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免疫金银染色法测定抗中性粒细胞胞浆抗体
目的 建立检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的免疫金银染色法,并评价其应用价值.方法 以中性粒细胞基质片为抗原,以胶体金标记的羊抗人IgG为第二抗体,加银染液,普通光镜镜检判断结果;用此法和间接免疫荧光法(IIF)检测28例正常人和69例相关疾病的患者血清标本共97例.结果 两方法的敏感性和特异性无差异,两法符合率为100%.结论 免疫金银染色法可替代IIF法,便于基层单位应用.
关键词： 抗中性粒细胞胞浆抗体 免疫金银染色 中性粒细胞 -
基于免疫金银染色的蛋白质与抗原分子微阵列技术
目的研制适于自身抗体检测的蛋白质与抗原分子微阵列.方法利用氧化型琼脂糖凝胶膜结合戊二醛分子衍生的活性表面,制作蛋白质与抗原分子微阵列,建立了检测血清自身抗体的胶体金免疫金银染色方法(IGSS).结果在未经选择的风湿病患者中(包括SLE,RA和MCTD),检出多种自身抗体阳性,其中又以子宫内膜抗体(EmAb)、抗ssDNA抗体、抗TG抗体、抗TPO抗体和RF等的检出频率较高;但心磷脂抗体(ACA)、抗LSP和抗精子抗体(AsAb)均为阴性.经初步方法学对比考证,实验结果与ELISA有较好的一致性(达90%).结论本法具有方法敏感,结果直观和实验条件易于控制等特点,为发展可视化阵列芯片提供了一种很好的模式.
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免疫金银染色法检测SLE患者血清抗核抗体和抗双链DNA抗体的临床研究
目的探讨检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清抗核抗体(ANA)和抗双链DNA抗体(A-dsDNA)的临床意义.方法用免疫金银染色法(immunogold-silver staining,IGSS)和斑点免疫金银染色法(dot-immunogoldsilver staining,Dot-IGSS)同步检测SLE患者血清ANA和A-dsDNA.结果169例活动期SLE患者血清ANA和A-dsDNA的阳性率分别为98.2%和77.2%;44例非活动期患者ANA和A-dsDNA的阳性率分别为72.2%和15.9%,两组比较,阳性率有显著性差异(P＜0.01).活动期病人的血清滴度也较非活动期患者高(P＜0.01);A-dsDNA阳性患者的肾损害率明显高于A-dsDNA阴性者(P＜0.01).结论ANA、A-dsDNA阳性且滴度高提示SLE处于活动期,A-dsDNA阳性提示有肾损害的可能;但A-dsDNA阴性亦不能排除SLE.
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胶体金快速诊断技术的研究进展
胶体金技术是一种常见的标记技术,自1971年Faulk和Taylon用兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合、制备成金标抗体检测细菌表面抗原的分布,30年来胶体金技术得到不断的发展和成熟,期间发展到扫描电镜、透射电镜及冰冻蚀刻电镜的研究,光镜水平的应用,银显影、蛋白质转移电泳、彩色免疫金银染色等领域,后引进到免疫诊断领域,与其他快速诊断技术(如ELISA、HPLC、RIA等)相比,胶体金技术由于方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点,目前已在此领域得到广泛应用,显示出了极大的魅力.
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半薄切片中免疫金银染色与石蜡切片中免疫组化染色的比较
免疫金-银染色(Imm unogold-silver,IGS)是1983年Holgate等用免疫金染色加银显影液增强的一种染色方法,可在光镜下观察到阳性反应结果.此法一经推出就受到了广大生物、医学研究人员的认可,给科学研究带来很大的方便.它特异性强,操作简便,而且经济,特别是近十几年来,经过不断改进,应用到半薄切片中,为免疫电镜的研究提供了基础.我们将其与石蜡切片中免疫组化的染色进行了比较研究.1、材料和方法 1.1材料 20例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为IgA肾病的肾活检组织环氧树脂包埋块.1.2方法 1)用NaOH无水乙醇脱树脂;2)10%过碘酸浸10m in,蒸馏水冲洗;3)切片入0.05M TBS pH7.4冲洗10min;4)正常山羊血清10min;5)TGFβ(1:10)和bFGF(1:10),室温孵育20h;6) 0.05M TBS洗10min×3次,0.02M TBS pH8.2 10min;7) 金标(1:20),室温孵育1～2hr;8)0.02M TBS洗10min,0.05 M TBS再洗10min×3,蒸馏水冲洗;9)柠檬酸缓冲液浸5min;10)银显影液染 20min,蒸馏水洗;11)减薄液数秒,充分洗涤;12)二甲基-天青Ⅱ、碱性复红衬染、冲洗、晾干、封固.2、结果 2.1IGS染色:大量的银染颗粒以近曲小管上皮细胞内表达为主(图1);2.2免疫组化染色(sABC法):TGFβ和bFGF大量的表达在皮质区近曲小管和部分远曲小管上皮细胞内(图2).3、讨论半薄切片不同于一般组织切片,由于细胞间关系及细胞组织结构保存良好,进行各种光学染色时更清晰,并可观察到石蜡切片中所不能观察到的微细结构,提高了光镜的分辨水平,为超薄结构水平的研究积累大量的资料.与石蜡切片比,即可节省药品,检测的成分定位更准确,又能在此基础上进行免疫电镜检查.在半薄切片上进行IGS染色时应注意 :1)低于0.05%戊二醛固定可以更好保存抗原性;2)脱环氧树脂812的时间不能少于 1小时;3)过碘酸中放置时间取决与半薄切片的厚度;4)一、二抗稀释液中要加BAS或P EG;5)配制银染液时在暗室加硝酸银,同时染色;6)半薄切片IGS染色对切片的洗涤比其它免疫染色法要求高,在缓冲液中要加表面活性剂,用TBS冲洗后还要用蒸馏水、双蒸水多次冲洗;7)组织在减薄液中的时间应光镜下控制.总之,半薄切片IGS染色法的阳性反应物清晰,对所检测成份存在位点更明确,为进行免疫电镜的进一步观察奠定了在三级切片(石蜡切片4-6μm、半薄0.5-1.0μm、超薄60-80nm)上准确定位的基础.
