首页 > 文献资料
-
二氧化钛纳米颗粒对大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响研究
目的 探讨不同粒径的二氧化钛纳米颗粒(TiO2-NPs)对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383凋亡的影响.方法 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383暴露于粒径为10、30、50、100 nm二氧化钛纳米颗粒48 h后,采用CCK-8法检测NR8383的细胞活力,Hoechst33258染色观察凋亡的核形态,PI单染流式细胞术检测凋亡情况.结果 不同浓度不同粒径Tio2-NPs作用48 h后,与正常对照细胞组相比,NR8383细胞活力和凋亡率在同一粒径下随浓度增加而增加,同一浓度下随粒径增加而降低.结论 二氧化钛纳米颗粒对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383凋亡有一定的影响,这与TiO2-NPs的粒径和浓度有关.
-
抗CD14单克隆抗体对脓毒症大鼠肺组织趋化因子和可溶性细胞间黏附因子-1表达的影响
目的 探讨抗CD14单克隆抗体(Anti-CD14McAb)治疗大鼠脓毒症急性肺损伤的保护机制.方法 在体部分:18只雄性Wistar大鼠(200~250 g)随机均分为3组,假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)和抗CD14治疗组(Anti-CD14组),CLP组和Anti-CD14组采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症急性肺损伤模型,Sham组作为对照组,开腹后只翻动盲肠,不进行结扎穿孔.Anti-CD14组术后经股静脉注射Anti-CD14McAb 0.2 ml(1μg/ml),Sham组、CLP组术后经股静脉注射等量生理盐水0.2 ml,6 h后经腹主动脉抽血,测定3组大鼠血浆中趋化因子(KC)和可溶性细胞间黏附因子-1(sICAM-1)表达水平,右肺下叶HE染色,观察肺组织病理结构的改变.离体部分:将培养的NR8383一部分接种于24孔培养板,分为3组,对照组(Ⅰ组)、脓毒症模型组(Ⅱ组)和Anti-CD14干预组(Ⅲ组).Ⅰ组加入正常血浆,Ⅱ组加入脓毒症血浆,Ⅲ组加入脓毒症血浆和Anti-CD14McAb共同干预,37℃、5%CO2培养箱孵育1 h,刮取NR8383,采用Western blot测定NR8383内NF-κB(p65)蛋白的表达水平;另一部分接种在预先放入适当大小灭菌消毒的盖玻片的24孔板上,分组及干预措施同上,采用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)检测NR8383内NF-κB(p65)蛋白入核情况.结果 在体实验提示:(1)与Sham组[KC:(72.645±19.860)pg/ml;sICAM-1:(252.766±19.921)pg/ml]相比,CLP组血浆KC、sICAM-1水平[KC:(490.316±43.403)pg/ml;sICAM-1:(686.952±36.411)pg/ml]和Anti-CD14组血浆KC、sICAM-1水平[KC:(348.150±20.924)pg/ml;sICAM-1:(411.050±47.170)pg/ml]明显升高,而Anti-CD14组KC、sICAM-1水平明显低于CLP组,差异有统计学意义(P<0.05);肺组织病理结果 提示CLP组肺间质明显增厚、肺间质及肺泡腔内有大量炎症细胞浸润,Anti-CD14组症状较CLP组明显减轻,但较Sham组有所增加;细胞实验Western blot检测显示:Ⅱ组(2.1903±0.1199)和Ⅲ组(1.3658±0.1018)NR8383的NF-κB(p65)入核量高于Ⅰ组(1.0122±0.0780),Ⅲ组的NF-κB(p65)入核量低于Ⅱ组,差别有统计学意义(P<0.05).细胞实验CLSM检测结果 提示:与Ⅰ组(0.131±0.009)相比,Ⅱ组(0.685±0.037)和Ⅲ组(0.210±0.008)NR8383 NF-κB(p65)蛋白入核明显升高,而Ⅲ组NR8383 NF-κB(p65)蛋白入核低于Ⅱ组(0.685±0.037),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Anti-CD14McAb在脓毒症急性肺损伤时可能调控肺泡巨噬细胞NF-κB(p65)蛋白入核,使其KC表达减少,进而减少中性粒细胞浸润,起到肺保护作用;同时Anti-CD14McAb能抑制内皮细胞表达sICAM-1,减少中性粒细胞对内皮细胞的黏附作用,起到肺保护作用.
关键词： 脓毒症 急性肺损伤 NR8383 抗CD14单克隆抗体 NF-κB(P65) -
微小 RNA-30e 在脓毒症急性肺损伤大鼠中的表达及其与炎性因子水平的相关性
目的：从体内和体外实验2个方面探讨微小 RNA-30e（ miR-30e）在脓毒症诱导急性肺损伤（ALI）发生时的差异表达及其与炎性因子 IL-1β、TNF-α表达的相关性。方法30只雄性 SD 大鼠随机等量分为5组：正常对照组，脓毒症3、6、12、24 h 组，腹腔注射脂多糖（LPS）10 mg/ kg 构建脓毒症大鼠 ALI 模型。体外培养大鼠肺泡巨噬细胞株 NR8383，分为空白对照组和以终质量浓度1 mg/ L LPS 刺激3、6、12及24 h 组，采用反转录聚合酶链反应检测 IL-1β、TNF-α及 miR-30e 表达水平，并观察大鼠肺组织病理改变。结果脓毒症组大鼠肺组织中 IL-1β、TNF-α水平均较正常对照组明显上调，差异均有统计学意义（P 均﹤0.01）；HE 染色示脓毒症组大鼠肺组织呈 ALI 改变；脓毒症组大鼠3、6、12、24 h 肺组织 miR-30e 表达水平分别为0.26±0.02、0.41±0.08、0.29±0.05和0.18±0.05，均明显低于正常对照组（1.23±0.24），差异均有统计学意义（P 均﹤0.01）；NR8383细胞中，与空白对照相比，LPS 刺激不同时间点炎性因子 IL-1β、TNF-α水平均明显上调，差异均有统计学意义（ P 均﹤0.01）；LPS 刺激3、6、12、24 h 时间点细胞中miR-30e 表达水平分别为0.27±0.04、0.55±0.05、0.65±0.02、0.41±0.10，均明显低于空白对照组（1.17±0.21），差异均有统计学意义（ P 均﹤0.01）；各实验组大鼠肺组织中 miR-30e 的表达与 IL-1β、TNF-α水平均呈负相关（IL-1β：r =-0.417，P =0.022；TNF-α：r =-0.437，P =0.016）；LPS 刺激 NR8383细胞后不同时间点细胞中 miR-30e 的表达与IL-1β、TNF-α水平亦均呈负相关（IL-1β：r =-0.713，P =0.003；TNF-α：r =-0.712，P =0.002）。结论 miR-30e 在脓毒症大鼠诱导 ALI 发生时的表达量显著下调，并与炎性因子 IL-1β、TNF-α表达水平呈负相关，有望成为脓毒症 ALI 早期诊断、治疗、预后评估新的生物学标志。
