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产朊假丝酵母尿酸酶与苛求芽孢杆菌尿酸酶特性的比较
目的 探讨产朊假丝酵母尿酸酶与苛求芽孢杆菌胞内尿酸酶的特性.方法 复苏、培养新购进菌株以制备尿酸酶,利用硫酸铵分级沉淀法、DEAE纤维素52层析和制备PAGE纯化尿酸酶,测定纯化的尿酸酶的活力、表征,并分析其亚基构成.结果 两种尿酸酶分子均为同四聚体,产朊假丝酵母尿酸酶的单肽链分子量和天然酶分子量分别为33.0 ku和134.0 ku,其适pH值接近8.8,在pH 7.4时可保留50%以上活性,该酶的米氏常数(K_m)为(32.8±3.1)μmol/L(n=10),黄嘌呤的抑制常数为(4.8±0.2)μmol/L(n=3);而苛求芽孢杆菌胞内尿酸酶则分别为35.7 ku和151.0 ku,适pH大于9.0,pH 7.4时酶活性保留不到30%,其K_m为(204±14)μmol/L(n=8),黄嘌呤的抑制常数为(41±7)μmol/L(n=5).结论 该研究对构建杂合药用尿酸酶以治疗高尿酸血症相关疾病具有一定的理论意义.
关键词： 产朊假丝酵母尿酸酶 苛求芽孢杆菌胞内尿酸酶 高尿酸血症 -
产朊假丝酵母尿酸酶纳米脂质体的研制及其理化性质
目的 研制产朊假丝酵母尿酸酶纳米脂质体(nanoliposomes containing uricase from candida utilis,UCCNLs)并对其理化性质和体外活性进行评价.方法 采用逆向蒸发法制备UCCNLs,以包封率、小多分散指数、粒径等为评价指标优化制备工艺.考察体外降尿酸活性.考察4,25℃纳米粒的稳定性.结果 醚水比为3:1,脂醇比为1:1,投药量为2mg时,UCCNLs的平均包封率为64.24％,平均粒径为206.73nm,多分散系数为0.247,Zeta电位为- 37.33 mV.将尿酸从0.595 mmol·L-1降至正常水平UCCNLs所需时间约为游离酶的一半.UCCNLs在4℃时具有良好的稳定性.结论 采用逆向蒸发法可制备UCCNLs,工艺简便,包封率高,稳定性较好,体外降尿酸效果好.
