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黄柏提取物抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒复制机制的初步研究
目的 研究黄柏对Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)功能蛋白和其对细胞因子的作用,探讨黄柏多渠道抑制HSV-1病毒的机制.方法 将病毒接种到药物处理后的HLLa 细胞上,荧光显微镜观察病毒增殖变化,qPCR检测病毒囊膜表面糖蛋白gD与功能蛋白US1的转录水平表达.药物孵育HeLa细胞24 h后,qPCR检测IP-10、IL-12、IFN-γ等固有免疫因子转录水平表达变化.免疫荧光检测NF-κB(P65)核定位的情况.结果 荧光显示病毒在8、40 n/ml药物浓度下增殖显著减少(P＜0.01);且病毒蛋白gD与US1转录水平下降(P＜0.05).药物孵育HeLa细胞24 h后,qPCR检测显示,细胞IP-10、IL-12、IFN-y等转录水平显著升高(P＜0.01).同时免疫荧光显示各组NF-κB(P65)入核率有所上升(P＜0.05).结论 黄柏提取物可通过抑制病毒功能蛋白转录及促进细胞免疫因子表达来抑制HSV-1.
关键词： 黄柏 HSV-1 病毒囊膜表面糖蛋白 免疫因子 NF-κB(P65) -
抗CD14单克隆抗体对脓毒症大鼠肺组织趋化因子和可溶性细胞间黏附因子-1表达的影响
目的 探讨抗CD14单克隆抗体(Anti-CD14McAb)治疗大鼠脓毒症急性肺损伤的保护机制.方法 在体部分:18只雄性Wistar大鼠(200~250 g)随机均分为3组,假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)和抗CD14治疗组(Anti-CD14组),CLP组和Anti-CD14组采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症急性肺损伤模型,Sham组作为对照组,开腹后只翻动盲肠,不进行结扎穿孔.Anti-CD14组术后经股静脉注射Anti-CD14McAb 0.2 ml(1μg/ml),Sham组、CLP组术后经股静脉注射等量生理盐水0.2 ml,6 h后经腹主动脉抽血,测定3组大鼠血浆中趋化因子(KC)和可溶性细胞间黏附因子-1(sICAM-1)表达水平,右肺下叶HE染色,观察肺组织病理结构的改变.离体部分:将培养的NR8383一部分接种于24孔培养板,分为3组,对照组(Ⅰ组)、脓毒症模型组(Ⅱ组)和Anti-CD14干预组(Ⅲ组).Ⅰ组加入正常血浆,Ⅱ组加入脓毒症血浆,Ⅲ组加入脓毒症血浆和Anti-CD14McAb共同干预,37℃、5%CO2培养箱孵育1 h,刮取NR8383,采用Western blot测定NR8383内NF-κB(p65)蛋白的表达水平;另一部分接种在预先放入适当大小灭菌消毒的盖玻片的24孔板上,分组及干预措施同上,采用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)检测NR8383内NF-κB(p65)蛋白入核情况.结果 在体实验提示:(1)与Sham组[KC:(72.645±19.860)pg/ml;sICAM-1:(252.766±19.921)pg/ml]相比,CLP组血浆KC、sICAM-1水平[KC:(490.316±43.403)pg/ml;sICAM-1:(686.952±36.411)pg/ml]和Anti-CD14组血浆KC、sICAM-1水平[KC:(348.150±20.924)pg/ml;sICAM-1:(411.050±47.170)pg/ml]明显升高,而Anti-CD14组KC、sICAM-1水平明显低于CLP组,差异有统计学意义(P<0.05);肺组织病理结果 提示CLP组肺间质明显增厚、肺间质及肺泡腔内有大量炎症细胞浸润,Anti-CD14组症状较CLP组明显减轻,但较Sham组有所增加;细胞实验Western blot检测显示:Ⅱ组(2.1903±0.1199)和Ⅲ组(1.3658±0.1018)NR8383的NF-κB(p65)入核量高于Ⅰ组(1.0122±0.0780),Ⅲ组的NF-κB(p65)入核量低于Ⅱ组,差别有统计学意义(P<0.05).细胞实验CLSM检测结果 提示:与Ⅰ组(0.131±0.009)相比,Ⅱ组(0.685±0.037)和Ⅲ组(0.210±0.008)NR8383 NF-κB(p65)蛋白入核明显升高,而Ⅲ组NR8383 NF-κB(p65)蛋白入核低于Ⅱ组(0.685±0.037),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Anti-CD14McAb在脓毒症急性肺损伤时可能调控肺泡巨噬细胞NF-κB(p65)蛋白入核,使其KC表达减少,进而减少中性粒细胞浸润,起到肺保护作用;同时Anti-CD14McAb能抑制内皮细胞表达sICAM-1,减少中性粒细胞对内皮细胞的黏附作用,起到肺保护作用.
关键词： 脓毒症 急性肺损伤 NR8383 抗CD14单克隆抗体 NF-κB(P65) -
抗CD14单克隆抗体对脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞内NF-κB(p65)影响的研究
目的 探讨抗CD14单克隆抗体在大鼠脓毒症急性肺损伤中对肺泡巨噬细胞内NF-κB (p65)的影响.方法 15只雄性SD大鼠,体重(150±20)g,随机分为3组,Sham组、CLP组和Anti-CD14组,每组5只,选用经典的盲肠结扎穿孔(CLP)法制作急性肺损伤动物模型.造模成功后6 h,应用 ELISA检测血浆MIP-2、IL-10浓度,左肺采用Western blot测定肺内NF-κB(p65)蛋白的表达水平,取右肺下叶行 HE 染色、切片后在光镜下观察肺脏病理形态变化.以 Sham组作为对照组.结果 ELISA结果显示:CLP组的血浆MIP-2浓度显著高于Sham组和Anti-CD14组,Anti-CD14组的血浆MIP-2浓度低于CLP组,有统计学差异(P<0.05);三组的血浆IL-10浓度比较无统计学差异(P>0.05);Western blot检测显示:CLP组和Anti-CD14组的NF-κB(p65)表达量高于Sham组(P<0.05),Anti-CD14组的NF-κB(p65)表达量低于CLP组(P<0.05).HE染色显示:CLP 组和Anti-CD14组肺内均出现炎症细胞浸润、肺间质增厚、出血,Anti-CD14组肺组织炎性表现较CLP组显著减轻.结论 抗CD14单克隆抗体能同脂多糖竞争性地结合肺泡巨噬细胞膜表面受体CD14分子,阻止肺内NF-κB(p65)的核内移位,减少致炎因子生成和释放,抑制炎症细胞浸润,起到肺保护作用.
关键词： 巨噬细胞 肺泡 急性肺损伤 抗CD14单克隆抗体 NF-κB(P65) -
苗药香囊对小鼠肺组织中NF-κB表达的影响
目的 探讨苗药香囊对小鼠肺组织中核因子-κB(NF-κB)(P65)表达的影响.方法 昆明种雄性小鼠80只,随机分为8组,空白对照组(A组)、匹多莫德组(阳性对照组,C组)、苗药香囊组(E组)、匹多莫德+苗药香囊组(G组)、冷刺激组(B组)、匹多莫德冷刺激组(D组)、苗药香囊冷刺激组(F组)、匹多莫德+苗药香囊冷刺激组(H组).预防用药4周后,B、D、F、H四组予冷刺激[(4±1)℃暴露3 h]4 d制造冷刺激免疫低下模型.采用免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot法检测小鼠肺组织中NF-κB(P65)的表达.结果 与A组比较,E、C、G组小鼠肺泡上皮细胞NF-κB(P65)表达增加,差异有统计学意义(P<0.05).与B组比较,F、D、H组小鼠肺泡上皮细胞NF-κB(P65)表达增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 苗药香囊能够上调小鼠肺组织中NF-κB(P65)的表达,增强呼吸道免疫力.
关键词： 苗药香囊 NF-κB(P65) 民族医药 -
加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞NF-κB(p65)活性和表达的影响
目的:研究加味四君子汤含药血清对转录因子核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65的活性和表达的影响.方法:应用血清药理学方法给药,37℃、5％ CO2的恒温培养箱中培养B16恶性黑色素瘤细胞,收集对数期细胞,小鼠含药血清终浓度为10％,作用24h.实验分为空白对照组、血清对照组、4.61 g/kg、9.22 g/kg、18.44 g/kg加味四君子涛含药血清组和5 mg/L顺铂组,每组含5个样本数.分别应用Real-Time PCR法、EMSA法、Westem blot法检测加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞活性和表达的影响.结果:加味四君子汤含药血清作用24 h后,呈剂量依赖式降低NF-κB(p65)的活性和基因蛋白表达,与空白对照组和血清对照组相比,9.22 g/kg中药组、18.44 g/kg中药组和5 mg/L顺铂组分别显著降低NF-κB(p65)活性、mRNA及蛋白表达(P＜0.05),但5 mg/L顺铂组活性、mRNA及蛋白表达低于9.22 g/kg中药组,高于18.44 g/kg中药组.结论:加味四君子汤含药血清能够降低恶性黑色素瘤细胞NF-κB(p65)的活性和表达水平,NF-κB(p65)可能是加味四君子汤含药血清抗恶性黑色素瘤的机制之一.
关键词： 加味四君子汤 血清药理学 B16恶性黑色素瘤细胞 NF-κB(P65)
