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肾病综合征患儿外周血淋巴细胞 HDAC1表达与糖皮质激素反应差异性的相关研究
目的检测原发性肾病综合征（PNS）患儿外周血淋巴细胞去乙酰化转移酶1（HDAC1）的表达水平，探讨HDAC1在PNS患儿糖皮质激素（ GC）耐药中的作用。方法选择徐州医学院附属医院住院PNS患儿为研究对象，按照患儿对GC的疗效分成两组：激素敏感型肾病综合征（SSNS）25例，激素耐药型肾病综合征（SRNS）29例，SRNS组根据临床治疗分为未用环磷酰胺（CTX）组16例以及CTX冲击5疗程组13例2个亚组；另选取10名健康体检儿童作为对照组。取血分离淋巴细胞，分别应用Western blot 及RT-PCR法检测HDAC1蛋白及mRNA的表达。结果各组患儿外周血淋巴细胞均有HDAC1的表达；GC治疗前， SRNS组HDAC1蛋白（0.4224±0.0084）及mRNA （0.5596±0.009）表达均低于SSNS组（0.6755±0.0105，0.7682±0.0003）及正常对照组（0.5067±0.0145，0.6703±0.0011），差异有统计学意义（P＜0.01），SSNS组HDAC1表达高于正常对照组，差异有统计学意义；GC治疗6周时，SRNS组HDAC1蛋白（0.3536±0.0041）及mRNA（0.5587±0.0008）表达低于正常对照组及SSNS组，差异有统计学意义（ P＜0.01）；SSNS组HDAC1蛋白（0.6385±0.0074）及 mRNA （0.7633±0.0007）表达高于正常对照组（0.5067±0.0145，0.6703±0.0011），差异有统计学意义（P＜0.01）；CTX组HDAC1蛋白（0.4965±0.0153）及mRNA（0.6766±0.0010）表达低于SSNS组，但高于SRNS组，差异均有统计学意义（ P＜0.01），但与正常对照组差异无统计学意义。且各组对应的各指标GC治疗前后差异有统计学意义。结论不同GC反应PNS患儿有HDAC1表达差异；GC治疗可能影响HDAC1的表达；CTX应用可干预HDAC1表达。
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组蛋白去乙酰化酶1在胰腺癌表达及临床意义
目的 探讨胰腺癌组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase1,HDAC1)表达的临床意义.方法 收集30例胰腺癌和相应癌旁组织,应用实时定量PCR和免疫组织化学方法检测HDAC1的表达,并分析胰腺癌HDAC1表达与临床病理参数的关系.结果 胰腺癌HDAC1 mRNA表达指数为2.60(0.42～12.81),癌旁组织为1.02(0.19～3.58),两组表达有显著差异(P=0.001).胰腺癌HDAC1蛋白表达阳性细胞率为(56±26)%,癌旁组织为(6±6)%,相差显著(P=0.000).以阳性细胞率平均值56%为界,高表达(≥56%)18例,低表达(＜56%)12例.胰腺癌HDAC1高表达和肿瘤TNM分期、淋巴结转移相关.结论 胰腺癌HDAC1高表达提示肿瘤可能已属晚期,预后不良.
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曲古菌素A对人胰腺癌PaTu-8988细胞增殖和细胞周期的影响
目的 观察曲古菌素A(tfichostatin A,TSA)对人胰腺癌PaTu-8988细胞增殖及细胞周期的影响.方法 不同浓度(0.1、0.5、2.0 μmol/L)TSA处理人胰腺癌PaTu-8988细胞,并设空白对照组.采用WST-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测细胞周期相关基因p21和cyclin DI mRNA的表达.结果 对照组、TSA 0.1μmol/L、0.5μmol/L和2.0μmol/L组的细胞存活率分别为(100.0±4.2)%、(88.5±4.2)%、(79.7±5.0)%和(64.3±7.2)%,各TSA组均显著低于对照组(P<0.01).TSA 0.1μmoL/L、0.5μmol/L组的细胞以G1期居多,2.0μmol/L组(50.29±7.53)%细胞阻滞在G2/M期.TSA各组p21 mRNA表达值分别为5.29±1.16、7.79±0.41、8.61±0.73,较对照组l,00±0.08显著升高(P<0.01);cyclin DI mRNA表达值分别为1.13±0.12、0.42±0.06、0.19±0.06,较对照组1.00±0.07表达降低(P<0.05).结论 TSA通过上调p21及下调cyclin D1基因的表达,导致细胞周期阻滞.
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HDAC1基因沉默对人胰腺癌细胞PaTu8988细胞周期的影响
目的 探讨组蛋白脱乙酰基酶1( HDAC1)基因沉默对人胰腺癌PaTu8988细胞周期影响及可能机制.方法 常规培养胰腺癌PaTu8988细胞,分为对照组、阴性siRNA转染(c-siRNA)组及15、30 nmol/L HDAC1 siRNA转染组.采用脂质体2000转染细胞48 h后,应用蛋白质印迹法检测细胞HDAC1基因沉默效率及p21基因表达；流式细胞法检测细胞周期的变化.结果 与对照组比较,30 nmol/L HDAC1 siRNA组PaTu8988细胞的HDAC1蛋白表达明显下降,P21蛋白表达明显增加；G2/M 期细胞比例显著减少[(21.48±3.67)％比(28.28±2.94)％,P＜0.05],S期细胞比例显著增加[(50.20±6.85)％比(32.49±2.78)％,P＜0.05].结论 HDACl siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDACl的表达,引起细胞S期阻滞,其机制可能与上调p21蛋白表达有关.
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MTA1基因表达与子宫颈癌细胞侵袭转移的关系
目的：探讨MTA1基因表达与宫颈癌细胞侵袭转移的关系。方法将真核细胞表达载体pcDNA3质粒、MTA1基因表达载体pcDNA3-MTA1质粒、MTA1基因RNA干扰载体pSilencer3.1-MTA1-siRNA质粒稳定转染宫颈癌细胞株CaSki细胞（分别命名为对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组），逆转录(RT) -PCR技术和蛋白印迹法检测CaSki细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及平板集落形成实验检测CaSki细胞的增殖情况，划痕实验、穿膜实验检测CaSki细胞的迁移能力，基质黏附实验检测CaSki细胞的黏附能力，细胞侵袭实验检测CaSki细胞的侵袭能力，流式细胞仪检测CaSki细胞的细胞周期比例。将3组CaSki细胞接种于裸鼠腋下，观察其在裸鼠体内的生长情况。结果 MTA1组细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达强度均明显高于对照组，而MTA1 -siRNA组细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达强度均明显低于对照组。MTT比色法检测显示，与对照组比较，自第2天起，MTA1组细胞的生长速度加快，而MTA1-siRNA组细胞的生长速度减慢，分别比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)；平板集落形成实验显示，对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组的克隆数分别为( 133±6)、(169±10)和(57±5)个，MTA1组明显多于对照组（P＜0.05），而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。划痕实验显示，MTA1组细胞的迁移能力明显增强，而MTA1 -siRNA组细胞的迁移能力明显减弱；穿膜实验显示，对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组穿膜细胞数分别为( 153±17)、( 247±38)和(82±10)个，MTA1组明显多于对照组(P＜0.05)，而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。基质黏附实验显示，孵育90 min时，对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组细胞的黏附率分别为(69.3±3.6)％、(80.4±5.6)％、(39.2±7.4)％，MTA1组明显高于对照组(P＜0.05)，而MTA1 -siRNA组明显低于对照组（P＜0.05）。细胞侵袭实验显示，对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组穿膜细胞数分别为(231±19)、(354±36)和(76±7)个，MTA1组明显多于对照组(P＜0.05)，而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。流式细胞仪检测显示，对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组细胞的G1、S、G2期细胞比例分别比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。裸鼠接种CaSki细胞30d后，对照组、MTA1组、MTA 1-siRNA组裸鼠肿瘤体积分别为(519 ±236)、(2245±780)、(111±65) mm3，肿瘤质量分别为(0.41 ±0.19)、(2.10±0.39)、(0.11±0.08)g，MTA1组均明显高于对照组(P＜0.05)，而MTA1 -siRNA组均明显低于对照组(P＜0.05)。结论MTA1基因促进宫颈癌细胞的侵袭转移，沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞生长减慢，细胞侵袭及转移能力下降，从而逆转宫颈癌细胞的恶性表型，为进一步研究MTA1基因的作用机制以及应用RNA干扰技术进行以MTA1基因为靶点的治疗打下了一定的基础。
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SIRT3抗癌变作用的研究进展
目的:总结沉默信息调节因子3(SIRT3)与肿瘤的关系,探讨SIRT3在抗肿瘤发生方面的作用.方法:应用Medline、PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“沉默信息调节因子3”、“肿瘤”为关键词,检索2005-01- 2011-10的相关文献.纳入标准:1)SIRT3的作用；2)SIRT3与肿瘤发生的关系.分析文献29篇.结果:SIRT3是一介重要的线粒体去乙酰化酶.对肿瘤的发生有抑制作用,其作用机制一定程度上与抑制线粒体内ROS增高有关,为临床上肿瘤的早期发现和治疗起到一定的理论指导作用.ITR3也参与对细胞代谢和生存的调节.结论:SIRT3有抑制肿瘤发生的作用,为临床上肿瘤的早期发现和治疗起到一定的理论指导作用,将为肿瘤的治疗提供新的策略和方法.
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MS-275阻断STAT3和NF-κB信号通路并诱导U266细胞凋亡机制的探讨
于G0/G1期;瑞氏-姬姆萨染色显示,细胞发生明显变化;蛋白质印迹法检测表明,MS-275作用U266细胞后, PARP发生剪切,导致细胞凋亡;对细胞凋亡相关信号通路STAT3及NF-κB检测结果表明,STAT3,IκB-α发生磷酸化水平受到明显抑制.结论:MS-275对U266细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现,与细胞增殖相关的STAT3及NF-κB信号通路被阻断是凋亡发生的机制之一.
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Tubacin抑制胶质瘤细胞生长作用的实验研究
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)选择性抑制剂tubacin对胶质瘤细胞增殖、迁移、运动和凋亡的作用及其作用机制.方法 以人胶质瘤U251细胞株为研究对象,设立空白对照组(CON组),替莫唑胺(TMZ)阳性对照组和tubacin组.采用MTT法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移能力,高内涵筛选(HCS)技术观察细胞运动轨迹,流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡率和相关凋亡蛋白的表达情况,DCFH-DA荧光染色流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果 MTT结果表明,tubacin组U251细胞的增殖能力显著低于CON组(P＜0.05);与CON组相比,tubacin组细胞的迁移和运动能力明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05);流式细胞术结果表明,与CON组相比,tubacin组细胞凋亡率显著升高(P＜0.05);Western blot检测结果表明,与CON组相比,tubacin组Caspase-3和Bax表达均显著升高(均P＜0.05),而Bcl-2的表达明显降低(P＜0.05).ROS检测结果发现,tubacin作用后U251细胞内ROS水平显著增高(P＜0.05),且tubacin的这一作用具有剂量依赖性.结论 Tubacin能够抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和运动,并促进其凋亡;其作用可能是通过诱导细胞释放ROS而产生的.
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曲古抑菌素A对肿瘤坏死因子α诱导的炎症微环境下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响
目的 观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的炎症微环境下牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSC)中组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDAC)家族的表达变化,探究HDAC抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)干扰HDAC功能后对PDLSC成骨分化能力的影响.方法 收集新鲜健康的离体牙牙周膜组织,分离培养PDLSC.采用实时定量PCR技术检测对照组及TNF-α(10 μg/L)刺激下HDAC1～11的表达变化;甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测TSA(50 nmol/L)对PDLSC增殖能力的影响,对照组加正常细胞培养液,TNF-α组加含TNF-α的细胞培养液,TSA组加含TNF-α及TSA的细胞培养液;分别采用茜素红染色、实时定量PCR技术和蛋白质印迹法检测TSA对炎症微环境下PDLSC成骨分化能力的影响,对照组加正常成骨诱导液,TNF-α组加含TNF-α的成骨诱导液,TSA组加含TNF-α及TSA的成骨诱导液.结果 除HDAC7外,TNF-α组HDAC的表达均显著高于对照组(P＜0.05);50 nmol/L TSA对PDLSC的增殖能力无显著影响(P=0.232);茜素红染色显示TNF-α组PDLSC较对照组基质矿化显著减少,而TSA组细胞矿化能力明显提高;与对照组(设为1.0)相比,TNF-α组PDLSC成骨相关基因核心结合蛋白因子2(runt-related transcription factor-2,RUNX2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP) mRNA的相对表达量分别为0.17±0.02、0.32±0.03,TSA组RUNX2、ALP mRNA的表达量(分别为0.67±0.03、0.89±0.02)均显著高于TNF-α组(P＜0.01);蛋白质印迹法结果显示,TNF-α组PDLSC成骨相关蛋白的表达较对照组明显减少,与TNF-α.组相比,TSA可以明显促进炎症微环境下细胞成骨相关蛋白的表达.结论 炎症微环境下PDLSC高表达HDAC,应用TSA抑制HDAC后可显著提高炎症环境下PDLSC的成骨分化能力.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂与紫杉醇联合应用对肺癌细胞的毒性作用
目的 评价组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)联合紫杉醇(TAX)对肺癌细胞株H1299的抑制作用.方法以不同浓度TSA和(或)TAX处理H1299细胞,MTT法检测细胞存活率,计算TAX的半数抑制浓度(IC_(50))并绘制细胞生长曲线.随后将H1299细胞分成4组:对照组,常规培养细胞36h;TAX 组,TAX (10nmol/L)处理细胞24h;TSA 组,TSA (300nmol/L)处理细胞12h;TF组,TSA(300nmol/L)处理细胞12h后,加入TAX(10nmol/L)处理24h.采用流式细胞术观察细胞周期分布和细胞凋亡率;对细胞进行Hochest 33342染色后,在荧光显微镜下观察细胞核形态的改变;Western blotting 检测人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)剪切蛋白和p21蛋白表达.结果 TSA预先作用12h可以使TAX对H1299细胞的IG_(50)由110.6±38.7nmol/L下降至63.7±11.8nmol/L(P<0.05).与对照组比较,TAX和TF组细胞存在明显的G_0/G_1期阻滞,但4组的细胞凋亡率均很低(P>0.05).TSA、TAX 及TF组可见以死亡为主的细胞核改变现象,凋亡小体很少.4组均未检测到PARP剪切蛋白.与对照组比较,TSA、TAX及TF组的p21蛋白表达均有明显增加(P<0.05);与TAX组比较,TSA组和TF组的p21蛋白明显增加(P<0.05),且后两组间无显著差异(P>0.05).结论 联合HDAC抑制剂TSA可提高TAX对肺癌细胞H1299的毒性,促进细胞死亡,但其机制与细胞凋亡无关.
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尿多酸肽联合丁酸钠抑制乳腺癌细胞生长的体外实验研究
目的:探讨尿多酸肽(uroacitide,CDAⅡ)与组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(sodium butyrate, SB)联合应用能否使人乳腺癌细胞MCF7维甲酸β2受体(retinoic acid receptorβ2,RARβ2)基因启动子去甲基化并诱导基因表达;以及联合用药能否协同抑制细胞生长、诱导细胞调亡.方法:培养乳腺癌细胞MCF7,分为CDAⅡ、SB两个单药组和两药联合组.分别用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation- specific polymerase chain reaction,MSP)和反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测RARβ2基因启动子甲基化状态和表达;Hoechst33342/碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色和DNA末端原位标记染色法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)检测调亡;甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测细胞增殖.结果:CDAⅡ或SB单药均不能使RARβ2基因启动子去甲基化,也不能诱导基因表达,联合用药使基因启动子发生部分去甲基化并诱导了基因mRNA的表达;Hoechst33342/PI后,荧光显微镜下可见联合用药组出现明显的凋亡细胞,TUNEL法显示联合用药组细胞凋亡率显著高于两个单药组(39.5% vs 5.2%,8.1%,P＜0.05);MTT比色法显示与单独用药相比,联合用药对肿瘤细胞的生长抑制作用更显著,两药呈现交互作用(F=15, P＜0.05). 结论:CDAⅡ与组蛋白去乙酰化酶抑制剂SB具有协同抑制乳腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,这可能与两药联合应用能够使RARβ2基因启动子去甲基化并诱导基因表达相关.
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香烟烟雾对哮喘小鼠缺氧诱导因子-1α及组蛋白去乙酰化酶表达的影响
目的 探讨香烟烟雾对哮喘小鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1 α)及组蛋白去乙酰化酶(HDAC2)表达的影响.方法 SPF级雌性BALB/c小鼠30只,按随机数字表法随机平均分为对照组、哮喘组、吸烟哮喘组3组.用卵白蛋白(OVA)致敏和激发的方法制备哮喘和吸烟哮喘模型,其中吸烟哮喘组在激发后置于自制熏箱内被动吸烟,对照组则用生理盐水代替OVA.观察各组小鼠肺组织病理学变化,分析支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞分类计数,酶联免疫吸附(ELISA)法测定BALF中白细胞介素(IL)-8水平,并采用免疫组织化学法和Western印迹法测定各组小鼠肺组织中HIF-1α及HDAC2表达情况,并作相关性分析.结果 哮喘组和吸烟哮喘组嗜酸粒细胞计数比例均显著高于对照组[(8.90±1.60)％、(7.52±0.63)％比(0.60±0.10)％,均P＜0.01],吸烟哮喘组中性粒细胞计数比例显著高于哮喘组[(18.24±5.19)％比(8.46±1.58)％,P＜0.01];哮喘组和吸烟哮喘组肺组织HIF-1α表达均显著高于对照组(0.144±0.008、0.238±0.015比0.081±0.005)且吸烟哮喘组显著高于哮喘组(均P＜0.01);哮喘组和吸烟哮喘组肺组织HDAC2表达均显著低于对照组(0.287±0.008、0.164 ±0.015比0.452 ±0.041)且吸烟哮喘组显著低于哮喘组(均P＜0.01).吸烟哮喘组BALF中IL-8水平显著高于哮喘组、对照组[(42.07±4.54)比(21.66±2.78)、(14.33±3.73) pg/ml,均P＜0.01],吸烟哮喘组肺组织中HIF-1α与HDAC2的表达呈显著负相关(r=-0.950,P＜0.01),吸烟哮喘组BALF中IL-8的表达与HDAC2的表达呈显著负相关(r=-0.855,P＜0.01).结论 香烟烟雾可能通过激活HIF-1α而抑制HDAC2,加重气道炎症.
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Tubastatin A Hcl对急性支气管哮喘小鼠气管炎症的干预作用
目的 探讨组蛋白脱乙酰基酶6(HDAC6)抑制剂Tubastatin A Hcl对急性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气管炎症的干预作用.方法 48只BALB/C小鼠按随机数字表法随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组和Tubastatin A Hcl组各12只.测定各组小鼠气管反应性,计数其支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和分类细胞数以及白细胞介素(IL)-4、IL-5和γ干扰素(IFN-γ)水平.取各组小鼠肺组织分别通过HE染色观察气管炎症浸润、AB-PAS染色观察气管上皮杯状细胞化生、Masson染色观察肺组织胶原沉积情况.结果 Tubastatin A Hcl组气管反应性显著低于哮喘组[(4.18±0.94)比(6.02±0.47),P＜0.05];Tubastatin A Hcl组BALF中炎症细胞总数[(57.0±5.7)×104/ml比(87.0±5.6)×104/ml]、嗜酸性粒细胞数[(6.8±1.7)×104/ml比(12.3±3.5)×104/ml]、IL-4[(19.3 ±2.7)比(26.2±3.2)ng/ml]水平均显著低于哮喘组(均P＜0.05),IL-5低于哮喘组、IFN-γ水平高于哮喘组但差异均无统计学意义(均P＞0.05);Tubastatin A Hcl组肺组织气管血管周围炎症细胞浸润程度、炎症细胞数[(9.80±2.42)比(20.67 ±7.53)个]、炎症评分[(2.20±0.70)比(3.60 ±0.68)分]、杯状细胞化生百分比[(50.46±5.03)％比(71.06±5.38)％]均显著低于哮喘组(均P＜0.05),胶原沉积面积低于哮喘组但差异无统计学意义(P＞0.05).但上述结果地塞米松组均略优于Tubastatin A Hcl组但差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 Tubastatin A Hcl能够有效缓解急性期哮喘气管炎症水平,但其抗炎作用有限,效果并不如地塞米松显著.
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脾脏CD4+ T细胞组蛋白乙酰化修饰与NOD小鼠糖尿病肾病进展的关系
目的 探讨脾脏CD4+ T细胞组蛋白乙酰化修饰与非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠糖尿病肾病发生及进展的关系.方法 SPF级雌性NOD小鼠24只,8周龄,随机分为4组,检测12、18、24、30周龄小鼠的随机血糖,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测尿白蛋白和尿肌酐.分离脾脏CD4+ T细胞,H3、H4乙酰化试剂盒检测CD4+ T细胞H3、H4总体乙酰化水平,实时定量PCR检测组蛋白乙酰化相关修饰酶的mRNA水平,Western印迹法验证实时定量PCR筛选出的阳性基因.结果 与12周龄NOD小鼠相比,24和30周龄鼠血糖升高[(18.1±6.3)、(20.7±7.5) mmol/L比(7.2±3.1) mmol/L],尿白蛋白/肌酐比值升高[(4.04±1.54)、(8.11±1.77)mg/g比(2.12±0.56) mg/g],脾脏CD4+ T细胞H3总体乙酰化水平降低[(0.068±0.023)、(0.043±0.017)比(0.127±0.036)],H4总体乙酰化水平降低[(0.058±0.022)、(0.041±0.019)比(0.082±0.032)],均P＜0.05.在组蛋白乙酰化修饰酶谱中,与12周龄NOD小鼠相比,24和30周龄鼠组蛋白乙酰转移酶P300的mRNA水平下降[(15.53±6.31)、(13.76±3.62)比(22.94±7.40)],P300/CBP相关因子(PCAF)的mRNA水平也降低[(3.21±0.81)、(2.74±0.36)比(5.31±0.73)],而HDAC5mRNA及蛋白表达水平升高(均P＜0.05).24和30周龄中已发病的NOD小鼠H3(r=-0.590,P=0.043)、H4(r=-0.702,P=0.011)乙酰化水平与尿白蛋白/肌酐比值呈负相关,HDAC5表达水平与尿白蛋白/肌酐比值呈正相关(r =0.673,P=0.016).结论 随着NOD小鼠周龄及肾脏损伤的进展,其脾脏CD4+ T细胞总体H3、H4乙酰化水平降低,组蛋白去乙酰化酶HDAC5表达水平升高.CD4+ T细胞中HDAC5的异常升高与NOD小鼠肾脏损害相关.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭的影响
目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭的作用，并探讨其作用的可能机制。方法：应用不同浓度MS-275体外作用于人宫颈癌SiHa细胞，通过划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平，实时定量聚合酶链反应（PCR）方法检测细胞核因子κB（NF-κB）和尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）基因mRNA表达。结果：经MS-275作用后，随MS-275浓度的增加，人宫颈癌SiHa细胞迁移速度降低，穿过Transwell滤膜的细胞数量减少。同时细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加，细胞NF-κB和uPA基因mRNA表达降低。结论：MS-275可抑制人宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭能力，提高组蛋白乙酰化水平，降低NF-κB和uPA基因表达可能是其作用机制之一。
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丙戊酸钠抑制Kasumi-1细胞增殖及诱导分化和凋亡机制的研究
目的:探讨丙戊酸钠(VPA)通过抑制组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)的活性,消除AML1-ETO融合蛋白转录抑制作用,抑制Kasumi-1细胞增殖及诱导凋亡的机制.方法:不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞不同时间后,应用台盼蓝拒染人工计数法观察VPA对细胞增殖的影响,普通光学显微镜观察细胞形态改变,流式细胞术分析细胞周期和检测髓系分化抗原CD11b的表达水平的变化,DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡.结果:VPA能显著抑制Kasumi-1细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性,VPA处理Kasumi-1细胞72 h时的半数抑制浓度(IC<,50>)为2.33 mmol/L;VPA处理后,细胞周期检测G0/G1期细胞比例逐渐增高;VPA能诱导髓系分化抗原CD11b表达水平的阳性率升高,呈时间及剂量依赖性;VPA能诱导Kasumi-1细胞凋亡,Kasumi-1细胞经VPA 3 mmol/L处理72 h后,出现典型的凋亡细胞所具有的梯形DNA条带.结论:VPA能抑制Kasumi-1细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞部分分化和凋亡.
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HDAC9与大动脉粥样硬化型脑梗死关系的研究进展
基于双胞胎、家族及分子流行病学的研究发现，脑梗死的平均遗传度约为37.9﹪，其中大动脉粥样硬化型脑梗死（ large artery atherosclerosis stroke， LAA-S）的遗传度约为40.0﹪，心源性栓塞型遗传度约为32.6﹪，小动脉闭塞型遗传度约为16.1﹪，提示脑梗死存在遗传异质性，且遗传因素对LAA-S 的影响更大［1-2］。近的全基因组关联及meta 分析发现，某些基因与不同类型脑梗死存在相关性［3-8］，如PITX2和ZFHX3基因与心源性栓塞型相关联［3-4，6-7］，而组蛋白去乙酰化酶9（ histone Deacetylase 9，HDAC9）主要与LAA-S 相关联［6-10］，提示这些基因与不同类型脑梗死的发生、发展密切相关，为进一步研究这些基因在脑梗死发生、发展中的作用提供了重要依据。
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瑞芬太尼后处理对糖尿病性心肌细胞保护作用削弱的机制:与组蛋白去乙酰化酶3表达的关系
目的 评价组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)与瑞芬太尼后处理对糖尿病性心肌细胞保护作用削弱机制的关系.方法 H9c2细胞在10％胎牛血清DMEM/F12培养基中培养、传代,接种于6孔板(2 ml/孔),接种密度105个/ml,接种12 h后细胞贴壁,换正常糖(5.5 mmol/L)或高糖(25mmol/L) DMEM培养基培养48 h.采用随机数字表法分为6组(n=18):对照组(CON组)、缺氧复氧组(H/R组)、瑞芬太尼后处理组(RPC组)、高糖组(HG组)、高糖+缺氧复氧组(HG-H/R组)和高糖+瑞芬太尼后处理组(HG-RPC组).H/R组、RPC组、HG-H/R组和HG-RPC组弃去培养液,加入Ty-rode液,将培养板置于95％N2-5％CO2培养罐中孵育5h,H/R组和HG-H/R组更换为含10％胎牛血清的相应糖DMEM培养基孵育1h,RPC组和HG-RPC组更换为含终浓度为1μmol/L瑞芬太尼的DMEM培养基孵育1h.于复氧1h时,采用CCK-8法检测细胞活力,AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞HDAC3和caspase-3表达水平.结果 与CON组比较,H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率增加,caspase-3与HDAC3表达上调(P＜0.05);与H/R组比较,RPC组细胞活力升高,细胞凋亡率下降,caspase-3和HDAC3表达下调(P＜0.05);与HG组比较,HG-H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,caspase-3和HDAC3表达上调(P＜0.05);与HG-H/R组比较,HG-RPC组细胞活力、细胞凋亡率、caspase-3与HDAC3表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 瑞芬太尼后处理对糖尿病性心肌细胞保护作用削弱的机制与高糖上调HDAC3表达有关.
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辛二酰苯胺异羟肟酸对初进高原致死性失血性休克大鼠肝损伤的影响
目的 评价辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对初进高原致死性失血性休克大鼠肝损伤的影响.方法 选择健康成年雄性SD大鼠40只,体重240～280 g,2～3月龄,将大鼠从海拔1520 m养殖地运输至海拔3780m的实验基地,采用随机数字表法,将其分为4组(n=10):假手术组(S组)、致死性失血性休克组(LHS组)、生理盐水组(NS组)、SAHA组.LHS组、NS组和SAHA组经股动脉和股静脉放血制备致死性失血性休克模型.NS组和SAHA组失血完成后经静脉2min内分别注射0.25 ml生理盐水或SAHA 7.5 mg/kg(0.25 ml).记录大鼠3h生存情况.于失血前、失血完成后即刻、失血完成后3h时(存活时间不足3h时则于死亡即刻)采集股静脉血样,采用比色法检测血清AST、ALT、LDH活性.失于血完成后3h或死亡即刻取肝组织,采用Western blot法检测肝组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)和caspase-3的表达和H3K9乙酰化水平.结果 与S组比较,LHS组、NS组和SAHA组血清AST、ALT和LDH活性升高(P＜0.01).与LHS组和NS组比较,SAHA组血清AST、ALT和LDH活性降低,3h生存率升高,肝组织H3K9乙酰化水平升高,caspase-3表达下调,p-JNK/JNK降低(P＜ 0.05或0.01).LHS组和NS组肝组织病理学损伤严重,SAHA组病理学损伤程度明显减轻.结论 初进高原致死性失血性休克大鼠休克早期应用SAHA具有肝保护作用,其作用机制与提高肝细胞H3K9乙酰化水平,抑制JNK/caspase-3凋亡信号转导通路有关.
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Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与AMPK∕mTOR信号通路的关系
目的 评价Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶( HDAC)在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与AMP依赖的蛋白激酶∕哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK∕mTOR)信号通路的关系.方法SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重210～220 g,腹腔注射柠檬酸盐-链脲佐菌素60 mg∕kg,建立Ⅰ型糖尿病模型,8周后用于实验.取糖尿病大鼠48只,采用随机数字表法分为4组( n＝12):假手术组(S组) 、心肌缺血再灌注组(I∕R组)、心肌缺血再灌注+I型HDAC抑制剂MS-275组( I∕R+MS组)和心肌缺血再灌注+MS-275+AMPK抑制剂Compound C组( I∕R+MS+CC组).采用结扎冠状动脉左前降支45 min,再灌注180 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型. I∕R+MS组腹腔注射MS-275 10 mg∕kg,连续7 d,1次∕d,给药结束后制备心肌缺血再灌注损伤模型;I∕R+MS+CC组于缺血前30 min静脉注射AMPK抑制剂Compound C 0.5 mg∕kg.于再灌注结束时,处死6只大鼠,测定心肌梗死体积;另取6只大鼠,右颈内动脉采血后处死,采用ELISA法检测血清CK-MB和LDH的水平,West-ern blot法测定心肌组织磷酸化AMPK (p-AMPK)、AMPK、磷酸化mTOR(p-mTOR)、mTOR、泛素结合蛋白(P62)和微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、LC3Ⅱ的表达水平,计算 p-AMPK∕AMPK 比值、p-mTOR∕mTOR比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值.结果 与SH组比较,I∕R组、I∕R+MS组和I∕R+M+CC组心肌梗死体积、血清CK-MB和LDH水平升高,I∕R+MS组心肌组织p-AMPK∕AMPK比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值升高,p-mTOR∕mTOR比值降低,P62表达下调(P＜0. 05),I∕R组和 I∕R+ M+CC组心肌组织 p-AMPK∕AMPK比值、p-mTOR∕mTOR比值、LC3Ⅱ∕Ⅰ比值和P62表达差异无统计学意义( P＞0. 05);与I∕R组比较,I∕R+MS组心肌梗死体积、血清CK-MB和LDH水平降低,心肌组织p-AMPK∕AMPK比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值升高,p-mTOR∕mTOR比值降低,P62表达下调(P＜0. 05),I∕R+M+CC组上述指标差异无统计学意义(P＞0. 05);与I∕R+MS组比较,I∕R+M+CC组心肌梗死体积、血清CK-MB和LDH水平升高,心肌组织p-AMPK∕AMPK比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值降低,p-mTOR∕mTOR比值升高,P62表达上调( P＜0. 05).结论 Ⅰ型HDAC通过增强AMPK∕mTOR信号通路调控的细胞自噬水平,参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤.
