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用Calcein释放实验检测HBs DNA疫苗诱生的特异性CTL活性
Calcein释放实验的基本原理为用荧光染料Calcein AM标记靶细胞.脂溶性的Calcein AM进入细胞后转变为水溶性,从而可潴留在细胞内而使细胞质染色,细胞杀伤后水溶性的Calcein可从细胞内释放出来,因此可用靶细胞释出的Calcein荧光值反映杀伤率.Lichtenfels R等报道该方法安全简易,与51 Cr释放法比较符合,可能替代51 Cr释放实验的方法.我们建立了用Calcein AM标记靶细胞检测CTL活性的方法,并对经不同途径接种HBs DNA疫苗的BALB/c小鼠针对HBs的特异性CTL进行了检测.
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融合表达HBsAg/HBcAg的重组质粒诱导的小鼠免疫应答
目的:探讨融合表达HBsAg/ABcAg的重组质粒的免疫诱生效果方法:从乙肝患者的血清中提取HBV DNA,采用pCR技术扩增HBV的S和C基因并拼接成SC片段.构建融合表达质粒pcDNA3.1-SC,以100μg肌肉接种BALB/c小鼠,2,4 wk后各加强1次.采用ELISA法检测小鼠血清抗-HBs和抗-HBc,LDH释放法检测体外CTL活性.结果:接种后3,5,8,12 wk,小鼠血清抗-HBs阳性率分别达到50%,75%,100%和50%,抗-HBs滴度在第8 wk达到峰值.而抗-HBc阳转率低于25%,抗体高滴度低于1:5.小鼠接种后5 wk时的特异性CTL活性为46.9±1.8%(效/靶比100:1).结论:融合表达质粒pcDNA3.1-SC能够同时诱生针对HBsAg/HBcAg的特异性细胞免疫和体液免疫应答,提示研制乙肝的免疫预防和治疗性基因疫苗的可能性.
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Tetramer和Elispot方法在评价特异性HIV-1细胞免疫反应中的应用和临床意义
大量的研究结果证明,艾滋病病毒1型(HIV-1)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在病毒的免疫学控制方面发挥着重要作用.对病人临床病情了解的需要促进了各种检测和定量HIV-1特异性CTL方法的发展.早的检测HIV-1特异性CTL的方法,是在51Cr释放法(Chromium release assay,CRA)的基础上发展起来的.
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紫外线照射对感染患者NK细胞活性的影响
国外文献报道紫外线照射正常人体后其体内NK细胞活性可发生改变,但尚未见到紫外线照射对疾病状态下NK细胞活性的影响.本实验采用微量乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定紫外线照射前后10例感染患者(呼吸道感染5例,带状疱疹5例)体内NK细胞活性的改变,并与15名正常人进行比较.结果发现在同样辐射条件下患者NK细胞活性在效靶比值10:1时,照射后比照射前降低为(26.03±9.78)%vs(14.27±6.34)%P<0.05);NK细胞活性在效靶比值20:1时,照射前后无显著变化(32.48+11.21)vs(31.01±10.38)%,(P>0.05);紫外线照射后与正常人比较NK细胞活性无显著性变化.表明紫外线照射可抑制活化的NK细胞与靶细胞的结合,在效靶比值较低时由于NK细胞数量相对更少,与靶细胞的结合率降低,因而造成NK细胞活性进一步下降.此外,以上结果还可能与紫外线照射波长和剂量的不同而引起不同的生化反应及免疫功能的改变有关.
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结膜入路弓缘脂肪释放法下睑袋修复术一种新的眼睑整复术
1995年Hamra[1]将老年、中年和年轻人的下睑形态学特点进行比较,指出颜面的老化进程呈现"骷髅化(skeletonization)"进展的特点,形成特有的睑颊沟、睑鼻沟和唇颊沟等衰老征象群.基于上述认识,Hamra设计了将眶隔脂肪弓缘释放填充眶下缘的整复术式[2].自1997年我们将其方法进行了改进,将外切口改进为经睑结膜入路的内切口,使这一全新概念的术式效果更加完善.现报道如下.
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猪人异种移植超急性排斥反应补体激活途径的探讨
异种移植大障碍是由体液免疫造成的超急性排斥反应(Hyperacute rejection,HAR).本实验用猪胸主动脉血管内皮细胞和人血清建立HAR体外模型,LDH释放法检测补体依赖的细胞毒作用,探讨HAR中补体激活途径.
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乙型肝炎病毒核心区DNA疫苗接种后H-2d小鼠的特异性免疫应答
目的观察乙型肝炎病毒(HBV)核心区DNA疫苗接种后BALB/c(H-2d)小鼠的特异性免疫应答.方法构建HBV核心区DNA疫苗(PJW4303/HBc);用基因枪法和肌内注射法将该DNA疫苗接种BALB/c小鼠;ELISA法检测小鼠血清抗-HBc(IgG)及IgG亚类(IgG1,IgG2a);51铬释放法检测小鼠脾细胞HBcAg特异性CTL活性.结果该DNA疫苗在体外转染细胞中可良好表达HBcAg.血清抗-HBc终点滴度在DNA疫苗基因枪组和肌肉注射接种组小鼠分别为1∶328 050和1∶109 350.两组小鼠的抗-HBcIgG亚型均以IgG2a略占优势.两组小鼠的HBbAg特异性CTL杀伤活性分别达到51.1%和55.2%.结论 HBV核心区DNA疫苗在小鼠实验中具有良好的细胞免疫和体液免疫原性.
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IL-12单独或联合应用IL-2对脐血单个核细胞增殖及杀瘤活性的影响
目的观察白细胞介素12(IL0-12)和/或白细胞介素2(IL-2)对脐血单个核细胞(CBMC)增殖和抗肿瘤活性的影响.方法分别以3H-TdR掺人法和3H-TdR释放法测定增殖作用及抗瘤活性.结果 IL-12单独不能促进CBMC增殖,但能与IL~2协同增强CBMC的增殖作用;10IU/mlIL-12和同浓度IL-2合用能使CBMC产生较强的抗肿瘤作用,对K562及Raji细胞的杀伤率分别是(47.60±4.60)%和(38.67±4.86)%;CBMC的NK活性和LAK活性均明显高于肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC).结论 CBMC经10IU/mlIL-12和IL-2刺激后能发挥强而持久的增殖效应和大的抗瘤活性,本实验为脐血替代外周血在过继免疫疗法中的应用提供重要的实验依据.[关键司]IL-12 IL-2脐血单个核细胞过继免疫疗法