多种分子片段组合后,得到了优全息定量构效模型,其分子片段的大小在4~10之间,分子片段的长度为61,优化的主成分为4,分子片段的类型为B/C/Ch;但拟除虫菊酯类农药指纹图谱的编码结果和试验结果不完全吻合。结论:拟除虫菊酯类农药的疏水性是影响抗体识别的主要因素。
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硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体的保护作用
目的 观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础.方法 诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacA IgY,并进行纯化.在不同pH值的IgY液中加入不同浓度的硫糖铝和不同浓度的胃蛋白酶,将含不同浓度硫糖铝的IgY反复冻融7次,将含30%糖铝的IgY室温放置1 d~4周,ELISA法测定各实验组IgY的相对抗体活性(AT/Ac).结果 在pH 1.5、2.0和3.0的条件下,含30%~60%硫糖铝的IgY的相对抗体活性高于不加硫糖铝的IgY;在pH 1.5条件下,60%硫糖铝可使IgY的相对抗体活性保持68.7%;在pH 2.0和3.0条件下,50%和40%以上的硫糖铝几乎可完全保持IgY的相对抗体活性.在pH值为2.0和3.0时,正常胃蛋白酶浓度(0.02 mg/ml)下,30%以上的硫糖铝均可有效保护IgY的相对抗体活性.30%以上的硫糖铝可增强IgY的抗冻融能力.室温放置4周后,含30%硫糖铝的IgY仍能保持80%以上的相对抗体活性.结论 30%以上的硫糖铝可增强VacA IgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力及抗冻融能力,是较理想的IgY保护剂.
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血清免疫球蛋白测定的临床意义
免疫系统受抗原刺激后,B淋巴细胞转化为浆细胞,浆细胞分泌免疫蛋白(Ig)并释放入血液,使机体产生相对的抗原的体液免疫.抗体是指能与相应抗原特异性结合,并且有免疫功能的免疫球蛋白,但不是所有的免疫球蛋白都具有抗体活性,人体内含有5类Ig,即IgG、IgA、IgM、IgD、IgE.
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006 血清杀菌抗体活性与B群脑膜炎球菌外膜囊疫苗效力相关
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鸡卵黄抗幽门螺杆菌-IgY的特性研究
人群中幽门螺杆菌(Hp)感染率高,其与慢性胃炎、消化性溃疡和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤有密切关系,是胃癌的Ⅰ类致癌原.目前常规治疗多采用抗生素三联疗法,但因Hp易耐药而导致治疗失败.鸡卵黄免疫球蛋白G抗体,又称IgY,是卵黄中惟一的免疫球蛋白,具有与血清IgG一样的抗体活性[1].特异性鸡卵黄抗体IgY对病原体感染的防御无动物种属的差异,这为IgY防治人类疾病的应用奠定了基础.抗Hp-IgY是治疗Hp的一个新研究方向,近年日益受到关注.因此,我们检测抗Hp-IgY的理化特性和生物学特性,为抗Hp-IgY的开发和应用奠定基础.
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静脉注射人体免疫球蛋白的应用进展
抗体是由B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的一类糖蛋白,能与相应抗原表位结合,是介导体液免疫的重要免疫分子.1968年和1972年世界卫生组织和国际免疫学会联合会的专门委员会先后决定,将具有抗体活性或化学结构与抗体相识的球蛋白统称为免疫球蛋白(im-munoglobulin,Ig)[1].
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抗旋毛虫鸡卵黄抗体的活性检测
目的 制备特异性抗旋毛虫的鸡卵黄免疫球蛋白,研究其免疫应答规律及其稳定性.方法 用纯化的旋毛虫幼虫免疫育龄种鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后获得卵黄抗体.应用酶联免疫吸附试验检测卵黄抗体的效价及其敏感性和稳定性.结果 通过免疫可成功诱导出高效价的抗旋毛虫抗体,效价可达1:106以上,免疫应答持续时间可达34周以上.免疫后卵黄抗体敏感性和血清抗体敏感性无显著性差异(P>0.05).稳定性试验表明IgY敏感性高,在pH4~10及温度不超过60℃条件下活性稳定.结论 成功制备出高效价的特异性抗旋毛虫卵黄抗体,其敏感性高,有一定的耐热、耐酸碱性,可进一步用于旋毛虫感染的研究.
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麻疹误诊分析54例
麻疹是我国常见的一种呼吸道传染病.近年来,由于人口流动性增大等原因,全国麻疹发病率明显上升,许多地方发生麻疹暴发流行,甚至在局部地区发生大规模爆发,其中2008年冬春季宁波市就经历了麻疹大流行,3月份发病率同比上升3768.18%[1].同时由于麻疹减毒活疫苗(MV)的普遍接种及成人麻疹抗体活性的下降,使8个月龄以下儿童及成人发病率相对升高,呈明显的"双相移位"现象[2].
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成人麻疹误诊23例分析
麻疹是由麻疹病毒引起的急性呼吸道传染病.临床以发热咳嗽、流涕、眼结膜炎,特殊的口腔麻疹黏膜斑为特征[1].由于麻疹解毒活疫苗的普遍接种及成人麻疹抗体活性的下降,使8个月龄以下儿童及成人发病率相对升高,呈明显的"双相移位"现象[2].由于基层卫生医务人员对麻疹的认识不足等原因,导致许多患者早期被误诊.现结合我院2005年1月-2013年5月误诊的23例成人麻疹,对其误诊原因报告如下:
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乙型肝炎表面抗体与年龄的相关研究及影响因素
目的:研究乙型肝炎(后简称乙肝)表面抗体(HBsAb)随年龄增长而降低的原因。方法测定 HBsAb ,按照一定比例稀释标本直至 HBsAb <10 U /L ;测定巨细胞病毒 IgG(CMV‐IgG),按照一定比例稀释标本直至抗 CMV‐IgG <14 U /mL 。比较分析抗体活性的变化。结果“2和(或)3抗体”阳性组中,青年组 HBsAb 活性水平高于中年组,差异有统计学意义(P<0.05);中年组 CMV‐IgG 活性高于青年组,差异有统计学意义(P<0.05)。青年组中“2和(或)3抗体”阳性组 HBsAb 活性水平高于单抗体阳性组,差异有统计学意义(P<0.05);中年组中“2和(或)3抗体”阳性组 HBsAb 活性水平高于单抗体阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBsAb 随年龄增长而降低,可能与乙肝病毒感染进程中抗体反应模式不同有关。
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重组集成干扰素α在不同动物长期毒性实验血清中中和抗体的产生及活性研究
目的:研究重组集成干扰素α在金黄地鼠和猕猴长期毒性实验血清中中和抗体的产生及抗体活性的强弱.方法:将金黄地鼠与猕猴分别分为10、30、100μg/kg与1、10、100μg/kg 3个剂量组,均每日皮下注射重组集成干扰素α 1次,各连续用药60、30d,取给药期和恢复期不同时间的血清,采用细胞病变抑制法进行检测.结果:金黄地鼠的30、100μg/kg 剂量组与猕猴的3个剂量组从给药第3wk起,在血清中检测到具有中和活性的抗体,抗体滴度在给药第4wk或恢复期第1wk达高峰,并持续到恢复期结束.其中,猕猴10、100μg/kg 剂量组的中和活性高于同期1μg/kg剂量组,10、100μg/kg 剂量组之间则无显著性差异(P>0.05),1μg/kg 剂量组在恢复期结束时已检测不到中和活性.结论:金黄地鼠和猕猴重复注射重组集成干扰素α,血清中均能检测到中和抗体(低剂量组除外),抗体滴度和持续时间与注射剂量呈正相关.
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-20 ℃冰冻保存血清Rh抗体效价变化的观察
目的探讨血清抗体在体外-20 ℃冰冻保存抗体活性变化的情况及检测弱抗体的佳方法.方法将2份已知阳性血清在保存前分成小等分,按设计的时间(1~10年)每年对抗体效价进行测定,应用CAT法、Polybrene法、 TCT法三种技术对40份-20 ℃冰冻保存1~18年的已知阳性血清进行了间接抗人球试验,对其中5份阳性血清进行了灵敏度测试.结果抗体血清体外在-20 ℃保存2年左右时效价无明显改变,以后每年效价约降低1个滴度,8年以上效价显著减弱,甚至已检测不出.3种方法对不规则抗体检测的灵敏度为:CAT法>Polybrene法>TCT法.阳性检出率为:CAT法85.0%、Polybrene法67.5%、TCT法52.5%,CAT法显著大于TCT法.结论 -20 ℃的温度适合保存近年内使用效价较高的血清抗体,对效价较低的和一些稀有血清抗体的长期保存,应采用更低温度更适合.CAT法对不规则抗体的检测更灵敏、更可靠,是一种值得在输血领域推广应用的方法.
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抗痢疾志贺氏菌卵黄抗体的制备及其稳定性
目的 制备特异性抗痢疾志贺氏菌的鸡卵黄免疫球蛋白,研究母鸡对痢疾志贺氏菌的免疫应答规律及抗体的稳定性.方法 以两种不同剂量的痢疾志贺氏菌作为抗原免疫产卵母鸡,应用酶联免疫吸附测定法检测抗痢疾志贺氏菌IgY的效价及其稳定性.结果 初次免疫后第12天,卵黄中开始出现抗痢疾志贺氏菌的IgY,免疫应答持续时间超过25周.稳定性试验表明IgY在pH3~11,温度不超过60℃,蔗糖质量浓度不高于700 g/L的渗透压条件下活性稳定.结论 用痢疾志贺氏菌免疫母鸡制备的IgY效价高,理化性质稳定.