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药物干预对低能量激光视网膜损伤后NMDAR表达的影响
目的 观察MK-801对低强度激光视网膜照射后谷氨酸受体(NMDAR)表达的拮抗作用,探讨MK-801治疗激光视网膜损伤的可能机制.方法 用氦氖激光造成大鼠视网膜损伤模型,照后即刻肌注MK-801(2 mg/kg),通过免疫组化和原位杂交等方法,观察MK-801对激光照射后视网膜细胞中NMDAR蛋白和mRNA表达变化的影响.结果 免疫组化和原位杂交的结果显示,激光照射后视网膜中NMDAR的表达显著增加,与视网膜的损伤程度相一致,照后给予MK-801可明显地减少视网膜中NMDAR的表达.结论 谷氨酸受体的高表达可能是激光致眼损伤的机制之一,而MK-801可以通过抑制其表达来拮抗低强度激光所导致的视网膜损伤.
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电针预处理对血管性痴呆大鼠神经细胞谷氨酸-NMDA受体信号转导通路的影响
目的:观察电针预处理对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠防治作用的可能机制.方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针预处理组.采用改良线栓法制备VD模型.电针预处理"百会""肾俞""后三里"穴,连续波,频率为100次/min,强度1 mA,每日1次,连续进行10 d.用比色法测定各组大鼠海马谷氨酸(Glu)含量的变化,原位杂交法测定海马N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR 1)mRNA表达的变化.结果:模型组海马Glu含量、NMDAR 1 mRNA表达明显高于假手术组(P<0.01),电针预处理组海马Glu含量、NMDAR 1 mRNA表达明显低于模型组(P<0.05).结论:电针预处理可降低VD鼠海马组织Glu含量,下调海马NMDAR 1的表达,因而有可能通过减轻Glu-NMDAR信号路径诱导的细胞凋亡发生,保护脑细胞.
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丹参酮B钠盐对脑缺血再灌注损伤大鼠海马不同亚区NMDAR1蛋白表达的影响
目的 观察大鼠脑缺血再灌注损伤后海马不同亚区神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl D-aspartate receptor,NMDAR)蛋白表达变化规律及丹参酮B钠盐对其的影响,探讨丹参酮治疗脑缺血可能的作用机制.方法 采用栓线法制备局灶性脑缺血再灌注动物模型,将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参酮B钠盐低、中、高剂量组.参照Zea Longa EL的5级评分标准对其神经功能障碍进行评分;应用免疫组织化学方法检测缺血侧NMDAR1通道蛋白表达情况.结果 神经功能缺损评分,丹参酮B钠盐中、高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01).免疫组织化学结果显示:在CA1区,模型组、丹参酮B钠盐低剂量组、中剂量组NMDAR1的表达显著高于假手术组(P＜0.01),丹参酮B钠盐高剂量组NMDAR1的表达显著低于模型组、丹参酮B钠盐低剂量组(P＜0.01)和丹参酮B钠盐中剂量组(P＜0.05).在CA3区,模型组、丹参酮B钠盐低剂量组NMDAR1的表达显著高于假手术组、中剂量组和高剂量组(P＜0.01),丹参酮B钠盐中、高剂量组NMDAR1的表达显著高于假手术组(P＜0.05).结论 丹参酮B钠盐可促进脑缺血再灌注大鼠神经功能的恢复.丹参酮B钠盐通过降低兴奋性神经递质谷氨酸、减少NMDAR1通道蛋白表达而对抗脑缺血再灌注损伤.
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脊髓背角神经元凋亡在炎性痛大鼠吗啡耐受中作用研究
目的:探讨NMDAR及谷氨酸转运体(GT)在阿片耐受机制中的作用,以及脊髓神经元凋亡在慢性阿片耐受形成机制中的意义.方法:将60只健康雄性SD大鼠行鞘内置管后随机分为6组(n=10),空白对照组(A)于左后足踝关节腔注射生理盐水50μl,其他5组注射CFA 50μl.3d后分别经鞘内给予生理盐水10μl(A和B)、吗啡10μg(C组)、吗啡20μg(D组)、吗啡10μg+NMDA受体抑制剂MK-801 10nM(E组)、吗啡10μg+GT抑制剂PDC10μg(F组),1日2次,连续给药7 d.检测大鼠左后肢机械缩爪阈值评价其痛行为学,于给药后第7天取出左侧腰膨大处脊髓进行TUNEL染色和Western blotting检测.结果:C、D两组关节炎大鼠在鞘内给予吗啡第7天形成较稳定的吗啡耐受,MK-801和PDC分别对吗啡耐受的机械痛敏具有抑制和促进作用.B组大鼠脊髓背角凋亡细胞数及凋亡相关蛋白表达与A组比较,差异无统计学意义.与B组比较,C、D组大鼠脊髓背角的凋亡细胞数显著增加(P＜0.01),Bax和caspase-3蛋白表达上调(P＜0.01),Bcl-2表达下调(P＜0.01).与C组比较,E组大鼠脊髓背角凋亡细胞显著减少(P＜0.05),Bax和caspase-3蛋白表达下调(P＜0.01),Bcl-2表达上调(P＜0.05);F组凋亡细胞增多(P＜0.01),Bax和caspase-3蛋白表达上调(P＜0.01),Bcl-2表达下调(P＜0.01).结论:脊髓神经元凋亡可能是慢性阿片耐受的神经基础,NMDAR及GT在阿片耐受的神经细胞凋亡过程中发挥作用.
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高氧暴露对新生大鼠肺泡巨噬细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响
氧疗是临床不可缺少的抢救措施,然而新生儿长时间吸入高浓度氧常可引起严重的肺损伤~([1]).N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)过度激活引起的兴奋性神经毒性在急性脑损伤及多种神经系统退行性疾病的发生发展中有重要的作用~([2]).本研究小组前期研究发现,在整体水平上NMDAR的激活在新生大鼠高氧性肺损伤的发展过程中发挥重要作用~([3]).Dickman等~([4])报道大鼠肺泡巨噬细胞存在NMDAR,但高氧暴露是否会影响新生大鼠肺泡巨噬细胞NMDAR的表达罕见报道.因此,本研究旨在探讨高氧暴露对新生大鼠肺泡巨噬细胞NMDAR的影响.
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三七三醇皂苷减轻氧化应激、影响认知相关基因改善慢性缺血性脑血管病大鼠认知功能
目的 研究三七三醇皂苷对慢性缺血性脑血管病导致认知功能障碍的治疗作用及其相关机制.方法 30只Wistar成年大鼠随机分为假手术组(SH)、慢性缺血性脑血管病组(2-VO)、慢性缺血性脑血管病+三七三醇皂苷治疗组(2-Votreat),6周后用Y型迷宫测试认知功能,用黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸显色发测定SOD超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),实时荧光PCR检测N-甲基-D-门冬氨酸受体(NMDAR)和r-氨基丁酸A受体的mRNA表达.结果 SH组达到学会标准所需电击次数为(68.3±3.46)次,2-VO组和2-Votreat组分别为(90.2±5.37)和(80.7±2.35)次.SH组MDA含量和SOD活性分别为(3.82±0.47) nmol/mg.prol和(98.73±5.49) U/mg.prol,2-VO组和2-Votreat组分别为(8.79±0.51) nmol/mg.prol、(67.68±4.93)U/mg.prol和(6.71±0.24) nmol/mg.prol和(81.09±6.75)U/mg.prol.2-VO组和2-Votreat组与SH组相比,NMDAR和r-氨基丁酸A受体的mRNA表达明显降低(P<0.05).2-VO组与2-Votreat组相比NMDAR和r-氨基丁酸A受体的mRNA表达明显降低(P<0.05).结论 慢性缺血性脑血管病可以导导致认知功能障碍,三七三醇皂治疗可以改善慢性缺血性脑血管病导致认知功能障碍、减轻氧化应激损伤、改善认知相关基因N M D A R 和r 氨基丁酸A受体的m R N A表达.
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电针“百会”、“印堂”增强针刺对慢性疼痛大鼠镇痛作用的实验观察
目的 实验观察抗抑郁电针组穴对“慢性疼痛”的针刺镇痛的增强效应及机制.方法 60只大鼠分为空白对照组,模型处理组,针刺1组(针刺“膝眼”+“足三里”穴组),针刺2组:(针刺1组+“膝眼”、“足三里”穴组),弗氏佐剂性关节炎模型,实验第54天检测Openfield实验,改良冷水缩足测痛实验,同时进行脑内NMDAR免疫组化测定.结果 与模型组比较,两组针刺组大鼠的openfield实验和改良冷水缩足测痛实验结果都有一定差异(均P＜ 0.05),针刺2组有更好的改善情绪和减轻疼痛的趋势;与模型组比较,各组间脑内NMDAR免疫组化表达阳性率均有显著差异(均P＜0.01).结论 常规针刺配合抗抑郁组穴可能通过降低脑内NMDAR表达来起到加强镇痛效果.
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砷暴露对仔代小鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体水平的影响
目的 研究砷暴露对不同发育阶段小鼠仔鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)水平的影响,探讨砷暴露引起学习记忆能力损伤的可能机制.方法 建立不同发育阶段小鼠仔鼠砷暴露模型,砷暴露浓度分别为0、15、30和60 mg/L,记录体重,分别于仔鼠出生后(postnatal day,PND)10、20、40 d取脑组织并分离海马,采用RT-PCR检测NMDAR亚单位NR1、NR2A和NR2B mRNA水平.结果 60 mg/L砷暴露组仔鼠PND20的体重低于对照组和15 mg/L组,30、60 mg/L砷暴露组仔鼠PND40的体重低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).各浓度砷暴露组仔鼠PND20的海马NR1和NR2B mRNA水平均低于对照组,60 mg/L砷暴露组仔鼠PND20的海马NR2A水平低于对照组;60 mg/L砷暴露组仔鼠PND40的海马NR1、NR2A和NR2B mRNA水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 砷暴露可使仔鼠海马NMDAR亚单位的水平降低,进而可能影响仔鼠的学习记忆能力.
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氦氖激光辐照致眼损伤的机制研究
目的 探讨氦氖激光致眼损伤效应及可能的作用机制.方法 建立氦氖激光的大鼠眼损伤模型,通过组织病理染色、凋亡检测以及原位杂交等方法,观察激光照后视网膜细胞结构变化及谷氨酸受体(NMDAR)的表达.结果 光学显微镜下观察显示激光照后视网膜出现组织结构的紊乱和感光细胞的凋亡,同时伴有NMDAR mRNA的高表达.结论 氦氖激光在一定的条件下可造成视网膜的病理性损伤,损伤局部谷氨酸的过度释放及NMDAR受体的高表达可能是感光细胞受损的重要机制.
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GBE对大鼠急性分离海马神经元NMDA-激活电流的调制作用
目的:观察不同制型的银杏叶提取物(GBE)对N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体激活电流的影响,并比较其作用.方法:应用全细胞膜片钳记录技术记录急性分离大鼠海马神经NMDA激活电流,比较加药前后电流幅度的变化.结果:大部分受检细胞(81.8%,90/110)对外加NMDA敏感,引起一去敏感的内向电流(INMDA).此电流可被NMDA受体特异阻断剂(MK-801)所阻断.预加不同制型的GBE均能明显抑制NMDA激活电流(P＜0.01),但制型不同抑制效应不一,GBE纳米制剂(nGBE)对INMDA的抑制作用明显优于微米型(mGBE组),抑制率分别为64%±15%,40%±17%(n=8),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:预加GBE能抑制NMDA-激活电流,从而对抗海马神经元兴奋毒性脑损伤,起神经保护作用.nGBE对NMDA受体的调控作用优于mGBE制剂.
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电针对脑缺血再灌注模型大鼠海马NMDA受体2A、2B亚型表达的影响
目的:观察NMDA受体亚单位NR2A和NR2B在缺血再灌注损伤大鼠海马结构中的表达,探讨电针“百会”、“大椎”穴对神经元的保护作用.方法:将雄性SD大鼠15只随机分为假手术组、模型组、电针组,每组各5只.采用改良Longa线栓大脑中动脉法复制局灶性脑缺血再灌注模型;电针组取“百会”及“大椎”两穴,采用连续波刺激30 min,电流强度1～3mA,频率3Hz.用免疫组织化学方法观察受损侧海马区NMDA受体2A与2B亚型表达的变化.结果:与假手术组比较,模型组NR2A蛋白表达降低(P＜0.05);NR2B蛋白表达升高(P＜0.05);给予电针治疗后NR2A蛋白表达升高(P＜0.05);NR2B蛋白表达降低.结论:电针通过调节脑缺血再灌注受损侧海马组织神经细胞NR2A与NR2B的异常表达,发挥对神经元的保护作用.
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N-甲基-D-天冬氨酸受体介导升降散治疗大鼠神经病理性疼痛过程中的作用机制
目的:探究N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)蛋白含量及磷酸化水平在升降散治疗大鼠神经病理性疼痛过程中的作用机制.方法:构建大鼠右侧改良坐骨神经慢性缩窄性损伤(iCCI)经典动物模型,并采用不同剂量的升降散给iCCI模型大鼠进行灌胃处理,在给药第1、7、21天分别取脊髓组织,对NMDAR和p-NMDAR水平进行检测.结果:不同时间点,正常组NMDAR及p-NMDAR相对含量较稳定,模型组NMDAR及p-NMDAR呈上升趋势,治疗组,尤其是高剂量组,呈现下降趋势,且在不同时间点,各组NMDAR及p-NMDAR相对含量存在显著性P＜0.05差异.结论:NMDAR及p-NMDAR拳与了升降散治疗大鼠神经病理性疼痛过程中,通过抑制NMDAR水平及NMDAR磷酸化,有效的治疗了大鼠神经病理性疼痛.
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中药YN-3号对慢性应激大鼠行为学及海马GR NMDAR表达的影响
目的:探讨中药YN-3号对慢性应激模型大鼠抑郁状态相关行为学的影响及其作用机制. 方法:40只SD大鼠分为空白组、模型组、YN-3组和氟西汀组,应用慢性复合应激方法造模,进行抑郁状态相关行为学检测,包括Open-field实验,强迫游泳实验和"Y"迷宫实验.免疫组化方法检测海马内GR、NMDAR表达情况. 结果:与空白组比较,模型组大鼠的探究活动减少(P<0.01),强迫游泳持续时间延长(P<0.01),学习记忆能力降低(P<0.01),YN-3组大鼠相应行为学实验比模型组有显著提高(P<0.01,P<0.05,P<0.05);模型大鼠海马内GR、NMDAR阳性表达强度显著降低(P<0.01),YN-3组海马内GR、NMDAR的阳性表达强度有所提高(P<0.01). 结论:提示中药YN-3号可以减轻慢性应激引起大鼠抑郁状态的程度,其机制可能与脑内GR、NMDAR表达变化有关.
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以NMDAR为靶点的药物研究进展
N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)属于离子型谷氨酸能受体,是由NR1、NR2和NR3三种亚基构成.近年来NMDAR已经逐渐成为中枢系统疾病(如抑郁症、神经痛、精神分裂症和阿尔兹海默症等)治疗的重要靶点,目前已有多个治疗药物处于临床试验阶段.本文主要综述NMDAR拮抗剂、激动剂及其调节剂的药物研究进展.
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CRMP2衍生的ST2-104多肽对阿尔茨海默病大鼠皮质神经元的保护作用
目的 研究ST2-104肽对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑皮质内NMDAR1、NMDAR2B、CRMP2、P-CRMP2的表达影响,进而改善大鼠的认知功能,对神经元发挥保护作用.方法 采用单次单侧脑室微量注射Aβ25-35片段制备AD大鼠模型,具有相同遗传背景的Wistar大鼠作为假手术对照组,分别给予不同剂量的ST2-104多肽和盐酸美金刚治疗.Aβ注射2d后给药10 d,HE染色法观察脑皮质部分形态变化,甲醇刚果红染色法观察淀粉样物质沉积情况,WB及免疫组化法检测大鼠脑皮质组织NMDAR1、NMDAR2B、CRMP2、P-CRMP2的表达.结果 与假手术组相比,模型组淀粉样物质沉积明显增多,脑皮质部分NMDAR2B表达显著增多(P＜0.01),NMDAR1表达相对减少,P-CRMP2与CRMP2表达量均无明显差异;ST2-104多肽可以逆转上述现象,降低NMDAR2B表达(与模型组相比,高剂量组P＜0.05),增加NMDAR1表达(与模型组相比,高、低剂量均为P＜0.05).结论 (1)ST2-104可能通过减少NMDAR2B表达降低其活性来发挥对AD大鼠皮质神经元的保护作用.
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脑出血后抑郁大鼠脑内NMDA受体NR1 mRNA、NR2B mRNA表达及中药干预作用
目的:观察脑出血后抑郁大鼠脑内NMDA受体亚单位NR1mRNA、NR2BmRNA的表达及中药颐脑解郁方的干预作用.方法:建立脑出血后抑郁模型,采用逆转录PCR(RT-PCR)实验方法,研究NR1mRNA、NR2B mRNA在脑出血后抑郁模型及假手术大鼠脑内左前额叶皮质、海马的表达及中药颐脑解郁方的干预作用.结果:模型组及假手术组大鼠海马、前额皮质的NR1、NR2B表达明显高于正常组,中药颐脑解郁方干预后可明显降低NR1 mRNA、NR2B mRNA在脑内的表达.结论:卒中后抑郁模型大鼠脑内NR1 mRNA、NR2B mRNA表达升高,中药颐脑解郁方可使之明显下调,中药颐脑解郁方的抗抑郁作用可能与下调NMDAR的表达有关.
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NMDAR在瑞芬太尼引起痛觉过敏机制和防治的研究进展
阿片类药物引起痛觉过敏(opioid-induced hyperalgesia,OIH)是指暴露于阿片类药物的患者出现一种痛阈降低和对正常疼痛刺激的超敏反应为特点的感觉异常现象.瑞芬太尼是一种μ受体激动剂,且由于起效迅速,时量半衰期短而恒定,重复用药亦无蓄积,这些良好的药代动力学特点导致它发生的痛觉过敏现象也明显频于、强于其他阿片类药物. N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)激活在产生超敏现象中是非常重要的.但是关于NMDAR在瑞芬太尼诱发痛觉过敏的机制尚未完全清楚,仍然缺乏系统的预防和治疗方案.本文简要介绍了NMDAR,总结了NMDAR在瑞芬太尼引起痛觉过敏的机制中的作用,归纳了临床上一些NMDAR拮抗药物来预防瑞芬太尼引起的痛觉过敏现象,以期对后续的围术期的疼痛管理提供理论依据.
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海马缺血性损伤中谷氨酸Glu及其NMDA受体的作用
脑缺血缺氧促使谷氨酸(Glu)大量释放,过度激活受体NMDAR,介导兴奋性损伤作用,破坏脑神经元.兴奋性氨基酸及其受体过度激活所致的兴奋毒性作用可能是缺血缺氧脑损伤中的共同通路.海马的缺血缺氧损伤将导致学习记忆能力降低.
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PC12细胞铝染毒后代谢型谷氨酸受体1在PKC和NMDAR表达中的调控作用
[目的]探讨激动和抑制代谢型谷氨酸受体1(mGluR1)蛋白表达对麦芽酚铝染毒的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株(PC12)蛋白激酶C(PKC)及N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)表达的影响.[方法]取对数生长期PC12细胞,分为空白对照组(正常PC12细胞)、激动剂组(100 μmol/L mGluR1激动剂)、抑制剂组(100 μmol/L mGluR1抑制剂)、麦芽酚铝染毒组(200 μmol/L麦芽酚铝)、染铝+激动剂组(100 μmol/L mGluR1激动剂+200μmol/L麦芽酚铝)、染铝+抑制剂组(100 μmol/L mGluR1抑制剂+200μmol/L麦芽酚铝),染毒时间为24h.采用实时荧光定量PCR法测定各组PC12细胞中PKC及NMDAR亚基的mRNA表达水平;采用Western blot法测定各组PC12细胞中PKC及NMDAR亚基的蛋白表达水平;采用ELISA法测定各组PC12细胞的PKC酶活性.[结果]与空白对照组相比,麦芽酚铝染毒组的PKC、NMDAR1、NMDAR2A和NMDAR2B mRNA表达水平分别下降39％、21％、38％和26％,差异有统计学意义(P＜0.05),其蛋白表达水平分别下降39％、31％、41％和46％,差异有统计学意义(P＜0.05).染铝+抑制剂组的NMDAR1 mRNA和蛋白表达与麦芽酚铝染毒组相比分别上调32％和36％(P＜0.05);与麦芽酚铝染毒组相比,染铝+抑制剂组NMDAR2B mRNA表达下调46％,染铝+激动剂组NMDAR2B蛋白表达上调95％,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,麦芽酚铝染毒组PKC酶活性下降56％,而染铝+激动剂组PKC酶活性相对于麦芽酚铝染毒组上调116％(P＜0.05).[结论]麦芽酚铝可以抑制PC12细胞的PKC和NMDAR各亚基的mRNA和蛋白表达;麦芽酚铝可通过mGluR1调节NMDAR表达和PKC酶活性;mGluR1对NMDAR的调节主要作用于NMDAR1和NMDAR2B.
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神经元膜NMDA受体蛋白免疫复合物单分子纳米结构及定位AFM比较研究
目的探讨NMDAr(N-甲基-D-天冬氨酸受体)在神经细胞膜表面定位,对比不同成像方法的特点,建立纳米尺度神经细胞膜表面蛋白单分子三维标记的免疫细胞化学新方法.方法应用原子力显微镜,对分布在云母表面的抗NMDAR1亚单位IgG-葡萄球菌蛋白A-胶体金颗粒免疫标记复合物分子进行扫描,明确其特定的三维结构作为对照标准,然后扫描结合了免疫标记复合物分子的神经细胞膜表面,对表面形貌作出对比后确定目的抗原的定位和复合物三维结构.并与光镜、激光共聚焦、扫描电镜等方法进行对比.结果在空白云母表面,免疫复合物分子在原子力显微镜下呈现出均匀分散粒径为49 nm的特征性球形结构.在神经元表面结合免疫标记物后可以发现有大量的粒径为53 nm的球形或双球形(短棒状)结构,颗粒均匀,截面为双峰或单峰.光镜下染色成片状结果,在共聚焦显微镜下荧光呈颗粒点状分布,扫描电镜结果为单个或结合颗粒,缺乏三维成像能力.结论原子力显微镜下免疫胶体金标记技术可以在纳米尺度对目的膜受体蛋白进行定位和表面三维结构测定.NM-DA受体蛋白可以结合一个或两个胶体金复合物,与传统成像手段相比,原子力显微镜下胶体金标记方法可以对单个膜NMDA受体蛋白抗原进行定位、定性、定量标记测定.
