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高迁移率族蛋白A2在肾癌中的表达及临床意义
目的：探讨高迁移率族蛋白A2（ HMGA2）在肾癌组织中的表达情况及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取肾癌组织及癌旁组织50例、肾脏良性肿瘤组织40例，采用免疫组化法检测HMGA2蛋白的表达情况，采用逆转录聚合酶链反应（ RT?PCR）和Western blot法检测肾癌组织、癌旁组织及肾脏良性肿瘤组织中HMGA2 mRNA和蛋白表达水平，分析HMGA2表达与肾癌患者临床病理特征及预后的关系。结果 RT?PCR检测显示，HMGA2 mRNA在肾癌组织及癌旁组织、肾良性肿瘤组织中的表达水平分别为0．84±0．23、0．08±0．04和0．19±0．06，肾癌组织中的HMGA2 mRNA表达水平明显高于癌旁组织和肾良性肿瘤组织（ P＜0．01）。 Western blot检测显示，肾癌组织、癌旁组织和肾良性肿瘤组织中HMGA2蛋白表达水平分别为0．91±0．24、0．03±0．01和0．12±0．04，肾癌组织中HMGA2蛋白水平明显高于癌旁组织和肾良性肿瘤组织，差异有统计学意义（ P＜0．01）。免疫组化检测显示，HMGA2蛋白阳性表达均呈棕黄色、棕褐色细颗粒状，主要分布于细胞核。50例肾癌组织中， HMGA2蛋白阳性表达34例，阳性率为68．0％。50例癌旁组织中，HMGA2蛋白阳性表达1例，阳性率为2．0％。40例肾良性肿瘤组织中，HMGA2蛋白阳性表达3例，阳性率为7．5％。肾癌组织中HMGA2蛋白的阳性率明显高于癌旁组织和肾良性肿瘤组织（P＝0．004）。 HMGA2蛋白表达与肾癌患者的TNM分期和淋巴结转移状态有关（均P＜0．05），而与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤病理类型无关（均P＞0．05）。34例HMGA2蛋白阳性表达肾癌患者的中位疾病进展时间（TTP）为（22．36±1．48）个月，而16例HMGA2蛋白阴性表达肾癌患者的中位TTP为（34．55±1．87）个月，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 HMGA2有可能成为肾癌诊断和预后的指标，在肾癌的发生发展中有一定作用。
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膀胱尿路上皮癌组织中DNMT1、HMGA2的表达及临床意义
目的 检测膀胱尿路上皮癌(BUC)组织中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的表达情况,并探讨其临床意义.方法 2010年1月～2012年6月在西安医学院附属宝鸡医院泌尿外科收集BUC癌组织89例和正常膀胱组织45例,免疫组化SP法检测各组织中DNMT1、HMGA2蛋白的表达,分析DNMT1、HM-GA2蛋白表达与BUC患者临床病理参数及预后的关系.结果 DNMT1蛋白在BUC癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别为70.79％(63/89)和6.67％(3/45),差异有统计学意义(P＜0.05);HMGA2蛋白在BUC癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别为65.17％(58/89)和2.22％(1/45),差异有统计学意义(P＜0.05).BUC癌组织中,DNMT1蛋白异常表达与患者肿瘤直径、有无淋巴转移和肿瘤临床分期有关(P＜ 0.05);HMGA2蛋白异常表达与患者肿瘤直径、组织分化程度和肿瘤临床分期有关(P＜0.05).DNMT1阳性患者的生存时间明显短于DNMT1阴性患者(x2=9.634,P=0.002);HMGA2阳性患者的生存时间显著低短于HMGA2阴性患者(x2=4.911,P=0.027).结论 在BUC癌组织中,DNMT1、HMGA2蛋白呈高表达状态,且均在BUC的肿瘤发生和恶性进展中发挥重要作用,DNMT1、HMGA2可作为BUC预后预测和治疗的潜在靶点.
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高迁移率族蛋白A2在胸腺癌中表达及其与临床预后关系
目的 探讨高迁移率族蛋白A2(HMGA2)在胸腺癌及癌旁组织中表达及其与临床预后的关系,并探索其在胸腺癌细胞生长和转移中的作用及分子机制.方法 选取海军军医大学附属长海医院自2006年1—12月收治的62例行根治性胸腺癌切除术患者术中胸腺癌组织及癌旁组织样本.利用免疫组织化学方法检验癌组织与癌旁组织中HMGA2的表达水平;通过χ2检验和Fisher精确概率法分析HMGA2对患者预后的影响;通过慢病毒构建稳定干扰HMGA2的人胸腺癌MP59和T1889细胞系,利用CCK8实验检测HMGA2对胸腺癌细胞增殖的影响;利用Transwell实验检测HMGA2对胸腺癌细胞迁移的影响;通过蛋白免疫印记和逆转录聚合酶链反应等经典生物学技术,分析筛选HMGA2调控胸腺癌细胞生长和转移的下游信号通路.结果 82.3%(51/62)患者胸腺癌组织中HMGA2的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05).HMGA2高表达患者的总体存活率及无瘤存活率显著低于HMGA2低表达患者(P<0.05).干扰HMGA2抑制胸腺癌细胞MP59和T1889的生长和迁移能力,p65分子被下调.结论 HMGA2在胸腺癌中高表达,对胸腺癌组织的生长和转移具有促进作用,其表达水平可以为判断胸腺癌患者预后提供参考.
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化疗干预子宫内膜癌患者血清肿瘤标志物及癌组织中HMGA2的表达及意义
目的 探讨化疗干预对子宫内膜癌患者血清肿瘤标志物、癌组织中高迁移率族蛋白(HMG)A2表达的影响及意义.方法 选择手术治疗的子宫内膜增生患者20例为对照组、术前未接受化疗的子宫内膜癌患者44例为实验1组、术前接受化疗的子宫内膜癌患者49例为实验2组,采用酶联免疫吸附试验法和免疫组织化学法检测三组血清肿瘤标志物水平及癌组织中HMGA2的蛋白阳性表达强度.结果 ①血清肿瘤标志物水平:术前实验1、2组明显高于对照组,且实验1组明显高于实验2组,各组间差异有统计学意义(均P<0.01);术后7 d实验1、2组明显高于对照组,且实验1组明显高于实验2组,各组间差异有统计学意义(均P<0.01).②HMGA2蛋白阳性表达强度:实验1组>实验2组>对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 术前肿瘤在血供未破坏之前化疗干预能更好地遏制肿瘤病灶侵袭、转移且预后好,这一作用可能与降低患者血清中肿瘤标志物水平及癌组织中HMGA2的蛋白阳性表达强度有关.
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新型分子标记物对甲状腺滤泡型肿瘤良恶性的鉴别诊断
收集29例甲状腺结节组织标本,提取总RNA,分别进行RT-PCR在核酸水平上检测所取甲状腺组织中4种目的基因C1orf24、DDIT3、HMGA2、TFF3的表达水平.与正常甲状腺组织相比,C1orf24 mRNA在滤状腺瘤中的表达下调,在滤泡状癌中的表达上调;DDIT3和HMGA2 mRNA在滤泡状腺瘤和滤泡状癌中的表达均上调,且在滤泡状癌中的表达高于滤泡状腺瘤;TFF3 mRNA在滤泡状癌和滤泡状腺瘤中均下调.甲状腺肿瘤组织中C1orf24、DDIT3、HMGA2、TFF3对甲状腺滤泡状癌和滤泡状腺瘤的鉴别有一定价值.
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miR-204过表达抑制成视网膜细胞瘤细胞的增殖与侵袭及其可能的机制
目的:观察miR-204对成视网膜细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞增殖与侵袭的影响,探讨其可能的调控机制.方法:应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RB细胞系Y79、SO-RB50、HXO-Rb44和人正常视网膜色素上皮细胞系hTERTRPE-1中miR-204的表达水平.将Y79细胞系分成阴性对照组和miR-204组,分别应用脂质体转染法转染NC-mimics和miR-204 mimics,CCK-8增殖实验检测miR-204表达对Y79细胞增殖的影响,细胞划痕实验和Transwell小室法检测miR-204对Y79细胞迁移和侵袭的影响,应用生物学信息法预测miR-204的可能作用靶基因,应用qRT-PCR和Western blotting检测miR-204对靶基因高迁移率族蛋白A2(high mobility group AT-hook 2,HMGA2) mRNA和蛋白表达的影响.结果:miR-204在RB细胞系Y79、SO-RB50、HXO-Rb44中的表达较人正常视网膜色素上皮细胞系hTERTRPE-1明显降低(P＜0.01).转染miR-204 mimics后,Y79细胞中miR-204表达明显升高(P＜0.01)、细胞增殖能力明显下降(P＜0.01)、迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.01),miR-204的靶基因HM-GA2 mRNA和蛋白的表达明显下降(P＜0.01).结论:miR-204在RB细胞系中低表达,过表达miR-204能够抑制RB细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与下调HMGA2基因的表达有关.
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高迁移率族蛋白A2和基质金属蛋白酶-11在乳腺癌组织中的表达与预后的关系
目的 探讨高迁移率族蛋白A2 (high mobility group AT-hook 2,HMGA2)和基质金属蛋白酶-11(matrix metalloproteinase-1,MMP-11)在乳腺癌组织中的表达及意义.方法 收集173例女性乳腺癌患者的临床病理资料,采用免疫组织化学法,对乳腺癌组织和癌旁组织中的HMGA2和MMP-11进行检测,分析两者表达与乳腺癌病理参数之间的关系,并评价两者表达与乳腺癌预后的关系.结果 乳腺癌组织中HMGA2和MMP-11阳性表达率分别为74.6％(129/173)、59.0％(102/173),明显高于癌旁组织(P＜0.001);HMGA2阳性表达与患者年龄＞40岁(P=0.044)、绝经后(P=0.046)、组织学分级Ⅲ级(P=0.024)、腋窝淋巴结转移(P＜0.001)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)阴性表达(P=0.017)、HER-2阳性表达(P＜0.001)和TNM分期Ⅲ～Ⅳ期(P=0.013)显著相关;MMP-11阳性表达与腋窝淋巴结转移(P=0.001)、ER阴性表达(P＜0.001)、HER-2阳性表达(P=0.021)和TNM分期Ⅲ～Ⅳ期(P=0.001)显著相关;HMGA2阳性表达与MMP-11阳性表达呈正相关(r=0.772,P＜0.01).单因素分析显示,HMGA2和MMP-11表达阳性者的无病生存时间(disease free survival,DFS)和总生存时间(overall survival,OS)均较HMGA2和/或MMP-11表达阴性组差(DFS:P=0.001;OS:P＜0.001).多因素Cox分析表明,HMGA2(P=0.002)和MMP-11(P=0.022)是影响乳腺癌患者DFS的独立预后因素;HMGA2情况是影响乳腺癌患者OS的独立预后因素(P=0.001).结论 HMGA2和MMP-11在乳腺癌组织中表达上调并存在相关性,HMGA2和MMP-11表达阳性提示患者预后不良,两者可能成为潜在的判断乳腺癌预后的分子标志物.
关键词： 乳腺癌 高迁移率族蛋白A2 基质金属蛋白酶-11 预后 -
HMGA2在结肠癌组织中的表达及意义
目的 探讨高迁移率族蛋白A2(high mobility group AT-hook 2,HMGA2)在结肠癌组织的表达及意义.方法 选取2011年5月至2012年12月接受手术治疗的114例结肠癌患者,采用免疫组化法检测114例结肠癌组织及45例癌旁组织中HMGA2的表达,分析其与临床病理参数及患者生存预后的关系.结果 在114例结肠癌组织中,HMGA2阳性表达率(89.5％,102/114)明显高于癌旁组织(6.7％,3/45) (P ＜0.001);HMGA2表达与结肠癌患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤浸润深度无相关性(P＞0.05),与组织学分级(P＜0.001)、淋巴结转移(P＜0.001)、远处转移(P＜0.001)和TNM分期(P=0.014)相关.HMGA2低表达组总体生存率(75.0％)高于HMGA2高表达组(44.6％)(X2=5.736,P=0.017).结论 HMGA2可能在结肠癌发生发展过程中起到重要作用,它与结肠癌的侵袭、转移和预后相关,HMGA2的表达检测可作为判断结肠癌患者预后的一种方法.
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高迁移率族蛋白A2在子宫平滑肌瘤中的表达及其临床意义
子宫平滑肌瘤是妇科临床上常见的女性良性肿瘤,常可合并月经紊乱、经量增多等严重临床症状而影响患者的身体健康[1],其发病率在30岁以上的妇女中可达70％以上.目前,子宫平滑肌瘤的发病机制尚不完全清楚.高迁移率族蛋白A2(HMGA2)是高迁移率族蛋白的家族成员之一,是高等真核生物细胞核中的一组与染色体结合的非组蛋白.目前研究[3-4]结果表明,HM-GA2在正常成熟组织中几乎无表达,但在肺癌、甲状腺癌及卵巢癌等多种肿瘤中高度表达,认为HMGA2蛋白可调节基因的转录,影响细胞的增生、分化和凋亡等过程,从而影响肿瘤的发生发展.本研究通过检测HMGA2在子宫平滑肌瘤及正常平滑肌组织中的表达水平,探讨其在子宫平滑肌瘤发生发展中的作用,现报告如下.
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肝细胞癌组织中HMGA2表达及其临床意义
目的 探讨肝细胞癌(HCC)组织中高迁移率族蛋白A2 (HMGA2)的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法 收集本院2011年1月至2012年12月经手术切除的120例HCC组织、癌旁组织和正常肝组织,采用免疫组化SP法检测以上组织中的HMGA2表达情况,分析HMGA2表达与HCC临床病理特征(性别、年龄、分化程度、TNM分期、肝门淋巴结转移、癌灶数量、肿瘤大小和肝内转移)的关系,根据随访资料分析不同HMGA2表达HCC患者的预后情况.结果 HMGA2阳性表达在细胞核中呈棕黄色或棕褐色.HCC组织中HMGA2阳性率为64.17％(77/120),高于癌旁组织的8.34％(10/120)和正常组织的4.17％(5/120),差异有统计学意义(P＜0.05);癌旁组织和正常组织HMGA2阳性率的差异无统计学意义(P＞0.05).HMGA2表达与HCC分化程度、TNM分期、肝门淋巴结转移、癌灶数量、肿瘤大小和肝内转移有关(P＜0.05),与性别和年龄均无关(P＞0.05).HMGA2阳性者的中位总生存期(0S)为13.5个月,阴性者的中位OS＞60.0个月,HMGA2阴性者的中位OS长于阳性者(P＜0.05);HMGA2表达、TNM分期、肝内转移、肝门淋巴结转移、癌灶数量、肿瘤大小和分化程度与HCC患者的OS有关(P＜0.05).经Cox回归模型进行多因素分析显示HMGA2阳性表达是影响HCC预后的独立危险因素(HR=2.516,95％CI:1.643～3.855).结论 HCC组织内HMGA2蛋白表达升高,且参与HCC的发生发展,HMGA2阳性表达者的预后较差,该蛋白可能作为一个评估HCC预后的潜在指标.
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siRNA下调高迁移率族蛋白 A2表达对前列腺癌细胞增殖凋亡的影响
目的：观察小干扰RNA（siRNA）靶向下调高迁移率族蛋白A2（HMGA2）基因表达对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡能力的影响。方法采用脂质体LipofectamineTM 2000将HMGA2‐siRNA（siRNA组）和阴性对照siRNA（阴性对照组）分别转染至DU145细胞中；空白组无特殊处理。采用RT‐PCR及Western blot 法分别检测 HMGA2 mRNA 和蛋白的表达；细胞增殖‐毒性检测（CCK‐8）法检测DU145细胞的增殖；流式细胞术检测细胞凋亡。结果 siRNA组 HMGA2 mRNA的相对表达量为0.562±0.067，低于阴性对照组的0.858±0.043和空白组的0.876±0.041（P＜0．05）。siRNA组细胞的增殖能力也低于其他两组（P＜0．05）。转染后48 h ，siRNA组DU145细胞的凋亡率为（14.180±0.395）％，高于阴性对照组的（8.267±0.379）％和空白组的（7.513±0.476）％（P＜0．05）。结论 HMGA2基因特异性siRNA可抑制DU145细胞增殖，促进细胞凋亡。
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高迁移率族蛋白A2在肿瘤发生和血管形成中的双重作用
目的:探讨高迁移率族蛋白A2(HMGA2)在肿瘤发生和血管形成中的作用.方法:采用Clontech公司软件设计靶向人HMGA2基因的5条小干扰RNA(siRNA)序列,常规培养肿瘤细胞系和血管内皮细胞系,利用脂质体2000将HMGA2 siRNA导入细胞,通过MTT方法和Transwell模型检测细胞的增殖和迁移能力,采用小管形成实验检测血管内皮细胞的小管形成能力,荧光定量PCR方法检测细胞内的HMGA2 mRNA的变化.结果:5条siRNA中,HMGA2 siRNA1、3、5不但能抑制肿瘤细胞的增殖,还可抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和小管形成,尤其以HMGA2 siRNA5为明显,处理组细胞的相对增长率分别为:Hela 63.2％±6.5％(P＜0.01)；人肺腺癌SPC-A1,86.8％±3.5％(P＜0.01)；人脐静脉内皮细胞(ECV-304),58.5％±6.3％(P＜0.01)；人膀胱上皮细胞株(HUVEC),60.3％±7.3％(P＜0.01).HMGA2 siRNA5抑制两种血管内皮细胞的迁移(P＜0.01),并降低HMGA2基因的表达(P＜0.01).结论:HMGA2除了在肿瘤发生过程中起作用之外,在血管形成中同样具有重要作用.
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基于EPOR、HMGA2表达变化探讨康莱特防治进展期胃癌的临床研究
目的:观察胃癌患者治疗前后Karnofsky评分以及EPOR、HMGA2表达变化,探讨康莱特注射液防治胃癌的机制研究.方法:48例符合诊断标准、纳入标准、排除标准的胃癌患者按就诊顺序1∶1分为对照组与治疗组.对照组给予化疗药物治疗,治疗组给予康莱待注射液联合化疗药物治疗,两组均治疗2个疗程.应用Karnofsky评分记录两组患者治疗前后生活质量积分变化,应用免疫组化技术检测两组治疗前后EPOR、HMGA2表达变化.结果:全部病例完成临床观察,治疗组完全缓解0例、部分缓解8例、稳定10例、进展6例,总有效率为75.0％;对照组完全缓解0例、部分缓解7例、稳定8例、进展9例,总有效率为62.5％:两组总有效率比较差异有统计学意义(P＜0.05).治疗前,两组患者Karnofsky评分比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后治疗组Karnofsky评分高于对照组,且治疗8周后两组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).治疗组EPOR、HMGA2表达水平呈下降趋势,较治疗前差异有统计学意义.对照组EPOR、HMGA2表达水平较治疗前无明显变化.结论:康莱特注射液可能通过调控EPOR、HMGA2表达水平,提高患者生存质量,有效缓解其临床症状.
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稳定表达HMGA2的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231构建
目的 构建人乳腺癌MDA-MB-231细胞人类高迁移率族蛋白A2(HMGA2)稳定表达株.方法 取对数生长期MDA-MB-231细胞,提取细胞总RNA,逆转录含HMGA2基因的cDNA;以cDNA为模板,根据其CDS序列设计含有EcoR1、BamH1限制性内切酶位点的引物序列,采用PCR法扩增出带有双酶切位点的HMGA2目的基因;采用双酶切法将目的片段连接到慢病毒表达质粒pLVX-IRES-Puro中,获得重组的pLVX-HMGA2表达载体.pLVX-HMGA2表达载体、包装质粒共转染人肾上皮细胞系293T,提取携带HMGA2的重组慢病毒.采用菌液PCR、重组质粒双酶切、质粒PCR验证及测序比对鉴定获得的重组质粒.取适量对数生长期MDA-MB-231细胞,分为两组,观察组、对照组分别感染重组慢病毒Plv-HMGA2、空载慢病毒Plv-Vector,感染48 h加入1μg/mL嘌呤霉素筛选.分别采用实时荧光定量PCR法、Western blotting法检测细胞HMGA2 mRNA、蛋白.结果 观察组、对照组细胞HMGA2 mRNA相对表达量分别为10273.93±4290.77和1.18±0.81,二者比较,P<0.05.观察组、对照组细胞HMGA2蛋白相对表达量分别为1.570±0.080和0.110±0.002,二者比较,P<0.05.结论 成功构建MDA-MB-231细胞HMGA2稳定表达株.
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miR-495在骨肉瘤细胞中表达变化、对MG-63细胞增殖的影响及其机制
目的 观察miR-495在骨肉瘤细胞中的表达变化及其对骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响,并探讨可能的分子机制.方法 采用real-time PCR法检测人骨肉瘤细胞系Saos-2、U20S、MG-63及人成骨细胞hFOB1.19中的miR-495.将MG-63细胞分为阴性对照组、miR-495 mimics组、miR-495 mimics+HMGA2组,分别转染mimics-NC、miR-495 mimics、miR-495 mimics+HMGA2表达质粒,转染24、48、72、96 h后,采用CCK-8法检测MG-63细胞增殖能力.应用靶基因在线预测数据库miRanda并结合基因的功能分析进行miR-495的靶基因预测.采用双荧光素酶报告实验验证miR-495与靶基因的结合位点.采用Western blotting法验证miR-495对高迁移率族蛋白A2(HMGA2)表达的靶向调控作用.结果 Saos-2、MG-63、U20S细胞中miR-495的相对表达量低于hFOB1.19细胞(P均<0.01).转染48、72、96 h后miR-495 mimics组MG-63细胞OD值低于阴性对照组组,miR-495 mimics+HMGA2组MG-63细胞OD值高于miR-495 mimics组(P均<0.01).双荧光素酶报告实验结果提示miR-495可与HMGA2的3′UTR区特异性结合,从而显著抑制荧光素酶活性.miR-495 mimics组MG-63细胞中HMGA2蛋白的相对表达量低于mimics-NC组,miR-495 mimics+HMGA2组MG-63细胞中HMGA2蛋白的相对表达量高于miR-495 mimics组(P均<0.01).结论 骨肉瘤细胞中miR-495的表达水平低于正常成骨细胞;上调miR-495表达后骨肉瘤细胞增殖受到抑制;miR-495可能通过靶向调控HMGA2表达从而抑制骨肉瘤细胞的增殖.
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胆管癌组织中HMGA2的表达变化及意义
目的 探讨HMGA2蛋白在胆管癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学EnVision法检测71例胆管癌组织及20例正常胆管组织中HMGA2蛋白表达,分析HMGA2表达与胆管癌临床病理特征及生存预后的关系.结果 胆管癌组织及正常胆管组织中HMGA2蛋白的阳性表达率分别为64.8％、15％(P＜0.05).中-低分化腺癌、淋巴结转移、Ⅲ～Ⅳ期的病例HMGA2阳性表达率明显高于高分化、无淋巴结转移及Ⅰ～Ⅱ期病例(P ＜0.05或P＜0.01)；Kaplan-meier生存分析发现HMGA2阳性表达患者生存期明显低于HMGA2阴性表达患者(P＜0.01).Cox多因素分析显示,HMGA2表达情况、肿瘤手术切除以及肿瘤TNM分期是胆管癌患者独立的预后因子.结论 HMGA2表达与胆管癌发生、临床生物学行为及生存预后有密切关系.
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抑制高迁移率族蛋白A2对肾癌细胞侵袭转移能力的影响
目的 观察小干扰 RNA(siRNA)抑制高迁移率族蛋白 A2(HMGA2)基因表达对人肾癌细胞系786-O 迁移、侵袭能力的影响.方法 人肾癌细胞系786-O 扩大培养后分为3组:空白对照组(Ctrl组)、阴性对照组(NC 组)和 siHMGA2组.NC 组、siHMGA2组分别转染阴性对照siRNA和 HMGA2 siRNA,Ctrl组常规培养.采用反转录聚合酶链反应和 Western 免疫印迹法检测转染后 HMGA2 mRNA和蛋白的表达;Western免疫印迹法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白钙粘蛋白 E和波形蛋白的表达;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 siHMGA2组 HMGA2 mRNA和蛋白表达水平较 Ctrl 组和 NC组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);siHMGA2组钙粘蛋白 E表达水平较 Ctrl 组、NC组明显升高,波形蛋白表达水平较后两组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);siHMGA2组细胞迁移能力较Ctrl组显著降低,siHMGA2组细胞侵袭能力较 Ctrl 组及 NC组显著降低.结论 抑制 HMGA2的表达可抑制肾癌细胞系786-O 细胞的迁移和侵袭能力,其作用可能是通过抑制 EMT实现的.
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高迁移率族蛋白A2过表达对大鼠垂体瘤细胞增殖及周期的影响
目的 观察高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因过表达对大鼠垂体瘤细胞增殖及周期的影响.方法 制备携带HMGA2基因的质粒(pIRES2-dsRed-HMGA2 cDNA),转染至大鼠GH3细胞.通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内HMGA2 mRNA表达的变化,Western blot检测pIRES2-dsRed-HMGA2 cDNA转染大鼠GH3细胞后HMGA2蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验检测HMGA2基因过表达对大鼠GH3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测HMGA2基因过表达对大鼠GH3细胞周期的影响.结果 pIRES2-dsRed-HMGA2cDNA转染大鼠GH3细胞24 h后HMGA2 mRNA和蛋白表达水平分别高于对照组的26.40％和36.60％,差异有统计学意义(P＜0.05),与对照组比较实验组细胞在24、48、72、96 h增殖数量增加(P＜0.05);流式细胞仪分析显示,实验组的Go/G1期细胞百分率较对照组明显减少[(43.15±0.63)％比(65.33-±0.37)％],而S期较对照组明显增加[(39.57±0.65)％比(18.26±0.54)％,P＜0.05].结论 HMGA2基因过表达促进大鼠垂体瘤细胞增殖,改变细胞正常周期.
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下调高迁移率族蛋白A2表达对前列腺癌细胞迁移侵袭能力的影响
目的 观察小干扰RNA(siRNA)靶向下调高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因表达对人雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞迁移、侵袭能力的影响.方法 人前列腺癌PC3细胞培养后分为3组:小干扰(siRNA)组、阴性对照(NC)组通过LipofectaminTM2000分别将HMGA2 siRNA、阴性对照siRNA转染到细胞,空白组(Blank)常规培养;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Westernblot法分别检测HMGA2 mRNA和蛋白的表达;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力的变化;Westem blot法检测转染后上皮-间充质转化(EMT)相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达变化.结果 siRNA组HMGA2 mRNA的相对表达量(0.561±0.087)较Blank组(0.932±0.037)、NC组(0.892±0.035)显著下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).siRNA组HMGA2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平较Blank组、NC组明显降低,siRNA组E-cadherin蛋白表达水平较后两组显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).Transwell实验结果表明,siRNA组细胞的迁移和侵袭能力较后两组明显减弱(P＜0.05).结论 下调HMGA2的表达能够抑制前列腺癌PC3细胞的HMGA2基因mRNA及蛋白的表达,并能降低细胞迁移及侵袭能力,其作用机制可能是通过影响EMT实现的.
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干扰HMGA2基因表达抑制HL60细胞的增殖及浸润
目的:探索干扰高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2,HMGA2)基因的表达对HL-60白血病细胞体外增殖、浸润的影响.方法:实验分为3组,实验组为稳定转染慢病毒干扰HMGA2基因表达载体的HL-60细胞;阴性对照组为稳定转染慢病毒空载体HL-60细胞;空白对照组为未转染的HL60细胞.3组分别接种BALB/c裸鼠建立种植瘤模型,检测接种后各个时间点裸鼠外周血和骨髓中白血病细胞的比例(肿瘤负荷)、生活质量,计算接种40 d后各组小鼠的肝脾指数.结果:RT-PCR及Western印迹证明干扰RNA慢病毒表达载体可明显降低HL-60细胞靶基因的表达.接种后骨髓涂片结果显示裸鼠白血病模型成功建立.接种后21,28,40 d,实验组HL-60细胞在小鼠外周血和骨髓中的比例均明显低于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其白血病细胞比例随接种时间延长而增加的速度亦明显变缓;且实验组小鼠萎糜少动、腹部膨隆、皮下结节等并发症出现时间明显较空白对照组及阴性对照组延迟;接种40 d后实验组小鼠肝脾指数分别为66.76±5.56和20.57±0.75,均明显低于其余两组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:干扰HMGA2基因表达,可明显抑制HL60白血病细胞在小鼠体内增殖、浸润.
