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叶酸与甲基-CpG-结合蛋白2基因表达在宫颈癌变中的关系及交互作用
目的 探讨叶酸和甲基-CpG-结合蛋白2(MeCP2)表达在宫颈癌变中的交互作用.方法 选择经病理学确诊的宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者41例,宫颈上皮内瘤样变(CIN)患者71例(34例CIN1和37例CIN2+)及61名宫颈正常(NC)妇女为研究对象.采用微生物法检测血清叶酸和红细胞叶酸水平,Western blot法和荧光定量PCR法检测宫颈组织中MeCP2蛋白和mRNA的表达量.利用SPSS 20.0软件进行相关资料的Kruskal-Wallis H检验、x2检验、x2趋势检验和Spearman秩相关分析,应用广义多因子降维模型(GMDR)评价交互作用.结果 随着宫颈病变程度的加重,血清叶酸(H=44.71,P＜0.001;趋势检验x2=24.48,P＜0.001)和红细胞叶酸(H=5.28,P＜0.001;趋势检验r=3.83,P＜0.05)水平均呈逐渐降低趋势,且血清叶酸和红细胞叶酸水平呈正相关(r=0.270,P＜ 0.001);MeCP2蛋白(H=33.72,P＜0.001;趋势检验r=14.74,P＜0.001)和mRNA(H=19.50,P＜0.001;趋势检验,=10.74,P＜0.001)表达量随着宫颈病变的进展均呈逐渐升高趋势;叶酸水平与MeCP2蛋白表达量呈负相关(血清叶酸:r=-0.226,P=0.003;红细胞叶酸:r=-0.164,P=0.004).GMDR交互作用分析表明,在SCC组和CIN2+组,血清叶酸和红细胞叶酸缺乏,MeCP2蛋白高表达与MeCP2mRNA高表达呈现交互作用.结论 叶酸缺乏和MeCP2基因异常高表达可增加宫颈癌及其癌前病变的风险,血清叶酸缺乏、红细胞叶酸缺乏、MeCP2蛋白高表达和MeCP2mRNA高表达在宫颈癌变的发展过程中具有协同作用.
关键词： 叶酸 甲基-CpG-结合蛋白2 宫颈癌变 交互作用 -
脆性组氨酸三联体、甲基-CpG-结合蛋白2异常表达与宫颈癌变的关系及交互作用
目的 探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)与甲基-CpG-结合蛋白2(MeCP2)异常表达在宫颈癌变中的交互作用.方法 选择经病理学确诊的宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者73例,宫颈上皮内瘤样变(CIN)患者113例(CIN Ⅰ 45例;CINⅡ/Ⅲ68例)和宫颈正常(NC)妇女60人作为研究对象,分别采用荧光定量PCR和Western blot检测宫颈组织中FHIT及MeCP2 mRNA和蛋白的表达量,甲基化特异性PCR(MSP)检测FHIT基因CpG岛甲基化状态.利用SPSS 20.0软件进行相关资料的Kruskal-Wallis H检验、x2检验、x2趋势检验和Spearman秩相关分析,应用广义多因子降维模型(GMDR)评价交互作用.结果 随着宫颈癌变的进展,FHIT基因CpG岛甲基化率(x2=18.64,P＜0.001,趋势检验x2=18.08,P＜0.001)逐渐升高,FHIT mRNA (H=27.32,P＜0.001;趋势检验x2=12.65,P＜0.001)与蛋白(H=47.10,P＜0.001;趋势检验x2=29.79,P＜0.001)表达量逐渐降低,且FHIT基因CpG岛甲基化率与FHIT蛋白表达量呈负相关(r=-0.226,P＜0.001).MeCP2mRNA(H=26.19,P＜0.001;趋势检验x2=11.81,P=0.001)与蛋白(H=69.02,P＜0.001;趋势检验x2=47.44,P＜0.001)表达量均逐渐升高.MeCP2蛋白表达量与FHIT mRNA Ct比值呈正相关(r=0.254,P＜0.001),与FHIT蛋白表达量呈负相关(r=-0.213,P=0.001).GMDR交互作用分析表明,在CINⅡ/Ⅲ组,MeCP2蛋白高表达、FHIT基因CpG岛甲基化及mRNA和蛋白低表达存在交互作用;在SCC组,MeCP2 mRNA和蛋白高表达、FHIT基因CpG岛甲基化及mRNA和蛋白低表达存在交互作用.结论 MeCP2 mRNA和蛋白高表达、FHIT基因CpG岛甲基化及mRNA和蛋白低表达,均可增加宫颈癌变的风险,且在宫颈癌变中具有协同作用.
关键词： 宫颈癌变 脆性组氨酸三联体 甲基-CpG-结合蛋白2 -
DNA甲基转移酶1与甲基-CpG-结合蛋白2异常表达在宫颈病变中的作用及相互关系
目的 探讨DNA甲基转移酶l(DNMT)和甲基-CpG-结合蛋白2(MeCP2)与宫颈癌发生发展的关系及其在宫颈癌变中的相互作用.方法 选择经病理学确诊的宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者74例、低度宫颈上皮内瘤样变(CINⅠ)患者52例、高度宫颈上皮内瘤样变(CINⅡ-Ⅲ)患者60例和宫颈炎(CI)患者58例为研究对象.在收集全部对象人口学特征、人乳头瘤病毒感染、生殖因素等相关资料同时,检测DNMT1和MeCP2蛋白(Western blot法)和mRNA (real-time PCR法)的相对表达量.采用SPSS 17.0分析软件,计算相关资料的t检验、x2检验、因素与疾病之间关联强度指标(OR值及其95％CI)及其交互作用.结果 随着宫颈病变的加重,DNMT1和MeCP2蛋白表达水平逐渐增高(H=94.33,P＜0.001;F=21.580,P＜0.001),DNMTl和MeCP2 mRNA的表达水平亦逐渐增高(F=4.758,P=0.003; F=7.804,P＜0.001).相关分析表明,DNMT1与MeCP2(r=0.287,P＜0.001)和rnRNA(r=0.179,P=0.005)表达均存在正相关关系.交互作用分析显示,DNMT1与MeCP2蛋白和mRNA高表达在SCC组和CINⅡ-Ⅲ组存在正相加交互作用.结论 DNMT1及MeCP2高表达可增加宫颈癌和癌前病变发生的风险,两者在CIN Ⅱ-Ⅲ组和SCC组存在正相加交互作用.
关键词： 宫颈肿瘤 宫颈癌前病变 DNA甲基转移酶1 甲基-CpG-结合蛋白2 -
亚砷酸钠对HaCaT细胞MGMT基因启动子区甲基化CpG结合蛋白-2、DNA甲基转移酶1、组蛋白去乙酰化酶1结合的影响
目的 观察亚砷酸钠(NaAsO2)对人肤角质形成细胞株(HaCaT细胞)MGMT基因启动子区甲基化CpG结合蛋白-2(MeCP2)、DNA甲基转移酶1(DNMT1)及组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)结合情况的影响,为深化阐释砷毒作用机制提供依据.方法 分别以0.00(空白对照)、3.13、6.25、12.50、25.00 μmol/L NaAsO2重复间隔处理HaCaT细胞72 h(NaAsO2处理24h,隔天再次相同处理,重复3次),以人表皮鳞癌细胞株(A431)作为阳性对照,定量染色质免疫共沉淀技术(Q-ChIP)检测MGMT基因转录调控区ChIP1、ChIP2区域及MGMT基因编码区ChIP3区域MeCP2、DNMT1、HDAC1结合情况.结果 各组HaCaT细胞MGMT基因转录调控区ChIP1、ChIP2区域MeCP2、DNMT1、HDAC1蛋白结合水平比较,差异有统计学意义(F值分别为7.387、84.634、78.442和19.263、69.649、26.546,P均＜0.05)；其中各NaAsO2处理组ChIP1、ChIP2区域MeCP2、DNMT1、HDAC1蛋白结合水平[3.13 μmol/L NaAsO2处理组:(136.00±16.97)％、(145.00±2.83)％、(88.50±19.09)％和(106.50±37.48)％、(112.34±8.73)％、(59.71±8.49)％；6.25 μmol/L NaAsO2处理组:(130.00±42.43)％、(154.50±4.95)％、(101.00±1.27)％和(88.50±3.54)％、(134.32±2.82)％、(102.75±19.91)％;12.50 μmol/LNaAsO2处理组:(141.50±23.33)％、(161.50±7.78)％、(125.00±11.31)％和(119.50±24.75)％、(171.59±3.54)％、(167.61±10.61)％;25.00 μmol/NaAsO处理组:(134.50±43.13)％、(472.50±50.20)％、(383.50±30.41)％和(180.09±12.73)％、(348.50±27.58)％、(158.45±12.02)％]均高于空白对照组[(51.50±9.19)％、(82.00±12.73)％、(25.03±2.91)％和(37.02±4.24)％、(91.56±26.16)％、(19.09±2.90)％,P均＜0.05].各组HaCaT细胞MGMT基因编码区ChIP3区域MeCP2蛋白结合水平比较,差异无统计学意义(F=1.670,P＞0.05),而DNMT1、HDAC1蛋白结合水平比较,差异有统计学意义(F值分别为4.404、9.863,P均＜0.05),其中25.00 μmol/L NaAsO2处理组DNMT1、HDAC1蛋白结合水平[(615.85±29.63)％、(306.09±59.40)％]与空白对照组[(99.70±12.02)％、(92.45±48.79)％]比较,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 MeCP2可结合于砷所致高甲基化MGMT基因转录调控区,通过招募DNMT1及HDAC1使组蛋白去乙酰化,同时DNMT1可结合于MGMT基因编码区,以非甲基化DNA结合蛋白(MBD)依赖的方式招募HDAC1,通过染色质重塑方式导致MGMT基因沉默,可能是砷毒性表现的早期分子事件.
