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Vero 细胞流感疫苗应用前景
流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,其病毒基因组为单股负链分节段的RNA,外有包膜.根据病毒核壳蛋白(NP)和膜蛋白(MP)抗原特性及其基因特性的不同,分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型,甲型根据其表面(HA、NA)结构及其基因特性的不同又分为许多亚型,乙和丙型没有亚型,其中甲型和乙型流感病毒与人类有密切关联[1],如1918~1919年暴发的西班牙流感(H1N1)、1957年的亚洲流感(H2N2)、1968年的香港流感(H3N2)和1977年俄国流感(H1N1),每次大流行都造成了巨大的人力资源和物力资源的损失,在美国,每年平均20,000人死于流感.自1968年起大多数流感病毒的新变种都首发于中国,并且近来的研究表明,历史上的4次流感暴发,后3次出现的新亚型流感病毒均首发于中国.
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流感/禽流感病毒致病性研究进展
流感病毒是引起流行性感冒的病原体,它属正粘病毒科(Orthomyxoviridae),是具有包膜和分节段的单链负RNA病毒.甲、乙型流感病毒基因组均含8个节段,而丙型流感病毒仅含7个节段.根据流感病毒核蛋白(NP)和基质蛋白(MP)抗原特性及其基因特征的不同,流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型.
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疫苗中和抗体体外检测方法的研究进展
中和抗体是抗病毒免疫的主要因素,也是疫苗免疫治疗效果的重要检测指标之一.预防疫苗的免疫保护性主要体现于是否可诱导出高滴度的中和抗体,因此中和抗体活性也是疫苗评估和质控的重要依据.迄今为止,根据已知抗原特性、抗原与抗体反应特点以及结果判定方法的不同,已建立了多种病毒中和抗体活性的体外测定方法.本文就近年来关于中和抗体活性体外测定方法的新研究进展做一综述.
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六株不同地区分离的H7N9流感病毒假病毒制备与生物学特性研究
目的 选择不同地区分离的H7N9亚型流感病毒代表株,制备各代表株的假病毒,为H7N9疫苗对不同地区毒株的免疫保护效果评价奠定基础.方法 通过对29株H7N9流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)的氨基酸序列分析,获得6株不同地区H7N9亚型流感病毒代表株病毒;采用基于慢病毒载体的假病毒包装系统,以HA与神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)作为包膜质粒,包装获得6株带有荧光素酶报告基因的假病毒;通过电镜负染、Western blot检测、感染MDCK后的荧光素酶读值和血凝试验等了解6株假病毒的生物学特性,通过血清交叉中和试验了解其在中和抗体检测中的应用情况.结果 筛选获得6株不同地区分离的H7N9流感病毒代表株并制备了相应的假病毒颗粒,电镜下可观察到典型的流感病毒形态,Western blot可检测到HA、NA和P24的表达;滴度测定结果显示6株假病毒对MDCK细胞的感染力为104~ 105TCID50/50μl,血凝活性可达64~ 512;SH1上海株H7N9 HA疫苗免疫血清针对6株流感假病毒100TCID50剂量的中和效力不同,提示6株假病毒可用于疫苗的交叉免疫效果评价.结论 成功获得6株H7N9不同地区代表株流感假病毒,为疫苗的免疫效果评价奠定了基础.
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2004-2005年中国B型流感病毒抗原性及基因特性研究
目的阐明2004-2005年中国流行的B型流感病毒血凝素抗原性及其基因变异情况.方法对2004-2005年分离的B型毒株先进行单向血凝抑制试验;在此基础上选取不同时间、地点的B型流感毒株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,然后进行基因进化特性分析.结果2004-2005年我国人群中同时流行着B型Yamagata系和Victoria系毒株.Yamagata系毒株与B/Shanghai/361/02比较,2004年有3.7%病毒单向血凝抑制效价有4倍以上差异,2005年有4.5%病毒单向血凝抑制效价有4倍以上差异,并且在血凝素基因HA1区发生9个氨基酸替换,在196为增加一个糖基化位点.Victoria系毒株与B/Hong kong/330/01比较,2004年有8.5%病毒单向血凝抑制效价有4倍以上差异,2005年有20.6%病毒单向血凝抑制效价有4倍以上差异,并且在HA1区发生9个氨基酸替换,在197位增加一个糖基化位点.结论2004-2005年我国人群中流行的B型流感病毒的抗原性与B/Shanghai/361/02、B/Hong kong/330/01相比抗原性已经发生了变化.
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2014-2015监测年度中国B型流感病毒病原学特征分析
目的 分析2014-2015流感监测年度我国B型流感病毒的流行情况及与流感疫苗株的匹配性.方法 选择本监测年度中国分离的B型流感病毒,进行抗原性分析并对全基因组进行测序,构建进化树,分析我国B型流感病毒的变异情况,并比较其与疫苗株的匹配性.结果 本年度我国B型流感病毒活动水平较低,占所有收检病毒的29.94%,而B型流感病毒中Yamagata系毒株明显多于Victoria系.抗原性分析显示,Yamagata系流感病毒绝大部分为疫苗株B/Massachusetts/2/2012的类似株(95.1%),而Victoria系病毒只有48.3%为四价流感疫苗组分B/Brisbane/60/2008的类似株,但与我国Victoria系流行代表株B/北京海淀/1386/2013抗原类似的比例为100%.基因特性分析显示有19株Yamagata系毒株为BY-HA/BV-NA系间重配毒株.分析NA基因的耐药位点发现8株Yamagata系病毒有已知的敏感性降低的氨基酸位点突变.结论 2014-2015流感监测年度我国B型Yamagata系病毒与疫苗株匹配较好,但Victoria系病毒与四价疫苗株匹配性不佳,因此应及时分析我国流行病毒的抗原性和基因特性,推选出与我国流行病毒相匹配的疫苗株.
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结核分支杆菌Hsp70和Hsp 65 DNA疫苗免疫原性比较研究
分支杆菌热休克蛋白(Hsp)既有增强免疫应答的作用,又保持了分支杆菌本身的抗原特性.我们采用分子生物学技术,将结核分支杆菌Hsp70基因克隆到真核表达质粒pcDNA3中,构成裸露DNA疫苗(DNA70).采用英国Lowrie教授赠送的Hsp65 DNA疫苗和本室构建的Hsp70 DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,然后观察其对小鼠免疫应答的影响,探讨两种疫苗的抗感染机制及比较两种疫苗的免疫原性.
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恩格菲配合介入治疗原发性肝癌18例近期疗效观察
恩格菲(金葡液)是从低毒高效的金葡菌变异株的代谢产物中提炼出来的,具有超抗原特性的生物反应调节剂,临床研究表明其有较高的抗肿瘤活性.我们于1999年1月~2002年1月采用恩格菲配合肝动脉栓塞化疗(TACE)介入治疗原发性肝癌18例,效果满意,并同期设对照组18例,现报告如下.
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发酵山梨醇的EHEC O157:H7的分离
肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7自1982年从美国食物中毒患者中发现以来,越来越受到重视,成为新发现的病原微生物[1].1983年后,美国、加拿大不断发现O157引起的散发病例,病例报告呈逐年上升趋势,甚至在某些地区已跃居肠道细菌性腹泻病原菌的第2位,我国也发现由EHE O157:H7引起的散发病例[2].而目前报道的EHEC O157:H7大多数是不发酵或缓慢发酵山梨醇的菌株.本研究从鸡腿中分离出了发酵山梨醇的菌株,经生化和血清学实验确认为发酵山梨醇的EHEC O157:H7,分析了其抗原特性和毒力等.现报告如下.
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孕妇外周血胎儿细胞成分与子痫前期发病关系的研究进展
子痫前期是导致孕妇和围产儿发病率及死亡率升高主要原因,病因至今未明,随着现代生殖免疫学发展,人们发现子痫前期是一种母胎不相容疾病.胚胎是由继承了父系及母系双重组织特异性受精卵发育而来,所以它对母体来说具有"自己"和"异己"的组织抗原特性,而且正常的胎盘并非是十分完善的细胞透不过的屏障,在人类的妊娠中,胎儿血液可能进入母体血液循环中,理论上母体对携带有父系抗原的胎儿细胞会产生免疫反应,但是正常妊娠期间并没有发生母胎排斥现象,说明母胎之间存在复杂而完整的免疫体系,一旦这种平衡被打破则导致病理妊娠,如习惯性流产、子痫前期等.因此,研究孕妇外周血胎儿细胞成分与子痫前期关系,有助于阐明子痫前期发病的机制,本文就国内外研究现状进行综述.
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生产场地变更后甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)的抗原特性
目的 研究生产场地变更后,原生产工艺制备的甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)的抗原特性.方法 采用双抗体夹心ELISA法检测在新场地制备的甲肝灭活疫苗病毒浓缩液和疫苗原液的甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原含量.SDS-PAGE和Western blot分析二者的蛋白组分和特异性;疫苗成品(成人剂量)稀释为不同剂量(640、320、160、80和40 EU),免疫ICR小鼠(并设铝佐剂对照组),采用竞争ELISA法检测小鼠血清中HAV抗体效价;同时称量免疫后不同时间小鼠体重.结果 病毒浓缩液和疫苗原液的HAV抗原含量分别为12 800和3 200 EU/ml.疫苗原液中仅含HAV结构蛋白组分,且可与HAV抗体特异性结合.初免后28 d,640、320和160 EU剂量疫苗组小鼠血清抗体阳转率为100%,80和40 EU剂量疫苗组二免后血清抗体阳转率达100%和90%,所有免疫组小鼠血清抗体效价二免后14 d较初免28 d上升约2倍;疫苗免疫组小鼠体重及体重增幅与佐剂对照组相比,均无药物作用引起的异常变化(P>0.05).结论 在新场地采用原生产工艺制备的甲型肝炎灭活疫苗原液有单纯的抗原蛋白组分和免疫学特异性,且与前期研究结果相比,其免疫原性及安全性具有一致性.
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重组合异种骨骨修复治疗体会
重组合异种骨(RBX)是骨形成蛋白(BMP)与去除抗原特性的异种松质骨的复合物.具有显著的骨修复效果.近年已广泛应用,我科从1997年开始采用重组合异种骨修复骨缺损及骨不连接21例.现就治疗体会报道如下.
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猪2型链球菌毒力因子研究进展
猪链球菌根据菌体荚膜抗原特性的不同,可以分为35个血清型(1-34型及1/2型)[1],其中以2型流行广,对猪的致病性强,其次是1、4、7、9型和1/2型等.猪链球菌2型又称为猪链球菌血清2型或荚膜2型猪链球菌,分类上属于兰氏分类法的R群[2].此菌通常以引起断奶仔猪关节炎、脑膜炎、败血症及支气管炎为特征[3],其还可引起人类感染胸膜炎、败血症等,导致严重疾患,甚至死亡[4-5].猪2型链球菌已成为我国当前人兽共患病的一种重要的新病原菌.
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恙虫病东方体Karp株56kDa与47kDa外膜蛋白基因的嵌合和嵌合基因在大肠杆菌的表达
将恙虫病东方体(Orientiatsutsugamushi,Ot)Karp株的56kDa和47kDa外膜蛋白基因嵌合,并使嵌合基因在大肠杆菌细胞内表达,产生双抗原融合蛋白.采用PCR方法,从Ot Karp株基因组DNA中扩增56kDa蛋白基因片段,将该片段分别与原核表达载体pQE30及47kD蛋白基因重组质粒pQE30/47连接,构建pQE30/56及pQE30/56-47重组质粒;用IPTG诱导转入大肠杆菌内的重组质粒的目的基因表达.SDS-PAGE显示,pQE30/56转化的大肠杆菌产生一约50kDa的融合蛋白和pQE30/56-47转化大肠杆菌产生一约90kDa融合蛋白(56-47融合蛋白),免疫印迹分析显示两融合蛋白均与OtKarp株感染鼠血清产生特异性反应,56-47融合蛋白分别与47kDa、56kDa重组蛋白免疫的小鼠血清产生特异性反应,以及56-47融合蛋白免疫血清与56kDa和47kDa重组蛋白反应.Ot Karp株的56kDa与47kDa外膜蛋白基因嵌合后在大肠杆菌细胞内实现了表达,表达的融合蛋白具有56kDa和47kDa外膜蛋白的抗原特性.
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恙虫病东方体58kDa热休克蛋白与47kDa外膜蛋白的基因嵌合及58-47嵌合基因在大肠杆菌中表达
采用PCR方法,从恙虫病东方体Karp株基因组DNA中扩增58kDa热休克蛋白的基因,将该基因分别与原核表达载体pQE30及47kDa外膜蛋白的基因重组质粒(pQE30/47)连接,构建pQE30/58及pQE30/58-47重组质粒,用重组质粒转化大肠杆菌.SDS-PAGE显示,pQE30/58和pQE30/58-47转化的大肠杆菌分别产生一58kDa重组蛋白和一90kDa的双抗原(58-47)融合蛋白.免疫印迹分析显示Karp株免疫血清能特异识别58kDa重组蛋白和90kDa融合蛋白,90kDa融合蛋白既与47kDa重组蛋白也与58kDa重组蛋白的免疫血清特异反应,58kDa与47kDa重组蛋白也被90kDa融合蛋白免疫血清所识别.研究结果证明58-47融合蛋白具有恙虫病东方体Karp株47kDa外膜蛋白和58kDa热休克蛋白的抗原特性.
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普氏立克次体120 kDa表面抗原N端和C端基因的克隆与表达
采用PCR方法,从普氏立克次体基因组中扩增出120kDa表面抗原的N端和C端基因片断,并将其克隆于原核表达载体pQE30,构建重组质粒pQE30/N和pQE30/C,将重组质粒转入大肠杆菌M1 5,用IPTG诱导大肠杆菌内的目的基因表达.SDS-PAGE分析发现两重组质粒转化菌分别产生了一26kDa(N端)和67kDa(C端)重组蛋白;在免疫印迹分析中,26kDa和67kDa重组蛋白均与普氏立克次体免疫血清发生特异反应,证明27kDa和67kDa重组蛋白分别为120kDa表面抗原的N端和C端重组蛋白,具有普氏立克次体120kDa表面抗原特性.
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癌胚抗原乳腺癌治疗过程中的观察
癌胚抗原(CEA)存在于胎儿肠道和内胚层分化来的肿瘤细胞膜上,是一种具有人类胚胎抗原特性决定簇性糖蛋白.CEA是国际公认的肿瘤标志物之一,主要运用于大肠癌诊疗.现将CEA运用到乳腺癌方面来,观察CEA水平动态变化,现报告如下.
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四川省2006年B型流感病毒抗原性及基因特性研究
[目的]阐明2006年四川省流行的B型流感病毒血凝素抗原性及其基因变异情况.[方法]对2006年分离的B型毒株进行单向血凝抑制实验,再将病毒株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,然后进行基因进化特性分析.[结果]2006年四川省人群中同时流行着B型Victoria系和Yamagata系毒株.Victoria系毒株与B/Hongkong/330/2001比较,病毒单向血凝抑制效价均有4倍以上差异,并且在HA1区发生8个氨基酸替换,在197位增加一个糖基化位点.Yamagata系毒株与B/Shanghai/361/2002比较,病毒单向血凝抑制效价均有4倍以上差异,并且在血凝素基因HA1区有7个氨基酸位点发生改变,在196位增加一个糖基化位点.[结论]四川省2006年B型流感病毒的抗原性与B/Hongkong/330/2001、B/Shanghai/361/2002相比已经发生了变化.
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未成熟树突状细胞诱导皮肤移植免疫耐受的研究进展
树突状细胞(dendritic cell,DC)是一类重要的专职抗原呈递细胞,虽然在体内的数量较少,但是其强大的抗原呈递和处理功能在机体的免疫反应中起重要的作用.DC的发育分化过程伴随着其由未成熟的前体细胞向成熟细胞的转变,未成熟的DC(immature dendritic cell,imDC)与成熟DC(mature dendritic cell,mDC)在表型特征以及生物学功能上都有区别,而imDC大的特点就是在体外可以诱导T淋巴细胞特异性低应答.临床上同种异体皮肤移植是目前大面积深度烧伤患者早期创面覆盖直接、有效的治疗方法.但是由于皮肤的强烈抗原特性,使外源皮肤在移植后3周左右发生不可逆的排斥反应,极大程度抑制了自体微粒皮混合大张异体皮的移植效果.利用imDC的特殊作用,可以在皮肤移植前后给受者体内输入用基因工程技术制备的imDC,以减轻皮肤移植后的免疫排斥反应、延长异体皮的成活时间,从而提高大面积深度烧伤患者的手术治疗效果.