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叶酸对DNMT1和MeCP2在宫颈癌细胞中表达调节的实验研究
目的 探讨宫颈癌细胞中叶酸对DNA甲基转移酶1(DNMTl)和甲基化CpG岛结合蛋白2(MeCP2)表达的调节作用.方法 采用体外实验研究方法,对宫颈癌细胞Caski(HPV16阳性)和C33A(HPV阴性)进行不同浓度(10、50、100、500、750、1000 μg/ml)叶酸干预,分别采用Western blot和real-time PCR方法检测两种细胞中DNMT1和MeCP2蛋白的表达量和mRNA水平.结果 随着叶酸水平的升高,两种细胞的生长抑制率(C33A:r=0.984,P＜0.001；Caski:r=0.978,P=0.002)和凋亡率(C33A:r=0.989,P＜0.001；Caski:r=0.994,P＜0.001)均逐渐上升,DNMTl蛋白表达(C33A:r=-0.914,P＜0.001；Caski:r=-0.859,P=0.003)及MeCP2蛋白表达(C33A:r=-0.830,P=0.005；Caski:r=-0.981,P＜0.001)均呈逐渐降低趋势,而DNMT1和MeCP2 mRNA的Ct比值在两种细胞中的变化均无统计学意义(P＞0.05).相同叶酸浓度下,DNMT1蛋白和mRNA表达水平在Caski细胞均较C33A细胞为高,而MeCP2蛋白和mRNA表达水平则在C33A细胞较Caski细胞普遍为高.结论 补充叶酸可有效抑制宫颈癌细胞的增殖,促进凋亡,逆转DNMT1和MeCP2蛋白的异常表达；HPV16感染与DNMT1功能异常对宫颈癌的发生可能有协同效应.
关键词： 叶酸 宫颈癌细胞 DNA甲基转移酶1 甲基化CpG岛结合蛋白2 -
DNA甲基转移酶1与甲基-CpG-结合蛋白2异常表达在宫颈病变中的作用及相互关系
目的 探讨DNA甲基转移酶l(DNMT)和甲基-CpG-结合蛋白2(MeCP2)与宫颈癌发生发展的关系及其在宫颈癌变中的相互作用.方法 选择经病理学确诊的宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者74例、低度宫颈上皮内瘤样变(CINⅠ)患者52例、高度宫颈上皮内瘤样变(CINⅡ-Ⅲ)患者60例和宫颈炎(CI)患者58例为研究对象.在收集全部对象人口学特征、人乳头瘤病毒感染、生殖因素等相关资料同时,检测DNMT1和MeCP2蛋白(Western blot法)和mRNA (real-time PCR法)的相对表达量.采用SPSS 17.0分析软件,计算相关资料的t检验、x2检验、因素与疾病之间关联强度指标(OR值及其95％CI)及其交互作用.结果 随着宫颈病变的加重,DNMT1和MeCP2蛋白表达水平逐渐增高(H=94.33,P＜0.001;F=21.580,P＜0.001),DNMTl和MeCP2 mRNA的表达水平亦逐渐增高(F=4.758,P=0.003; F=7.804,P＜0.001).相关分析表明,DNMT1与MeCP2(r=0.287,P＜0.001)和rnRNA(r=0.179,P=0.005)表达均存在正相关关系.交互作用分析显示,DNMT1与MeCP2蛋白和mRNA高表达在SCC组和CINⅡ-Ⅲ组存在正相加交互作用.结论 DNMT1及MeCP2高表达可增加宫颈癌和癌前病变发生的风险,两者在CIN Ⅱ-Ⅲ组和SCC组存在正相加交互作用.
关键词： 宫颈肿瘤 宫颈癌前病变 DNA甲基转移酶1 甲基-CpG-结合蛋白2 -
叶酸缺乏与DNA甲基转移酶1表达异常在宫颈癌变中的相互作用
目的 探讨叶酸缺乏和DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达异常在宫颈癌发生发展中的相互作用.方法 选择2009年9月至2010年5月,在山西某医院确诊的宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者80例、宫颈上皮内瘤样变(CIN)患者105例(其中CIN Ⅰ组52例,CIN Ⅱ/Ⅲ组53例)和宫颈炎(CI)患者53例为研究对象,采用放射免疫法(RIA)检测其血清叶酸水平.同时,采用体外实验研究方法,对宫颈癌细胞Caski[人乳头瘤病毒(HPV)16阳性]和C33A(HPV阴性)进行不同浓度叶酸干预.检测宫颈组织和细胞中DNMT1蛋白的表达量和mRNA水平.利用SPSS 16.0软件进行相关资料的t检验、方差分析、x2检验、Spearman相关分析,应用相加效应模型进行交互作用评价.结果 CI组、CIN Ⅰ组、CINⅡ/Ⅲ组和SCC组血清叶酸含量(中位数±四分位数间距)分别为(3.21±1.74)、(3.17±1.91)、(2.83±2.23)、(2.66±1.82) ng/ml(P＜0.05),DNMT1蛋白表达水平((x)±s)分别为0.92±0.29、1.33±0.38、1.84±0.37、2.28±0.55,DNMT1 mRNA表达水平((x)±s)分别为1.33±0.11、1.27±0.12、1.27±0.12、1.26±0.13；随着宫颈病变的加重,叶酸含量逐渐降低,DNMT1蛋白和mRNA表达水平逐渐增高(P值均＜0.05)；低叶酸水平和DNMT1蛋白高表达在宫颈癌及癌前病变组均存在正相加交互作用,交互作用相对超额危险度(RERI)、交互作用归因危险比(API)和交互作用指数(S)均显示正相加效应(CIN Ⅰ组:0.27、0.14、1.40；CIN Ⅱ/Ⅲ组:0.47、0.19、1.46；SCC组:1.60、0.31、1.61).体外研究显示,Caski和C33A细胞的生长抑制率从叶酸干预水平为10 μg/ml时的11.4％和13.6％分别上升至1000 μg/ml时的64.8％和49.4％,随着叶酸水平的升高呈上升趋势(r值分别为0.954、0.969,P值均＜0.05)；DNMT1蛋白的表达量随着叶酸水平的升高而降低(r值分别为-0.859、-0.914,P值均＜0.05),分别从叶酸干预水平10 μg/ml时的1.96和1.92降低至1000 μg/ml时的1.60和1.38;叶酸浓度为1000 μg/ml时,Caski细胞DNMT1蛋白和mRNA的表达水平均较C33A细胞高(t值分别为-4.22、3 50,P值均＜0.05).结论 血清叶酸水平低及DNMT1蛋白和mRNA高表达均可增加宫颈癌和癌前病变的发病风险,叶酸缺乏与DNMT1蛋白高表达有正交互作用；补充叶酸可有效抑制宫颈癌细胞的增殖,逆转DNMT1的异常转录和转录后表达异常.
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当归芍药散对动脉粥样硬化小鼠的干预作用及DNA甲基转移酶1和PPAR-γ表达的影响
目的 研究当归芍药散对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)斑块的干预作用及DNA甲基转移酶1(DNMT1)和PPAR-γ表达的影响.方法 将30只8周龄雄性ApoE-/-小鼠西方类型膳食喂养9周,随机分为模型组、立普妥组(阳性对照组)和当归芍药散组(n=10),药物干预9周后,检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、血清DNA甲基化水平及DNMTs水平.行苏木素-伊红染色(hematoxylin and eosin staining,HE),采用IPP图像分析软件测量小鼠主动脉As斑块面积.免疫组化法检测各组小鼠主动脉As斑块内DNA甲基化转移酶1(DNMTl)和过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPAR γ)的表达.结果 与模型组相比,当归芍药散组和立普妥组小鼠血清TC、TG水平明显降低(P＜0.05),当归芍药散组小鼠血清HDL-C水平明显升高(P＜0.05).与模型组相比,当归芍药散组小鼠主动脉As斑块面积显著降低(P＜0.01),当归芍药散组小鼠主动脉斑块内DNMT1表达显著降低(P＜0.05),PPAR γ表达显著升高(P＜0.05).结论 当归芍药散可改善As小鼠的血脂水平,减少As斑块面积,具有明确的抗As作用,其机制可能与抑制As小鼠血清甲基化水平和DNMTs水平,促进As小鼠主动脉斑块内PPARγ表达和抑制斑块内DNMT1表达有关.
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平肝潜阳方含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移及DNA甲基化水平的影响
目的 观察平肝潜阳方对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移的抑制作用及DNA甲基化水平的影响.方法 采用组织贴块法培养VSMCs,制备平肝潜阳方含药血清.将培养细胞分为正常组(原代培育的VSMCs)、模型组、叶酸组及平肝潜阳方组(下称中药组).以AngⅡ作为诱导复制VSMCs增殖及迁移模型,在AngⅡ诱导VSMCs培育24 h后,叶酸组加入40μg/m L叶酸干预48 h,中药组加入5％中药血清干预48 h.采用CCK-8(Cell Counting Kit)试剂盒绘制VSMCs生长曲线,MTT法测定VSMCs增殖活性,体外细胞划痕实验检测细胞迁移情况,以抗5-甲基胞嘧啶(5-mC)抗体进行免疫荧光检测细胞核中胞嘧啶甲基化水平;Real-time q-PCR方法检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)mRNA表达水平.结果 AngⅡ在10-6 mol/L浓度下诱导24 h后可促进VSMCs生长.与正常组比较,模型组细胞增殖活性及迁移数量明显增加,DNA甲基化水平明显降低(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,叶酸组及中药组VSMCs生长、细胞增殖活性及迁移数量均明显降低,DNA甲基化水平升高(P＜ 0.05,P＜0.01);与正常组比较,模型组VSMCs DNMT1 mRNA表达水平降低(P＜0.01);与模型组比较,叶酸组及中药组VSMCs DNMT1 mRNA表达明显增强(P＜0.01).结论 平肝潜阳方可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖和迁移,可导致基因组DNA高甲基化,其DNA甲基化水平改变可能与DNMT1表达有关.
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RNA干扰DNMT1基因对胰腺癌细胞BxPC-3增殖的影响及相关机制
目的:探讨RNA干扰DNMT1 基因对胰腺癌细胞BxPC-3增殖的影响及相关机制.方法:利用LipofectamineTM2000转染DNMT1 -siRNA至胰腺癌细胞BxPC-3.实验共分为3组:实验组(转染DNMT1 -siRNA)、阴性对照组(转染negative-sRNA)和空白对照组(转染脂质体).转染48 h后,应用荧光定量PCR法和Westernblot法分别检测细胞中DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平; MTT法检测细胞体外增殖活力; FCM法检测细胞凋亡; 甲基化特异性PCR法(MSP)检测抑癌基因p16 、RASSF1A 和ppENK 的启动子甲基化状态.结果:与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的DNMT1 mRNA及蛋白表达量均显著降低(P <0.01); 实验组细胞增殖明显受到抑制(P <0.05),细胞凋亡率明显增加(44.46%±5.98% vs 3.74%±1.02% vs 5.07%±1.16%,P <0.01).空白对照组与阴性对照组的p16 、RASSF1A 和ppENK 基因甲基化阳性,而实验组的p16 和p pENK基因甲基化阴性,RASSF1A 基因部分甲基化.结论:DNMT1 基因表达下调后,能抑制胰腺癌细胞BxPC-3细胞增殖,并能诱导其发生细胞凋亡; 其作用机制与抑癌基因p16 、RASSF1A 和ppENK 去甲基化有关.
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反义调控DNA甲基转移酶1基因对人胆管癌细胞生长的抑制效应
目的 观察转染反义DNMT1基因真核表达载体对人胆管癌细胞QBC-939生长的影响,初步探讨DNMT1基因在胆管癌发生中的表遗传学机制.方法 将构建好的反义DNMT1基因真核表达载体用脂质体介导法转入人胆管癌细胞QBC-939,Western blot检测转染前后DNMT1蛋白的表达变化,MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的生长增殖能力,流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化.结果 (1)Western blot检测证实转染反义基因能使DNMT1蛋白表达水平降低;(2)转染反义DNMT1基因能抑制QBC-939的生长曲线,并使其软琼脂克隆形成率从(38.020±4.120)%减少至(14.860±2.129)%,差异有显著性意义(P=0.000);(3)转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%增加到(6.19±0.78)%,差异亦有显著性意义(P=0.000).结论 通过转染反义DNMT1基因真核表达载体,可下调DNMT1在QBC-939细胞中的表达水平,并能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,促进凋亡的发生,提示DNMT1可能通过甲基化途径与胆管癌的发生有关.
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膀胱癌中DNA甲基转移酶1表达的实时定量检测
目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMTl)mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达水平及其临床意义.方法 膀胱癌手术标本35例.男29例,女6例.年龄24～88岁,平均68岁.初发28例,复发7例.病理分级:G1 12例,G2 14例,G3 9例.临床分期非浸润性膀胱癌(Tis～T1)11例,浸润性膀胱癌(T2～T4)24例.以SYBR green为信号标记,应用实时荧光定量PCR法检测35例膀胱癌组织及10例正常膀胱黏膜中DNMT1 mRNA的表达.结果膀胱癌中DNMT1 mRNA的表达(3.25±0.74)明显高于正常膀胱黏膜(1.53±0.44,P＜0.001).非浸润性膀胱癌标本DNMT1 mRNA表达值为3.14±0.67、浸润性膀胱癌为3.31±0.84(P＞0.05).G1～G3膀胱癌组织DNMT1 mRNA表达值分别为3.13±0.59、3.25±0.64、3.43±0.55,各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).＞40岁患者表达值(3.34±0.50)高于≤40岁者(3.01±0.27),差异有统计学意义(P＜0.05).男性患者表达值(3.31±0.42)高于女性患者(3.01±0.20),差异有统计学意义(P＜0.05).复发者表达值(3.45±0.33)高于初发者(3.21±0.63),但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DNMT1过表达与膀胱癌关系密切,可能足抑癌基因启动子区CpG岛DNA甲基化修饰频率大大提高的原因,导致基因失活,从而参与膀胱癌的发生发展.
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DNA甲基转移酶1在人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及意义
目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)在瘢痕疙瘩的不同生长期和不同部位的成纤维细胞表达及其意义.方法 收集53例瘢痕疙瘩患者手术切除的瘢痕疙瘩标本,并按生长期分为A(＜6个月)、B(6 ～12个月)、C(1～2年)、D(＞2年)4组；免疫组织化学法检测各组标本正常皮肤、浸润部、增生部及老化部成纤维细胞DNMT1的表达并比较差异；RT-PCR法检测各组标本及不同部位成纤维细胞DNMT1mRNA的表达.结果 DNMT1在成纤维细胞中主要分布于细胞核内；瘢痕疙瘩成纤维细胞DNMT1蛋白阳性表达率(72％)及DNMT1mRNA表达均高于正常皮肤成纤维细胞(8％,P =0.001)；瘢痕疙瘩生长期较短组成纤维细胞DNMT1阳性表达率(100％,评分:10.47±1.85)及DNMT1mRNA表达均高于生长期较长组(45％,评分:7.71 +1.80,P =0.007)；瘢痕疙瘩浸润部(100％,评分:10.47±1.85)成纤维细胞DNMT1阳性表达率及DNMT1mRNA表达均高于增生部(78％,评分:6.63±1.75)与老化部(38％,评分:5.53 +1.55,P=0.001).结论 DNMTI在瘢痕疙瘩发病中具有重要作用；随着瘢痕疙瘩生长期的延长,DNMT1的表达有降低趋势；随着瘢痕疙瘩中央成纤维细胞老化,DNMT1表达降低.提示DNMT1在瘢痕疙瘩生长过程中起着重要的作用,并且与瘢痕疙瘩浸润生长密切相关.
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三氧化二砷诱导人乳腺癌MDA-MB-435s细胞雌激素受体α重新表达及联合内分泌治疗裸鼠移植瘤的效果
目的 研究三氧化二砷(As2 O3)对雌激素受体α(ERα)阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-435s的去甲基化作用及可能机制,观察As2 O3联合他莫昔芬(TAM)对MDA-MB-435s细胞裸鼠移植瘤的疗效.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,检测不同浓度As2 O3单用或与TAM联用对MDA-MB-435s细胞的增殖抑制作用.以不同浓度As2 O3处理MDA-MB-435s细胞,同时建立MDA-MB-435s细胞裸鼠移植瘤模型,以不同剂量的As2O3单用或与TAM联用治疗裸鼠移植瘤.采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),检测不同处理组MDA-MB-435s细胞和裸鼠移植瘤组织中ERα基因的甲基化状态.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)和ERαmRNA的表达变化.采用Western blot法,检测DNMT1和ERα蛋白的表达变化.治疗过程中,每周测量裸鼠移植瘤的大小,绘制肿瘤生长曲线.结果 不同浓度As2O3单用或与TAM联合处理组MDA-MB-435s细胞的增殖均受到明显抑制,其中4 μmol/LAs2O3+ TAM组处理72 h时的抑制率高,达62.6％.1、2和4 μmol/L As2O3对MDA-MB-435s细胞有去甲基化作用,并可使DNMT1 mRNA和蛋白的表达受到抑制,ERαmRNA和蛋白恢复表达.不同剂量的As2 O3单用或与TAM联合处理后,裸鼠移植瘤组织中ERα基因出现不同程度的去甲基化条带,DNMT1 mRNA和蛋白的表达受到抑制,而ERα mRNA和蛋白则逐渐恢复表达.不同剂量的As2O3单用或与TAM联用均能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,以4 mg/kg As2O3 +5 mg/kg TAM组的抑制作用强,肿瘤重量抑制率和肿瘤体积抑制率分别为79.5％和76.4％.结论 As2O3可以通过抑制DNMT1的活性使ERα阴性人乳腺癌MDA-MB-435s细胞的ERα基因去甲基化,并恢复其表达；恢复的ERα可以使MDA-MB-435s细胞对内分泌治疗敏感.As2O3与TAM联用可能成为治疗ERα阴性乳腺癌患者的新途径.
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DNA甲基转移酶1在子宫颈病变组织和子宫颈癌细胞中的异常表达及其意义
目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)在子宫颈病变组织和子宫颈癌细胞中的异常表达及其意义.方法 选择经病理学确诊的子宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者80例、子宫颈上皮内瘤样变(CIN)患者105例(CIN Ⅰ 52例,CINⅡ/Ⅲ53例)和子宫颈正常(NC)者53名,收集其手术或活组织检查子宫颈组织标本.选择子宫颈癌Caski细胞(HPV16阳性)和C33A细胞(HPV阴性)进行体外实验.分别采用Western blot和实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测子宫颈组织和细胞中DNMT1蛋白和mRNA的表达.结果 DNMT1蛋白和mRNA的表达水平在CIN及SCC组织中均较NC组织高,差异均有统计学意义(F=110.57,P＜0.001；F=2.68,P=0.048)；随着子宫颈病变程度的加重,DNMT1蛋白表达水平呈逐渐上升趋势(x2趋势=50.80,P＜ 0.001),但DNMT1 mRNA的表达在调整子宫颈癌相关因素后,未显示相同趋势(x2趋势=3.63,P＞0.05).Caski细胞DNMT1蛋白和mRNA的表达水平均较C33A细胞高,特别是mRNA的表达水平差异有统计学意义(t=7.134,P=0.002).结论 DNMT1蛋白和mRNA高表达均是导致子宫颈癌和癌前病变发生的危险因素,HPV16感染与DNMT1转录功能异常对子宫颈癌的发生可能有协同效应.
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DNA甲基转移酶1抑制对涎腺腺样囊性癌细胞生长、侵袭及转移的影响
目的 研究DNA甲基转移酶1(DNA methyltmnderases 1,DNMT-1)表达抑制对涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞体内、体外的生物学影响,探讨DNMT-1在SACC发生、侵袭及转移中的作用.方法 对前期实验建立的DNMT-1表达稳定抑制的ACC-M细胞(实验干扰组)、空载对照ACC-M细胞系(空载对照组)及ACC-M细胞系(空白对照组),在体外分别应用甲基噻唑基四唑(MTT)法生长曲线分析、流式细胞周期分析、平板克隆实验、体外侵袭能力分析等方法,体内对裸鼠皮下、尾静脉注射肿瘤细胞,综合分析评估DNMT-1表达抑制对ACC-M细胞体内增殖、侵袭及转移的影响.结果 实验干扰组细胞倍增时间延长[(34.7±2.1)h]、细胞周期S期比例[(17.4±117)%]、克隆形成率[(43.0±1.3)%]降低,与空白对照组[分别为(26.2±3.1)h、(31.5±2.0)%、(71.0±4.7)%]及空载对照组[分别为(28.4±3.9)h、(39.0±2.0)%、(66.0±5.2)%]差异有统计学意义(P＜0.05);各组体外侵袭能力的差异无统计学意义(P＞0.05);体内DNMT-1表达稳定抑制的ACC-M细胞,其皮下成瘤率(6/10)、瘤体体积[(2.18±0.83)mm~3]、重量[(0.0156±0.0046)g]均显著低于空白对照组[分别为10/10,(155.44±1.67)mm~3、(0.0724±0.0157)g]及空载对照组[分别为10/10、(147.46±1.73)mm~3、(0.0729±0.0177)g],差异均有统计学意义(P＜0.05);各组的肺转移率差异无统计学意义(P＞0.05);DNMT-1表达稳定抑制的ACC-M细胞,其肺转移瘤的个数[(2.0±0.5)个]、直径[(70.0±20.3)μm]均显著低于空白[(28.0±5.5)个、(195.0±25.4)μm]及空载(27.0±4.5)个、(190.0±19.9)μm]对照组,P＜0.05.结论 抑制DNMT-1的表达能有效降低ACC细胞的生长、增殖及转移能力.
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EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达及意义
目的 探讨EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达特点及与主要临床病理参数的关系.方法 采用免疫组化SP法,检测131例三阴性乳腺癌、78例非三阴性乳腺癌及65例癌旁组织中EZH2及DNMT1的表达情况.采用多因素logistic回归分析EZH2及DNMT1阳性表达有关的因素,Spearman等级相关分析三阴性乳腺癌中EZH2及DNMT1表达的相关关系.结果 EZH2蛋白在三阴性乳腺癌组织、非三阴性乳腺癌组织和癌旁组织的阳性表达率分别为86.3％、89.7％和40.0％; DNMT1蛋白在三种组织中的阳性表达率分别为63.4％、66.6％和44.6％;两种蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于癌旁组织(P＜0.05);两种蛋白在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织间表达差异无统计学意义.在三阴性乳腺癌中,EZH2阳性表达与肿瘤组织学分级、肿瘤直径、淋巴结是否转移有关(P＜0.05),DNMT1的表达与肿瘤组织学分级、淋巴结是否转移有关(P＜0.05).多因素logistic回归分析显示,肿瘤组织学分级为影响EZH2及DNMT1表达的主要因素;三阴性乳腺癌中DNMT1与EZH2的表达呈正相关(r=0.34,P＜0.01).结论 EZH2与DNMT1的高表达与三阴性乳腺癌的分化、生长、转移有关,且两者在三阴性乳腺癌中的表达呈正相关,其联合检测可能对三阴性乳腺癌的预后判断更有价值.
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膀胱尿路上皮癌组织中DNMT1、HMGA2的表达及临床意义
目的 检测膀胱尿路上皮癌(BUC)组织中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的表达情况,并探讨其临床意义.方法 2010年1月～2012年6月在西安医学院附属宝鸡医院泌尿外科收集BUC癌组织89例和正常膀胱组织45例,免疫组化SP法检测各组织中DNMT1、HMGA2蛋白的表达,分析DNMT1、HM-GA2蛋白表达与BUC患者临床病理参数及预后的关系.结果 DNMT1蛋白在BUC癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别为70.79％(63/89)和6.67％(3/45),差异有统计学意义(P＜0.05);HMGA2蛋白在BUC癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别为65.17％(58/89)和2.22％(1/45),差异有统计学意义(P＜0.05).BUC癌组织中,DNMT1蛋白异常表达与患者肿瘤直径、有无淋巴转移和肿瘤临床分期有关(P＜ 0.05);HMGA2蛋白异常表达与患者肿瘤直径、组织分化程度和肿瘤临床分期有关(P＜0.05).DNMT1阳性患者的生存时间明显短于DNMT1阴性患者(x2=9.634,P=0.002);HMGA2阳性患者的生存时间显著低短于HMGA2阴性患者(x2=4.911,P=0.027).结论 在BUC癌组织中,DNMT1、HMGA2蛋白呈高表达状态,且均在BUC的肿瘤发生和恶性进展中发挥重要作用,DNMT1、HMGA2可作为BUC预后预测和治疗的潜在靶点.
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重组体pshRNA-dnmt1对肝癌细胞dnmt1基因表达的抑制作用
目的 以DNA甲基转移酶1(dnmt1)为靶基因构建重组体pshRNA-dnmt1,研究其对肝癌SMMC-7721细胞株内dnmt1基因表达的抑制作用.方法 利用RNA干扰技术,构建靶向dnmt1的shRNA干扰重组体pshRNA-dnmt1,经测序鉴定后转染到肝癌SMMC-7721细胞株,用RT-PCR法检测dnmt1 mRNA水平,用Western-blot法检测dnmt1蛋白的表达.结果 转染后SMMC-7721细胞中dnmt1 PCR扩增带亮度及dnmt1蛋白杂交带亮度明显减弱,重组体pshRNA-dnmt1对肝癌细胞dnmt1基因的抑制率在转染后24 h、48 h、72 h分别为41.6％、63.0％、84.1％,对dnmt1蛋白的抑制率分别为48.2％、68.5％、81.5％.结论 重组体pshRNA-dnmt1能明显抑制肝癌SMMC-7721细胞株内dnmt1基因表达.
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非小细胞肺癌患者血清中HDAC1和DNMT1蛋白的表达及意义
目的 观察非小细胞肺癌患者血清中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)和DNA甲基转移酶1(DNMT1)蛋白的表达,探讨其临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对2012年9月至2013年6月郑州大学第一附属医院呼吸内科136例原发性肺癌患者(肺癌组)和同期郑州市第六人民医院进行健康体检的147名健康人群(对照组)血清中HDAC1和DNMT1蛋白浓度进行测定,分析其与临床病理特征的关系.结果 肺癌组血清中HDAC1和DNMT1蛋白浓度分别为(145±53)ng/L和(50±11)μg/L,显著高于对照组的(78±56)ng/L和(27±6)μg/L(t=596.16、152.64,均P=0.000);HDAC1和DNMT1蛋白浓度与性别、年龄、吸烟史均有显著相关性(均P＜0.05);HDAC1与DNMT1蛋白浓度呈正相关(r=0.525,P=0.000);不同组织学类型和不同临床分期肺癌患者血清HDAC1和DNMT1蛋白浓度差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 血清中HDAC1和DNMT1蛋白高表达可能增加患非小细胞肺癌的危险性,可能在肺癌发展早期过程中起重要作用.
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燃煤污染型砷中毒人群MGMT基因甲基化、转录及表达的研究
目的 了解O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT基因)启动子区甲基化、转录及表达以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的转录及表达与砷中毒的关系.方法 采集68例燃煤污染型砷中毒(以下简称砷中毒)患者(轻度24例、中度28例、重度16例)及23例非病区居民外周血.用甲基化特异性PCR法(MSP)检测MGMT基因启动子区甲基化,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测MGMT及DNMTI mRNA的水平.利用自愿手术治疗的砷中毒患者皮肤组织标本(61例,其中34例为一般病变,21例为癌前病变,6例为癌变)和对照皮肤组织标本(15例),以免疫组织化学(IHC)法检测砷中毒患者及对照皮肤组织中MGMT及DNMT1蛋白的表达.结果 MGMT基因启动子区甲基化阳性率与砷中毒程度有关(χ2=13.739,P<0.01).砷中毒组MGMT mRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);MGMT基因启动子区甲基化患者和非甲基化患者之间MGMT mRNA和DNMT1 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).但轻、中度患者DNMT1mRNA表达明显低于对照组(P<0.01);癌前病变组和癌变组皮肤组织中MGMT蛋白表达明显低于对照组(P<0.01),与皮肤损害程度有关(rs=-0.446,P<0.01);MGMT基因启动子区甲基化患者MGMT蛋白表达明显低于非甲基化组(P<0.05).砷中毒组皮肤组织中DNMT1蛋白表达强于对照组(P<0.01),并与皮肤损害程度有关(rs=-0.740,P<0.01);且MGMT基因启动子区甲基化患者组织中DNMT1蛋白表达明显高于非甲基化组(P<0.05).结论 MGMT基因启动子区高甲基化抑制了燃煤污染型砷中毒患者皮肤组织中MGMT蛋白的表达,且DNMT1蛋白的高表达参与了此抑制过程.
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邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯长期低剂量染毒对HepG2细胞DNA甲基化的影响
目的 探索邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)长期低剂量染毒对HepG2细胞全基因组DNA甲基化和细胞毒性的影响.方法 用1.5、15.0、150.0 μmol/L的DEHP对HepG2细胞进行24 h持续染毒,连续处理20代后,对细胞的DNA甲基转移酶1(DNMT 1)的基因和蛋白表达、基因组甲基化水平、凋亡水平和细胞周期进行检测,比较DEHP染毒细胞与正常对照细胞的差异.结果 HepG2细胞经DEHP染毒处理后,DNMT1的mRNA与蛋白表达水平均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);随着DEHP染毒剂量的增加,15.0、150.0μmol/L染毒组细胞的基因组甲基化水平明显下调,差异有统计学意义(P＜0.05和P＜0.01);150.0 μmol/L染毒组细胞晚期凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期无显著变化.结论 HepG2细胞在接受长期低剂量的DEHP染毒后,细胞基因组DNA甲基化水平明显下调.高剂量的DEHP长期染毒能诱导细胞出现一定程度的凋亡,DEHP具有细胞毒性,但其对细胞周期没有明显影响.
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DNA甲基转移酶1基因多态与噪声性听力损失易感性
目的 探讨DNA甲基转移酶1基因(DNMT1) rs12984523、rs16999593和rs2228612单核苷酸多态性与中国汉族人群中噪声性听力损失(NIHL)易感性之间的关联.方法 采用病例-对照研究,电测听双耳高频平均听阈值≥40 dB为病例组,共188名工人；电测听结果双耳高频平均听阈值＜40dB的300名工人为对照组.应用TaqMan探针法检测3个SNP位点的基因型.结果 DNMT1rs2228612携带TT基因型为NIHL的危险因素(调整后OR=1.69,95％CI:1.14～2.52).结论 在188例电测听双耳高频平均听阈值≥40 dB的中国汉族人群中,DNMT1 rs 2228612与噪声性听力损失的易感性有关.
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原发性痛风患者外周血单个核细胞DNA甲基转移酶表达的研究
目的 了解原发性痛风患者DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)、DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)的表达水平及作用.方法 采用实时荧光定量PCR方法检测50例急性期痛风患者(AG组)、47例间隙期痛风患者(IG组)、44名健康对照组PBMCs中DNMTI、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达水平;采用SPSS 19.0统计软件进行分析,计量资料组间比较采用Wilcoxon秩和检验、单因素方差分析,变量间的相关关系采用Spearman相关分析.结果 DNMT1在AG组、IG组的PBMCs中表达为[0.000 8(0.000 4,0.005 1)],[0.001 1(0.000 4,0.008 4)],较健康对照组表达[0.001 7(0.001 0,0.008 3)]显著降低,差异有统计学意义(F=3.696,P均＜0.05)、DNMT1在AG组和IG组中的mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05).DNMT3A在AG组、IG组的PBMCs中的表达为[0.005 8(o.oo1 5,0.017 9)、0.012 8(0.003 2,0.043 5)],较健康对照组表达[0.015 1(0.007 6,0.072 7)]降低,差异有统计学意义(F=10.145,P均＜0.05),DNMT3A在AG组的表达较IG组的表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).DNMT3B在AG组、IG组、健康对照组之间表达差异无统计学意义(F=1.826,P＞0.05).DNMT1在痛风患者PBMCS中的表达与血肌酐呈正相关(r=0.394,P＜0.05),DNMT3A在痛风患者PBMCs中的表达与红细胞体积(MCV)呈正相关(r=0.588,P＜0.05).结论 原发性痛风患者DNMT1、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的异常表达,提示可能参与了原发性痛风的发生发展、遗传及炎症调节.
关键词： 痛风 DNA甲基转移酶1 DNA甲基转移酶3a DNA甲基转移酶3b
