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结直肠腺瘤-腺癌发展序列中差异表达miRNAs的筛选及初步验证
目的 筛选及初步验证结直肠腺瘤-腺癌发展序列中差异表达的miRNA,初步探索其可能机制.方法 MicroRNA芯片检测15例结直肠腺瘤患者、3例结直肠早癌患者和3例健康对照者血清中差异表达的miRNA.在18例结直肠腺瘤,9例结直肠早癌,5例进展期癌及5例正常对照者中用实时荧光定量PCR进行初步验证.结果 早癌组与腺瘤组比较,差异表达的miRNA有15个;早癌组与正常组比较,差异表达的miRNA有13个.选择miR-204、miR-193b与miR-150进行初步验证.进展期癌组血清miR-150表达显著低于正常对照组(P＜0.05);早癌组、进展期癌组血清miR-204表达均显著低于正常对照组(分别为P＜0.05,P＜0.01).腺瘤组、早癌组和进展期癌组血清miR-193b表达均显著低于正常对照组(分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.05).miR-193b mimic转染HCT116细胞后显著抑制其增殖(P＜0.05),促进其凋亡(P ＜0.001).并可显著抑制K-ras与β-catenin蛋白的表达水平.结论 血清miR-204与miR-193b可能成为诊断结直肠癌的生物标志物,miR-193b可能在腺瘤-腺癌序列中发挥抑癌作用.
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Mir-204靶向调控Bcl-2影响卵巢癌细胞增殖和凋亡的相关机制研究
目的 通过体外实验探索上调miRNA-204表达对卵巢癌细胞株SKOV-3增殖、凋亡的影响,阐明miR-204在卵巢癌中的作用机制.方法 采用Mimics转染的方法,构建过表达miR-204的SKOV-3细胞株和空载对照组细胞株,实验共分为三组:正常对照组、过表达组和空白载体组,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测各组细胞miRNA-204表达水平的变化.采用CCK-8实验和流式细胞仪分别检测各组细胞的增殖和凋亡情况.通过Targetscan靶基因预测网站,筛选Bcl-2作为miR-204的靶向蛋白,采用蛋白印迹法(Western Blot)和双荧光素酶靶标实验验证.采用ANOVA和S-N-K检验分析三组及两两间统计学差异.结果 与正常对照组相比,过表达组细胞miRNA-204的表达显著增加(P＜0.01),细胞存活率显著降低(P＜0.05),相对荧光强度明显降低(P＜0.01),Bcl-2的蛋白表达水平显著下降(P＜0.01);过表达组与空白载体组差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-204高表达能明显抑制卵巢癌细胞的生长增殖、诱导凋亡,其可能的机制与Bcl-2参与促进细胞生长增殖、诱导细胞凋亡相关.
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miR-204对癫痫神经元中BDNF/TrkB信号通路的影响
目的：研究海马神经元癫痫模型中转染miR-204后对脑源性神经营养因子（BDNF）与TrkB通路调控作用的影响。方法取原代培养7 d后的细胞，分为正常组、正常+BDNF组、癫痫组、癫痫+BDNF组、正常转染miR-204组、癫痫转染miR-204组、癫痫转染miR-204+BDNF组。癫痫组用无镁液处理3 h制作癫痫模型。制备成功miR-204慢病毒表达载体。采用免疫荧光、膜片钳及免疫印迹技术鉴定及观察miR-204对BDNF/TrkB通路表达的影响。结果 TrkB蛋白的磷酸化水平：正常+BDNF组高于正常组；癫痫+BDNF组低于正常+BDNF组，高于癫痫组；癫痫+miR-204+BDNF组高于癫痫+BDNF组和癫痫+miR-204组。结论BDNF及miR-204可以改善BDNF/TrkB受抑制的状态，从而在癫痫疾病的缓解中可能发挥重要作用。
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miR-204调控Bcl-2家族在年龄相关性白内障发病过程中机制研究
目的 探讨miR-204靶向调控Bcl-2家族的机制及其在年龄相关性白内障发病过程中的作用.方法 临床实验研究.于2014年10～12月在中国医科大学附属第四医院眼科,收集年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜标本36例为实验组,选取新鲜人眼透明晶状体前囊膜标本12例为对照组.利用生物信息学软件,预测miR-204可能调控的Bcl-2家族关键基因;应用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和正常人眼晶状体前囊膜间miR-204及其预测靶基因的表达;利用Lipofectamine 2000瞬时转染miR-204 mimic和inhihitor,分别上调和下调人晶状体上皮细胞中miR-204的表达,利用Real time q-PCR方法验证转染效率,并检测预测靶基因的表达变化.结果 3种不同的生物信息学软件预测到Bcl-2家族中bcl-2、mcl-1可能为miR-204的靶基因.与对照组相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组,miR-204的表达显著升高,bcl-2、mcl-1的表达显著降低.miR-204 mimic转染组,miR-204的表达显著升高,bcl-2、mcl-1的表达显著降低;miR-204 in-hibitor转染组,miR-204的表达显著降低,bcl-2、mcl-1的表达显著升高.差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 miR-204在年龄相关性白内障晶状体组织中呈高表达,miR-204可能通过靶向调控Bcl-2家族成员bcl-2、mcl-1的表达,在年龄相关性白内障发病过程中发挥重要角色,miR-204可能成为白内障非手术治疗的新靶点.
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miR-204对人晶状体上皮细胞移行的影响
目的 探讨经体外转染携带有miR-204的重组腺病毒ADV-miR-204对人晶状体上皮细胞移行的影响.方法 ADV-miR-204在293细胞中扩增、分离纯化并滴定病毒滴度;ADV-miR-204体外转染人晶体上皮细胞HLE-B3,细胞划痕法测定ADV-miR-204对HLE-B3移行的影响.结果 测定ADV-miR-204的病毒滴度为1.5×109 pfu/mL;ADV-miR-204以MOI为10、50、100、200、500分别感染HLE-B372 h后,细胞移行愈合率随着ADV-miR-204的感染浓度增加而降低,MOI=100组与MOI=50组、MOI=10组相比差异显著(P＜0.05).而在MOI=100、MOI=200、MOI=500实验组组间差异不明显.同一感染浓度(MOI=100),不同时间点(0 ～72 h)下感染组细胞移行愈合率与正常细胞组比较均明显降低(P＜0.05).结论 ADV-miR-204可成功转染人晶体上皮细胞,并可减缓细胞的移行.
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miR-204过表达抑制成视网膜细胞瘤细胞的增殖与侵袭及其可能的机制
目的:观察miR-204对成视网膜细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞增殖与侵袭的影响,探讨其可能的调控机制.方法:应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RB细胞系Y79、SO-RB50、HXO-Rb44和人正常视网膜色素上皮细胞系hTERTRPE-1中miR-204的表达水平.将Y79细胞系分成阴性对照组和miR-204组,分别应用脂质体转染法转染NC-mimics和miR-204 mimics,CCK-8增殖实验检测miR-204表达对Y79细胞增殖的影响,细胞划痕实验和Transwell小室法检测miR-204对Y79细胞迁移和侵袭的影响,应用生物学信息法预测miR-204的可能作用靶基因,应用qRT-PCR和Western blotting检测miR-204对靶基因高迁移率族蛋白A2(high mobility group AT-hook 2,HMGA2) mRNA和蛋白表达的影响.结果:miR-204在RB细胞系Y79、SO-RB50、HXO-Rb44中的表达较人正常视网膜色素上皮细胞系hTERTRPE-1明显降低(P＜0.01).转染miR-204 mimics后,Y79细胞中miR-204表达明显升高(P＜0.01)、细胞增殖能力明显下降(P＜0.01)、迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.01),miR-204的靶基因HM-GA2 mRNA和蛋白的表达明显下降(P＜0.01).结论:miR-204在RB细胞系中低表达,过表达miR-204能够抑制RB细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与下调HMGA2基因的表达有关.
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microRNA-204抑制强直性脊柱炎成纤维细胞成骨分化
目的 探讨microRNA-204(miR-204)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)成纤维细胞中的表达及其对BMP-2和TGF-β1诱导的成骨分化的功能及其可能的作用机制.方法 收集5例骨AS和5例非AS的髋关节囊组织;采用原代细胞培养方法分离培养成纤维细胞;细胞实验分为4组,分别为正常对照组、AS对照组、AS+ miRNA-NC组和AS+ miR-204组;除了正常对照组和AS对照组外,AS+ miRNA-NC组、AS+ miR-204组的培养基中分别加入7 ng/ml的BMP-2和5 ng/ml的TGF-β1;miRNA-NC和miR-204 mimics采用脂质体Lipofectamine 2000进行转染;实时荧光定量PCR法检测miR-204、Ⅰ型胶原(c0l-lagen type Ⅰ,Col Ⅰ)、骨钙素(osteopontin,OPN)和核心结合蛋白因子2(Runx2) mRNA的表达水平;Western blot法检测Runx2 蛋白表达水平;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性;双荧光素酶报告基因检测miR-204与Runx2的靶向调控关系.结果 miR-204在AS来源的成纤维细胞及BMP-2和TGF-β1处理的细胞中表达降低.过表达miR-204可以显著抑制BMP-2和TGF-β1诱导的ALP活性增高,Col Ⅰ和OPN的表达水平上升.另外,miR-204可以靶向调控Runx2,并且抑制Runx2的表达水平.结论 miR-204与AS成纤维细胞成骨分化密切相关,其可以通过靶向调控Runx2的表达来调节成纤维细胞的骨化,为AS的治疗提供潜在的治疗靶点.
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葛根素对成骨细胞增殖能力及靶向Runx2的miRNA的影响
目的研究葛根素作用成骨细胞MC3T3-E1后对细胞的增殖能力和靶向Runx2基因的miRNA的影响。方法①MTT法检测葛根素作用于MC3T3-E1细胞后对成骨细胞增殖能力的影响。②碱性磷酸酶活性检测葛根素对于成骨细胞活力影响。③葛根素作用于成骨细胞后,采用荧光实时定量 PCR ( Q-PCR )和蛋白印迹法( Western blot )法检测Runx2的mRNA表达水平和蛋白表达水平。④采用Target Scan、PicTar等靶点预测软件预测靶向Runx2的miRNA,并与表达谱测定的葛根素作用MC3T3-E1前后miRNA变化作比较。⑤采用Q-PCR法验证葛根素作用MC3T3-E1前后靶向Runx2基因的miRNA表达量。⑥构建Runx23′UTR/突变型Runx23′UTR重组质粒、合成 miRNA-204mimics、miR-NA-204inhibitor、miRNA-204NC共转染MC3T3-E1细胞,用双荧光素酶报告基因系统验证Runx2与miRNA-204的靶向关系。结果葛根素作用后,与空白对照组比较,细胞增殖活性提高,Runx2的 mRNA和蛋白表达水平上升, miRNA-204和miRNA-344f-5p表达水平下降,miRNA-2861表达水平上升, miRNA-23a-5p、miRNA-770-5p、miRNA-871-5p 表达水平无明显改变。细胞转染48h后,只有Runx23′UTR+miRNA-204 mimics组荧光素蛋白的表达水平明显降低,说明只有miRNA-204可抑制Runx23′UTR报告基因的表达。结论葛根素可促进成骨细胞增殖,并通过下调靶向 Runx2的miRNA的表达来提高Runx2表达水平。
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调控人脑胶质瘤中ezrin表达的miRNAs筛选及鉴定
目的:探讨调控人脑胶质瘤中ezrin的miRNAs筛选及鉴定.方法:针对ezrin的测序序列,在线使用TargetScan、PI-TA、MicroRNA.org、miRGator v2.0、miRDB等5种生物信息学软件预测分析可能调控ezrin的miRNA分子,运用荧光素酶报告载体实验检测筛选候选miRNA分子,RT-PCR检测11例胶质瘤组织和10例正常组织中候选miRNA分子mRNA的表达.结果:5种生物信息学软件预测出819个可能调控ezrin的miRNAs,根据评分结果同时结合目前国内外研究成果筛选出miR-148a、-204、-205、-34b、-370、-376b、-377、-410、-495、-548a-3p、-630和-96等12个miRNAs.双荧光素酶质粒与ezrin 3′-UTR作用位点突变体实验,证实hsa-miR-204与相应作用位点突变体EZR 204 Mutant无明显作用(P>0.05),RT-PCR结果显示miR-204在脑胶质瘤组织中的表达低于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.01).结论:胶质瘤组织中miR-204可通过靶向调控ezrin表达发挥生物学作用.
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MiR-204降调Caveolin-1表达降低HRGECs对大分子蛋白的通透性
目的:探讨miR-204对肾小球内皮细胞(HRGECs)通透性及Caveolin-1(CAV1)表达的影响.方法:利用生物信息学方法预测以CAV1为靶基因的miRNA,miR-204为CAV1表达的调节miRNA.分别用子痫前期(PE)患者血清和正常血清处理HRGECs,qPCR法检测miR-204表达水平.将体外培养肾小球内皮细胞(HRGECs)分为4组:过表达组(转染miR-204 mimic),降表达组(转染miR-204 inhibitor),转染miR-204 mimic NC(mimic阴性对照组)和转染miR-204 inhibitor NC(inhibitor阴性对照组).转染48h后,荧光定量PCR及Western blot法检测miR-204及CAV1 mRNA和蛋白表达水平,Evans-blue检测HRGECs单层细胞对大分子蛋白的通透性改变.结果:PE血清可抑制HRGEC中miR-204表达(P<0.05).荧光定量PCR和Western blot结果显示,与阴性对照组比较,miR-204过表达组中CAV1 mRNA表达量无明显差异,CAV1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);miR-204降表达组中CAV1 mRNA表达量无明显差异,CAV1蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).与阴性对照组比较,miR-204过表达组中HRGECs对大分子蛋白的通透性降低,miR-204降表达组中HRGECs对大分子蛋白的通透性提高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:miR-204可能通过抑制CAV1转录后翻译从而调节其靶基因CAV1表达,进而影响肾小球内皮细胞通透性,miR-204可能参与PE患者肾小球内皮细胞尿蛋白形成的调节.
关键词： miR-204 Caveolin-1 肾小球内皮细胞 屏障障碍 蛋白尿 -
食管鳞癌中miR-204、miR-205相关ceRNA网络构建及部分lncRNA功能分析
目的 用生物信息学方法预测食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中miR-204、miR-205相关竞争性内源RNA(ceRNA)网络.方法 通过TCGA数据库筛选癌及癌旁组织差异表达的mRNA、长链非编码RNA(lncRNA)和miRNA,构建miR-204、miR-205相关ceRNA网络,并对筛选出的差异基因进行生存分析,利用GO、KEGG和PPI进一步分相关lncRNA的功能.结果 以logFC>2且 P <0.05为标准,筛选出和 miR-204、miR-205相关差异表达 mRNA 13个,lncRNA 38个,并构建了lncRNA-miRNA-mRNA调控网络.LINC00504、FER1L6-AS1与亚洲人ESCC患者生存相关.GO、KEGG和PPI分析显示:7个同时调节miR-204、miR-205的lncRNA可能参与ESCC的形成和进展.结论 通过分析ESCC转录组测序数据,预测出以miR-204和miR-205为节点的调控网络,可能是ESCC重要的调控机制和诊疗靶点.
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MiR-204对角膜上皮细胞增生的抑制作用
背景 作为人角膜上皮组织的主要细胞成分,角膜上皮细胞通过迁移、增生以及分化等生物学行为在角膜上皮组织的损伤修复中发挥重要作用.微小RNA(miRNA)是内源性表达的单链非编码RNA,参与多种生物活动的调控过程,研究报道miR-204在正常角膜上皮组织内呈高表达,但其生物学功能仍不清楚.目的 研究miR-204对角膜上皮细胞增生的调控及其分子机制.方法 收集角膜屈光手术过程中患者脱落的角膜上皮组织,同时体外培养人角膜上皮细胞株(HCECs).采用实时荧光定量PCR技术分别检测角膜上皮组织和HCECs中miR-204的表达情况.将培养的HCECs分为3个组,分别用含miR-204 mimic的脂质体或空脂质体转染到HCECs内作为miR-204 mimic转染组和阳性对照组,正常培养的细胞作为正常对照组.用平板克隆形成试验检测各组培养细胞的克隆数以评价细胞的增生能力;采用流式细胞仪检测不同细胞周期的细胞百分比;采用Western blot技术检测各组细胞中磷酸化细胞内细胞周期相关蛋白p-RB、转录因子E2F1、p27、细胞周期蛋白CyclinA、细胞周期蛋白依赖性激酶CDC2、磷酸化CDC2 (p-CDC2)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2)的表达情况.结果 miR-204 mRNA在正常人角膜上皮组织中的相对表达量为1.077 ±0.268,明显高于HCECs中的0.041±0.018,差异有统计学意义(t=7.700,P＜0.001).平板克隆形成试验显示miR-204mimic转染组细胞克隆数明显少于阳性对照组和空白对照组.流式细胞仪检测结果显示,miR-204 mimic转染组G1期细胞百分比为47.75％,明显高于阳性对照组的37.23％和空白对照组的40.72％.Western blot检测表明,miR-204 mimic转染组细胞中CDK2和p-CDC2蛋白的相对表达量明显低于阳性对照组,E2F1和P27蛋白的相对表达量明显高于阳性对照组,差异均有统计学意义(t=5.39、10.65、14.87、25.11,均P＜0.01).结论 正常的角膜上皮组织中miR-204的高表达可能参与角膜上皮细胞的非增生状态的维持.miR-204可上调E2F1和p27蛋白在HCECs中的表达,抑制复合物CDK2/CyclinA和p-CDC2/CyclinA的形成,使角膜上皮细胞停滞在G1期,从而抑制角膜上皮细胞的增生.
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miR-204在非小细胞肺癌患者中的表达及其对SIRT1的靶向调控作用
目的 研究miR-204在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中表达的临床意义及其对SIRT1的靶向调控作用.方法 收集39例原发性NSCLC患者的癌组织和对应癌旁组织标本.实时荧光定量PCR检测组织标本中miR-204的表达水平;并分析其与NSCLC临床病理学特征的关系.将人非小细胞肺癌细胞株A549分别转染miR-204的模拟物或抑制物,CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,westem blot检测其潜在靶点基因SIRT1的表达.结果 癌组织中miR-204的表达量为(2.12±1.17),明显低于癌旁组织中的(3.08±1.46),P＜0.01.miR-204的表达水平与肿瘤的临床分期以及肿瘤大小有关(均P＜0.05),但与患者年龄、性别、吸烟史、分化程度、组织类型及淋巴转移情况无关(P＞0.05).A549细胞转染miR-204的抑制物后,细胞的增殖明显增强,SIRT1的表达上调;而转染miR-204模拟物则呈反向变化.结论 miR-204在NSCLC组织中呈低表达,并与患者的临床分期以及肿瘤大小有相关,其可能是通过靶向调控SIRT1而在NSCLC的发生发展中起重要作用.
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衰老心肌细胞缺氧后处理中miR-204的作用
目的 探索miR-204在衰老心肌细胞缺氧后处理中的作用.方法 经D-半乳糖诱导心肌细胞衰老后,随机分为对照组(ONC组)、缺氧复氧组(OAR组)、后处理组(OIPO组).采用ELISA法检测培养基中cTn-Ι的含量;微板法检测LDH的含量;XTT法检测细胞活性;荧光定量PCR法检测miR-204的mRNA表达,并确定miR-204与cTn-Ι、LDH的相关性.结果 与ONC组相比,OAR、OIPO组cTn-Ι、LDH的含量均增加(P<0.05,P<0.01);与OAR组相比,OIPO组cTn-Ι、LDH的含量无显著性改变.与ONC组相比,OAR、OIPO组miR-204的表达均降低(P<0.01);相关性分析显示miR-204与cTn-Ι、LDH呈现负相关.结论 缺氧后处理对缺氧复氧所致的衰老心肌细胞损伤的保护作用减弱与miR-204有关.
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miR-204对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨miR-204在人乳腺癌组织及MCF-7细胞中的表达水平及其对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 提取癌症和肿瘤基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中浸润性乳腺癌的miR-204相关数据进行汇总,转染miR-204过表达病毒,筛选稳定转染细胞株并通过RT-qPCR检测转染率,MTT法检测过表达miR-204后乳腺癌MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 miR-204在浸润性乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织明显下调(P＜0.001),且与淋巴结转移和远处转移相关(P＜0.05).过表达miR-204能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力(P＜0.05);miR-204上调后,细胞凋亡率达到(34.7±1.9)％,细胞凋亡能力明显增强(P＜0.001).结论 miR-204可抑制乳腺癌细胞增殖并介导细胞凋亡.
关键词： 乳腺肿瘤 miR-204 乳腺癌MCF-7细胞株 增殖 凋亡 -
miR-204对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学特性的影响
目的 研究microRNA-204(miR-204)对乳腺癌细胞生物学特性的影响.方法 在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中转染miR-204模拟物和抑制剂后48 h,实时荧光PCR(Real-time PCR)检测细胞中miR-204表达变化.流式细胞仪分析miR-204对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响.采用Transwell迁移小室分析法检测miR-204对MDA-MB-231细胞迁移的影响.结果 实时荧光PCR分析:miR-204模拟物和抑制剂效果显著,与正常对照比较差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞仪分析:与正常对照相比,miR-204 模拟物组G1期细胞数目明显减少(P<0.01),G2/M期细胞数目明显增多(P<0.01),而miR-204 抑制剂的作用则相反,G1期细胞数目明显增多(P<0.01),G2/M期细胞数目明显减少(P<0.01);miR-204模拟物组明显促进细胞凋亡(P<0.01),而抑制剂组明显抑制细胞凋亡(P<0.01).Transwell迁移小室分析:miR-204 模拟物组穿过Transwell迁移小室的细胞明显减少(P<0.01),而抑制剂组则相反,细胞数目明显增多(P<0.01).结论 miR-204对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有负调控作用,能够抑制乳腺癌细胞增殖和迁移,促进癌细胞凋亡.
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抑制 HPV18型 E7蛋白的表达对 Hela细胞生物学特性及 miR-204表达的影响
目的：通过小干扰RNA（ siRNA）抑制宫颈癌Hela细胞中人乳头瘤病毒（ HPV）18型E7的表达，研究E7蛋白对Hela细胞的生物学特性和miR-204表达的影响和关系，探索HPV致癌的分子机制。方法设计合成靶向HPV18型E7基因的siRNA，转染Hela细胞，抑制HPV18-E7的表达；采用RT-PCR和Western blot分别检测Hela细胞中HPV18-E7的mRNA和蛋白水平，用流式细胞术检测Hela细胞的细胞周期和凋亡，通过荧光实时定量PCR检测miR-204的表达水平。结果 pRNAT-HPVE7与两个对照组比较，明显抑制了Hela细胞HPV18-E7的mRNA（ t值分别为2．69、2．46，均P＜0．05）和蛋白（ t值分别为3．93、4．20，均P＜0．05）的表达，细胞周期趋于正常，凋亡率增高（t值分别为－6．87、－6．92，均P＜0．05），miR-204表达水平也明显升高（t值分别为0．26、0．22，均P＜0．05）。结论抑制HPV18-E7基因的表达能改变Hela细胞的生物学特性和上调miR-204表达。
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miR-204通过下调Bcl-2和Sirt1表达抑制肝癌细胞生长
目的 探讨微小RNA 204 (miR-204)在肝细胞癌中的表达、临床意义及可能分子机制.方法 收集手术切除的60例肝细胞癌及对应癌旁肝组织,实时定量PCR (qRT-PCR)检测miR-204在肝癌及癌旁组织中的表达,免疫组织化学染色检测miR-204下游潜在靶点Bcl-2与组蛋白脱乙酰酶1(Sirt1)的表达;用人工合成的miR-204模拟物转染人SMMC-7721肝癌细胞,MTT法及流式细胞术检测SMMC-7721细胞的增殖、凋亡的情况,qRT-PCR、Western blot法分别检测Bcl-2与Sirt1的mRNA和蛋白表达.结果 miR-204在肝癌组织中表达水平显著低于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-204低表达与肿瘤大小、肿瘤个数、肿瘤TNM分期显著相关;miR-204低表达组Bcl-2与Sirt1蛋白表达显著高于miR-204高表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-204与Bcl-2、Sirt1蛋白表达呈显著负相关;miR-204可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖并促进其凋亡,并下调Bcl-2与Sirt1的mRNA与蛋白表达水平.结论 miR-204在肝癌组织中表达下调并与肝癌恶性临床病理特征有关,miR-204抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用可能与下调Bcl-2和Sirt1表达有关.
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miR-204在卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞增殖、侵袭的影响
目的:探讨miR-204 在卵巢癌组织中的表达情况及其对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:RT-PCR法检测卵巢癌细胞 SKOV-3及卵巢正常上皮细胞IOSE80中 miR-204 的表达水平;CCK-8法检测侵染后SKOV-3及IOSE8细胞的增殖;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡;Transwell 法检测miR-204转染后SKOV-3 细胞的侵袭能力.结果:SKOV-3内miR-204表达较IOSE80明显降低,二者之间具有显著性差异(P=0.008 2,P<0.05);感染后各组细胞内miR-204表达水平及细胞增殖能力、细胞凋亡能力及侵袭能力方面,实验组与空白组和对照组之间都有显著性差异(P<0.05);而空白对照组与载体对照组之间都没有显著性差异(P>0.05),说明过表达miR-204能够抑制细胞的增殖能力,促进细胞凋亡并且影响细胞侵袭能力.结论:过表达miR-204能够抑制细胞的增殖能力,促进细胞凋亡并且影响细胞侵袭能力.
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miR -204通过下调 Bcl -2表达抑制人视网膜母细胞瘤细胞生长
目的：探讨 miR -204在人视网膜母细胞瘤中的表达、临床意义及其分子机制。方法：实时定量 PCR检测 miR -204在视网膜母细胞瘤及瘤旁组织中的表达并分析其与临床病理特征的关系。检测 miR -204在视网膜母细胞瘤细胞系中的表达，并用 miR -204模拟物转染 Y79细胞，MTT 及流式细胞仪检测 Y79细胞的增殖、凋亡情况，RT - PCR、Western blot 法检测 Bcl -2 mRNA、蛋白的表达。结果：miR -204在视网膜母细胞瘤组织中的表达水平显著低于对应瘤旁组织。miR -204低表达与神经浸润、分化程度密切相关。miR -204可显著抑制 Y79细胞的增殖并促进其凋亡，下调 Bcl -2 mRNA 及蛋白表达水平。结论：miR -204在人视网膜母细胞瘤组织中表达下调，并与临床病理相关，miR -204抑制 Y79细胞增殖、促进凋亡的作用可能与下调Bcl -2有关。
