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血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体在特发性血小板减少性紫癜的表达
本研究旨在探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)中血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体的表达.选择45例ITP患者,运用ELISA方法检测患者的血浆和血小板洗脱物血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体.使用HPA分型试剂盒检测7个抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、15.结果表明,有45例患者检测到血清或者血小板洗脱物中存在血小板特异性糖蛋白抗体,其中以抗GPⅡ b/Ⅲa/HIa和抗Gp Ⅰ b/Ⅸ为常见;有11例患者同时表达HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体.对病例37和40进行家系调查,发现这些病例所产生的血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体与父母血小板抗原及HLA抗原不相合密切相关.结论:应用ELISA检测ITP病例的血浆和血小板洗脱物,并与病人的临床表现相结合,对提高ITP的诊断具有重要价值.
关键词： 特发性血小板减少性紫癜 血小板特异性糖蛋白抗体 HLA抗体 -
体外诱导和检测人类B细胞产生抗HLA抗体的研究
目的 体外诱导和采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测人类B细胞产生的抗HLA抗体.方法 对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC)并体外培养5 d,以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原(PWM)、葡萄球菌A蛋白菌体(SAC)体外刺激PBMC,采用EHSA和ELISPOT方法分别测定培养上清中Ig浓度和抗体分泌B细胞数,探索体外诱导PBMC产生Ig的适宜方法.采用该刺激方法和HLA特异的ELISPOT法,诱导和检测9例拟行肾移植预致敏对象PBMC产生的抗HLA抗体.结果 与PWM单刺激相比,PBMC在PWM和SAC联合刺激后,有更多细胞存活的趋势(P=0.052),且培养上清中IgM的水平明显增加(P=0.03),而IgG的水平无明显变化(P>0.05).6例预致敏对象诱导和检测到抗HLA抗体.其特异性与各自培养上清中检测到的抗HLA抗体一致.结论 PWM和SAC体外刺激PBMC,结合HLA特异的ELISPOT方法,能诱导和榆测到人类B细胞产生的HLA抗体.
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肝移植后胆道铸型综合征病人中HLA抗体检测的临床意义
目的 研究肝移植受者体内的HLA致敏状态与胆道铸型综合征的关系以及HLA抗体在预测免疫因素引起胆道铸型综合征中的作用.方法 收集52例肝移植病人术前术后8个时间点系列血清共416份,用ELISA法检测受者血清中HLA抗体,将52例病人分为两组,20例无胆道铸型综合征者为对照组,32例发生胆道铸型综合征者设为实验组,分析两组间HLA抗体水平有无显著性差异,及与主要生化指标变化的关系.结果 胆道铸型综合征组术后HLA抗体阳性率显著高于对照组(P<0.05),胆道铸型综合征临床症状恢复时间与HLA-Ⅱ类抗体的出现时间呈负相关性.结论 HLA-Ⅱ类抗体的动态监测可作为胆道铸型综合征发生的预警信号.
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主要组织相容性一类相关链A基因抗体与慢性移植肾功能减退的相关性研究
目的 探讨肾移植术后主要组织相容性一类相关链A基因(MICA)抗体对稳定期移植肾功能的影响.方法 采用免疫荧光液相芯片技术检测57例肾移植术后超过半年患者的MICA抗体水平及特异性.并同时检测SCr水平,分析MICA抗体对移植肾功能的影响. 结果 57例患者中HLA抗体和MICA抗体均为阴性者38例,HLA抗体阳性、MICA抗体阴性者11例,HLA抗体阴性、MICA抗体阳性者5例,HLA抗体和MICA抗体均阳性者3例.在MICA特异性抗体不同类型中,MICA019抗体5例、MICA027抗体3例、MICA018抗体2例、MICA004和017抗体各1例,MICA抗体阳性值≥6分者9例,占75%(9/12).MICA抗体阳性组8例与MICA抗体阴性组49例在术前输血史、淋巴毒试验、冷缺血时间、术后时间方面差异均无统计学意义(P＞0.05);而在术时年龄方面差异有统计学意义[(32.5±7.9)岁与(43.0±10.4)岁(P=0.008)3.MICA抗体阳性HLA抗体阴性组SCr水平[(117.20±12.30)μmol/L]及SCr异常比例(5/5)均高于HLA抗体和MICA抗体均阴性组[(89.40±28.95)μmol/L及23.7%(9/38),P＜0.05].结论 肾移植术后监测MICA抗体可作为肾移植HLA阴性患者预后重要的标志物,并且MICA抗体与慢性移植肾功能减退存在明显的相关性.
关键词： 肾移植 主要组织相容性一类相关链A基因抗体 HLA抗体 移植肾功能 -
补体依赖-流式细胞术-淋巴细胞毒交叉配型实验方法的研究
目的提高识别介导肾移植术后严重排斥反应的抗供者HLA抗原IgG类抗体的准确性,建立补体依赖-流式细胞术-淋巴细胞毒交叉配型(Flow-CDC)实验方法.方法62例等待肾移植受者的血清,分别与33份供者淋巴细胞进行100次经典补体依赖微量淋巴细胞毒交叉配型(NIH-CDC)及Flow-CDC实验,依照受者移植前PRA分为PRA阴性组(25例)和PRA阳性组(75例),比较方法学差异;并观察5例PRA阳性受者的NIH-CDC、Flow-CDC及临床肾移植效果.结果PRA阴性组NIH-CDC与Flow-CDC均为阴性;PRA阳性组中,NIH-CDC阳性24例(32.0%),Flow-CDC阳性31例(41.3%),2种CDC方法阳性率比较差异有统计学意义(χ2=5.14,P=0.016).100例CDC中,NIH-CDC与Flow-CDC结果吻合率93%,相关系数0.80.4例接受NIH-CDC和Flow-CDC均阴性的供肾PRA阳性患者,术后未发生排斥,近期效果良好;另1例PRA阳性患者接受了NIH-CDC阴性Flow-CDC阳性肾移植,术后发生加速排斥反应而丧失移植肾.结论Flow-CDC能特异性识别针对供者HLA基因的可活化补体经典途径的IgG类抗体,与经典NIH-CDC阴性率具有可比性,具有电子化、程序化、标准化、可对原始结果进行全程质控等优点,可能对高敏受者选择相合供肾有重要价值.
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肾移植受者接种流感疫苗后的免疫应答
一般认为肾移植受者接种流感疫苗可能会导致其产生抗HLA抗体或提高抗HLA抗体的效价.为了评估肾移植受者接种流感疫苗的安全性,法国研究者在2005～2006年流感季节选择了66例稳定的肾移植受者和19位健康自愿者接种流感疫苗,分别测定接种疫苗当天和30 d以后受试者体内抗HLA抗体的水平,同时测定流感特异性抗体水平和评估T细胞免疫反应情况.
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肾移植后血循环中新出现的抗内皮细胞抗体提示移植后近期排斥反应发生风险增加
抗内皮细胞抗体(anti-endothelial cell antibody, AECA)与器官移植后排斥反应的发生有关,而且是除抗HLA抗体外引起排斥反应的主要原因之一,但是检测其移植前后血清水平能否预测排斥反应尚无定论.因此,南京大学医学院金陵医院肾脏病研究所试图通过分析肾移植前后受者血清标本中AECA抗体的变化,来观察其与移植后排斥反应和患者长期预后的关系.
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通过检测包被HLA抗体Luminex微球上补体C4d沉积预测心脏移植后移植物失功
器官移植时受体中存在供体(donor specific antibody,DSA)特异性抗体会导致快速的体液排斥反应.至今为止,检测受体中供体特异性抗体存在的经典方法是供体白细胞补体依赖性的细胞毒性试验(CDC).近几年来,采用包覆人类白细胞抗原(HLA)的多孔塑料板或微球等固相检测法可以更加敏感地检测到移植受体HLA抗体的存在.但这种检测法无法分辨这些抗体是否为补体依赖性的,因此其在临床中的实际应用价值仍不确定.英国皇家医学院移植免疫的相关研究人员采用了一种新的方法来检测Luminex微球上补体C4d结合的HLA抗体从而发现特异性抗体的存在.
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肾移植受者抗体介导排斥反应的治疗
随着抗体检测技术的发展和C4d等抗体介导免疫损伤的标志物被发现,人类白细胞抗原(Human leucocyte antigen,HLA)抗体和非HLA抗体在急性免疫排斥反应中的作用越来越受到人们的重视.
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待肾移植患者白细胞滤过输血的临床应用
目的探讨白细胞滤过输血对待肾移植患者产生HLA抗体的影响及巨细胞病毒(CMV)感染率的降低程度.方法选择166例待肾移植患者进行临床输血观察,其中92例进行白细胞滤过输血,74例进行浓缩红细胞输注.结果白细胞滤过组,HLA抗体阳性率1.1%,巨细胞病毒感染率3.2%;未滤过组HLA抗体阳性率9.5%,巨细胞病毒感染率13.5%;两者差别有高度显著性(P＜0.01).结论白细胞滤除输血,能够有效预防HLA抗体产生,减少肾移植术后CMV感染,对确实需输血的待肾移植患者提供了一条安全有效的输血途径和措施.
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输血不良反应的抗体分析
目的 通过对发生输血不良反应的样本进行分析,探讨有效降低发生输血不良反应的手段和措施.方法 对71例输血反应样本进行血清学分析,即进行红细胞抗体、HLA抗体、血小板抗体筛查,分析产生输血反应的原因.结果 输血不良反应以发热多见,多次输血的患者易产生红细胞抗体(20例,占28%)、HLA抗体(30例,占42%,10例同时有细胞抗体),产生血小板抗体的比率小(1例,占4.1%).结论 建立规范化的制度并严格执行,应用输血新方法和新技术能够有效降低输血不良反应率.
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实验室检测HLA抗体
目的：探究Hla抗体及抗体的检测方式。方法采集血液样本，在实验室条件下进行分析检验，对其结果进行解读分析，总结其临床应用意义。结论 Hla抗体引起的非溶血性输血反应严重者可并发肺部综合症，呼吸困难。但临床输血中发热反应多数是由受血者体内的Hla抗体破坏献血者的白细胞所致。避免Hla抗体引起非溶血性输血反应应在输血前作交叉淋巴细胞毒试验，输注相合的血液，也可输少白细胞的血液。采用白细胞滤器过滤后的血液输注，非溶血性输血反应明显减少。受者与供者混合淋巴细胞反应试验，用于检查受者与供者Hla-d区是否相合，常用于骨髓移植配型。
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无偿献血者中与免疫性TRALI相关HLA抗体及水平分析
目的 探讨无偿献血者其机体内与免疫性TRALI相关的HLA抗体以及其相应水平的概况.方法以2015年8月～2017年5月期间自愿参与本研究的296例合格无偿献血作为主要研究对象.利用HLA抗体筛选试剂盒以及LSA1和LSA2试剂盒对其HLA抗体进行筛查以及特异性的鉴定,并结合检测结果对不同人群HLA抗体的发生率进行初步比较.结果本研究中HLA抗体检测结果呈阳性的患者共计36例,其中男10例,女26例,其中已婚已育者23例.已婚已育女性患者整体情况与未婚未育女性和男性比较,差异有统计学意义(P<0.05).在HLA类型方面,已婚已育女性患者中其不同类型的发生率均较男性以及未婚未育女性患者高,差异有统计学意义(P<0.05).对女性生育次数进行进一步的调查发现,生育次数超过1次的患者其HLA抗体发生率为38.1％,而一次者为22.7％,差异有统计学意义(P<0.05).结论在无偿献血者中,女性的HLA抗体发生率相对较高,且以已婚已育者为甚,因此其血液样本导致免疫性TRALI发生的概率相对较高.因而在临床实践中,需重视对女性献血者尤其是已婚已育者血液样本的HLA抗体的筛查工作,从而保障用血安全.
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慢性移植肾功能衰竭危险因素的临床分析
目的：观察导致肾移植受者慢性移植肾功能衰竭的潜在危险因素。方法采用前瞻性临床观察研究，对规律随访的235例肾移植受者临床资料进行分析，随访时间均在1年以上（长随访时间为22年）且加入本研究时移植肾功能正常。利用多因素Logistic回归分析鉴别可能导致移植肾功能衰竭的危险因素。结果共有47例受者在本研究随访期内被确诊发生了慢性移植肾功能衰竭（CAF）。多因素分析发现，早期和（或）晚期急性排斥反应、人类白细胞抗原（HLA）错配、HLA抗体、病毒感染、蛋白尿、高甘油三酯血症、受者的年龄以及男性是具有统计学意义的危险因素。在各种导致慢性移植肾功能衰竭的危险因素中，晚期急性排斥反应（肾移植术后3个月后发生的急性排斥反应）比早期急性排斥反应更易导致CAF的发生；移植肾功能延迟恢复（ DGF ）和环孢霉素浓度与CAF无关。结论免疫性和非免疫性危险因素均与CAF的发生有关。早期及时发现并诊治可能导致CAF的各种危险因素，对于提高移植肾的存活率至关重要，同时也对移植肾功能不全患者进行个体化治疗具有指导意义。
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HLA抗体与血小板输注效果的关系
目的探讨HLA抗体与血小板输注效果的关系.方法采用标准微量淋巴细胞毒(LCT)技术检测HLA抗体;计数血小板,计算血小板增值(CCI),判断血小板输注效果;对5例HLA抗体阳性无效输注者采用LCT技术进行交叉配型输注.结果50例长期反复输血患者HLA抗体阳性率66.00%(33/50),33例阳性者中输注无效者28例占82.35%,17例阴性者中无效输注者4例占23.53%,两者比较X2=31.46,P＜0.001,差异显著,HLA抗体与输注无效关系密切;血小板配型输注效果良好.结论反复输血易发生同种免疫反应,产生HLA抗体,导致血小板输注无效;采用LCT技术交叉配型选择HLA相合或相容单一供者输注血小板,能显著提高血小板输注疗效.
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血小板HLA配合性输注的临床观察
目的 探讨解决血小板输注无效的有效途径,改善血小板输注的临床效果.方法 对42例各类血小板输注无效患者进行HLA抗体特异性分析.采用FCXM技术对20例各类血小板输注无效患者进行配合试验,选择HLA-I类位点3个以上抗原相合,输注适合的血小板并与22例各类血小板输注无效患者随机血小板输注进行临床观察.结果 42例各类血小板输注无效患者中34例HLA-I抗体阳性,阳性率为80.9%.配合性血小板输注患者的24小时血小板上升均值高于随机血小板输注患者(P＜0.05).结论 反复随机输注血小板易发生同种免疫反应,产生HLA抗体,导致血小板输注无效,建立者血小板供者资料库,采用FCXM技术交叉配型选择HLA相合或相容单一供体进行血小板输注,实现提高血小板输注治疗效果,是解决PTR的有效途径.
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液态芯片技术检测抗人类白细胞抗原抗体抗主要组织相容性Ⅰ类相关链A位点抗体在移植肾围手术期急性抗体介导性排斥反应中的应用
目的：探讨液态芯片技术（Luminex）检测移植肾受者围手术期发生急性抗体介导性排斥反应者抗人类白细胞抗原（HLA）抗体、抗主要组织相容性Ⅰ类相关链A位点（MICA）抗体水平与影响。方法选取我院器官移植研究所2008年1月至2013年6月肾移植术后围手术期患者106例为研究对象，采用Luminex技术检测接受同种异体肾移植手术并明确病理诊断肾围手术期急性抗体介导性排斥反应患者血清中抗HLA抗体、抗MICA抗体，并同步检测血肌酐、尿量及移植肾超声等临床指标。结果参照Banff2007标准组织病理学诊断移植肾超急性排斥反应2例，急性抗体介导性排斥反应15例，同时应用Luminex方法检测抗HLA抗体、抗MI-CA抗体水平，HLA抗体检测结果15例阳性，阳性率为88％（15/17），检出PRAⅠ类和Ⅱ类阳性率分别为47％（7/15）和53％（8/15）；MICA抗体2例阳性，阳性率为12％（2/17），其余89例其他病理类型检测未见抗HLA抗体、MICA抗体阳性，移植肾穿刺病理结果显示HLA抗体、抗MICA抗体阳性患者C4d沉积均为阳性。结论抗HLA抗体、抗MICA抗体可预测围手术期急性抗体介导性排斥反应发生及治疗效果，对于及时诊断及治疗排斥反应提供了一个重要指标，可影响移植肾的长期存活。
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ELISpot:一种新的检测人类HLA-Ⅰ抗体的方法
目的:建立一种新的检测人类HLA-Ⅰ类抗体方法--酶联免疫斑点法(ELISpot).方法:以鼠B细胞系HB95为模型,建立一系列特异性ELISpot检测HLA-Ⅰ类抗体的参数,包括HLA抗原的来源、包被抗体适宜浓度的选择、B细胞适宜孵化时间,同时以经EBV转化的敏感NTP患者B细胞系为干扰因素,检验该方法的敏感性和特异性.结果:以B细胞溶胞体作为HLA抗原来源,当抗原浓度为0.25mg/ml时,相同细胞密度下所获得的斑点频数均高于其它三种抗原浓度(0.125、0.5和1.0 mg/ml,P＜0.05);当包被抗体浓度为1.8 mg/ml、稀释度为1:125时,相同孵育时间下所获得的斑点频数高于其它稀释浓度(1:250、1:500和1:1 000,P＜0.05);且在抗体稀释度相同情况下,B细胞孵育时间为24小时所获得的斑点清晰、背景着色浅、容易被分析仪器识别.此外,当同时加入经EBV转化的人B细胞时,所获得的斑点频数与单纯加鼠B细胞相似,无明显差异(P＞0.05).结论:当B细胞溶胞体作为HLA抗原且浓度为0.25 mg/ml、包被抗体浓度为1.8 mg/ml且稀释度为1:125、B细胞孵育时间为24小时时,该ELISpot方法能特异地、敏感地、可信地检测人HLA-Ⅰ类抗体.
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106例反复输血患者血清中抗HLA抗体检测的结果分析
通过对部分临床反复输血和未输血患者血清中HLA抗体检测,以了解该抗体产生情况.为临床医生正确合理输血提供实验室依据.
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1例新生儿血小板减少性紫癜的免疫抗体分析
目的 分析1例新生儿血小板减少性紫癜(NAIT)血清中免疫抗体的特异性.方法 采用同相凝集法检测患儿及其母亲血清中是否存在抗父亲/抗丈夫血小板抗体,用PAK12试剂盒鉴定血清中的抗体是抗-HLA还是抗-HPA,用ELISA法(PRA)鉴定HLA抗体的特异性,用SSOP法进行父亲、母亲和患儿HLA-I类基因分型.用PCR-SSP法进行父亲、母亲和患儿HPA抗原1-5系统基因分型.结果 该例NAIT患儿血清中存在来自母体的HLA-I类抗体和HPA抗体;HLA-I类抗体为抗-Bw6;父亲和患儿的HLA-B位点的宽特异性均为Bw4,Bw6,母亲为Bw4;患儿HPA抗原1-5系统基因型与父亲相同,有3a,母亲没有3a.结论 在对 NAIT患儿进行实验室诊断时,除注意HPA抗体的作用外,也应重视HLA-I类抗体的作用.
