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用Calcein释放实验检测HBs DNA疫苗诱生的特异性CTL活性
Calcein释放实验的基本原理为用荧光染料Calcein AM标记靶细胞.脂溶性的Calcein AM进入细胞后转变为水溶性,从而可潴留在细胞内而使细胞质染色,细胞杀伤后水溶性的Calcein可从细胞内释放出来,因此可用靶细胞释出的Calcein荧光值反映杀伤率.Lichtenfels R等报道该方法安全简易,与51 Cr释放法比较符合,可能替代51 Cr释放实验的方法.我们建立了用Calcein AM标记靶细胞检测CTL活性的方法,并对经不同途径接种HBs DNA疫苗的BALB/c小鼠针对HBs的特异性CTL进行了检测.
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基于核酸功能化的氧化石墨烯技术快速检测含SSeC基因鼠伤寒沙门氏菌的研究
目的:探索建立简单、高效、低成本的检测含SSeC基因鼠伤寒沙门氏菌的新方法。方法利用羧基荧光素( FAM)修饰的核酸探针( FAM-P)与氧化石墨烯( GO)非共价偶联成功构建了FAM-P/GO碳纳米生物传感器。考察该体系对不同浓度靶序列基因和含该靶基因的不同浓度菌体样品检测的灵敏性,并通过碱基错配试验和种属特异性试验验证其特异性。结果实验表明,该纳米生物传感器对靶标序列SSeC基因检测的低下限为0.05μmol/L,而且在0.05~1.0μmol/L范围内呈现良好的线性关系(R2=0.9921),对目标菌检测的低下限为103 CFU/ml,在103~108 CFU/ml范围内呈良好的线性关系(R2=0.9987),此外,该方法对实验组的信噪比要远远大于对照组,因此具有很高的特异性。结论成功构建了FAM-P/GO碳纳米生物传感器,为含SSeC基因鼠伤寒沙门氏菌的快速检测提供了一种可能的新方法。
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ZnO-AlBw复合材料对变形链球菌致病基因的影响研究
目的:探讨纳米氧化锌(ZnO)改性硼酸铝晶须(AlBw)对变形链球菌致病基因相对表达量的影响.方法:采用溶胶-凝胶法合成ZnO-AlBw复合材料,以变形链球菌为模型,观察复合材料对其致病基因(gtfB、gtfC、gtfD)的影响,通过扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射仪(XRD)、激光共聚焦显微镜(LSCM)和实时荧光PCR仪(RT-PCR)观察分析其结果表征.结果:ZnO通过物理化学方式改变AlBw表面结构,ZnO-AlBw复合材料可以破坏变形链球菌的胞膜结构,使细菌凋亡,并下调gtfB和gtfC基因,上调gtfD基因.结论:ZnO-AlBw复合材料具有抗菌性能,且影响变形链球菌的基因表达量.