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组蛋白去乙酰化酶1在子宫内膜异位症中的表达及意义
目的 研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在子宫内膜异位症患者在位及异位内膜中的表达,探讨其在子宫内膜异位症发生、发展中的作用. 方法 应用免疫组织化学和免疫印迹法检测20例子宫内膜异位症患者在位内膜和异位内膜组织(研究组)中及20例子宫肌瘤患者的子宫内膜组织(对照组)HDAC1的表达情况. 结果 HDAC1阳性着色主要分布于子宫内膜上皮细胞和间质细胞的细胞核,在位内膜中HDAC1的表达强度明显高于对照组子宫内膜(P<0.01).免疫印迹检测提示,子宫内膜异位症在位内膜和异位内膜组织中HDAC1蛋白的相对表达量分别为2.67±0.69和2.55±1.36,显著高于对照组子宫内膜1.63±0.93(P<0.01,P<0.05);而在位内膜组与异位内膜组之间无统计学差异(P＞0.05). 结论 HDAC1在子宫内膜异位症在位和异位内膜组织中的高表达,可能在子宫内膜异位症的发生、发展中起重要作用.
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二苯乙烯苷通过调节组蛋白去乙酰化酶1水平拮抗沙鼠脑缺血/再灌注损伤
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)水平改变在二苯乙烯苷(TSG)对沙鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用.方法 64只沙鼠随机分为假手术组、脑I/R模型对照组、TSG处理组和依达拉奉对照组.Morris水迷宫实验观察TSG对脑I/R鼠学习记忆功能的影响；神经功能评分、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察TSG对经I/R脑组织的保护作用；免疫组织化学SP法观察脑组织中HDAC1蛋白的表达.Western blotting和RT-PCR检测HDAC1蛋白和mRNA的水平.结果 与模型组比较,TSG对I/R鼠的脑组织有保护作用,能够改善模型鼠学习记忆能力,使模型鼠脑组织HDAC1蛋白和mRNA水平明显升高.结论 TSG能够改善脑I/R损伤模型鼠认知功能,其作用机制与组蛋白乙酰化和去乙酰化动态平衡有关.
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组蛋白去乙酰化酶1在人气管上皮损伤修复过程中的表达
目的 检测组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在人气管上皮损伤修复中的表达及其变化,探讨影响气管干细胞增殖分化的分子调控机制.方法 5-氟尿嘧啶(5-FU)造成人离体气管上皮损伤,应用免疫组织化学和Western blotting方法检测修复过程中各时间点气管上皮HDAC1的表达.结果 去除5-FU后0h,气管上皮脱落,仅残留少量G0期细胞,HDAC1表达阴性; 3～6h,细胞数量增多,为扁平状,未见明显HDAC1阳性细胞;12h,上皮细胞由扁平变立方并连接成片,HDAC1阳性细胞数明显增多,并可见数个HDAC1阳性细胞围绕着底部1个HDAC1阴性细胞和多个HDAC1阳性细胞间夹着数个HDAC1阴性细胞分布的现象;24h,细胞数继续增多并变复层,HDAC1阳性细胞数多,累及全层;48h,接近假复层结构,HDAC1阳性细胞数略减少,阳性细胞分布集中于假复层结构顶部即靠近管腔侧;正常气管上皮HDAC1表达阴性.Western blotting分析显示,HDAC1表达量的变化趋势与免疫组织化学结果一致.结论 随着气管干细胞分化细胞数增多,HDAC1阳性细胞数明显增多,提示HDAC1可作为气管干细胞由增殖转向分化的分子开关.
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Smad7和组蛋白去乙酰化酶1在小鼠马兜铃酸肾病中的表达
目的 探讨Smad7、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在小鼠马兜铃酸肾病(AAN)中的表达及两者在马兜铃酸肾病发生、发展中的作用.方法 将32只体重(20±2)g 的SPF(无菌)雄性昆明小鼠随机分为4组,其中3组为实验组,灌胃给予不同剂量的马兜铃酸(AA)Ⅰ,分别为4 mg/(kg·d)、8 mg/(kg·d)、16mg/(kg·d).另设对照组,PBS灌胃.应用免疫组织化学、免疫印迹法及RT-PCR技术,检测AAN小鼠和正常对照组中Smad7和HDAC1的表达情况.结果 HDAC1阳性着色主要分布于细胞核上,且在AAN中的表达强度明显高于正常对照组.免疫印迹法检测和RT-PCR提示,Smad7在AAN中的表达低于对照组,而HDAC1的表达显著高于对照组.结论 在AAN中Smad7低表达以及HDAC1高表达,提示Smad7和HDAC1可能在AAN的发生、发展中起重要作用.
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组蛋白去乙酰化酶1对肝癌细胞增殖凋亡的影响
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对肝癌细胞增殖凋亡的影响.方法 肝癌细胞SNU-449转染HDAC1小干扰RNA(HDAC1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control),同时设置不转染的细胞为对照.采用RT-PCR检测细胞中HDAC1mRNA的表达水平,Western blot检测细胞中HDAC1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 肝癌细胞转染siRNA control后,细胞存活率、凋亡率及细胞中HDAC1、Cleaved Caspase-3、STAT3、p-STAT3表达水平与对照细胞相比无显著差异(P>0.05).肝癌细胞转染HDAC1 siRNA后,细胞中HDAC1mRNA和蛋白表达水平与对照细胞相比均受到抑制,并且细胞存活率只有(63.74±8.37)%,而细胞凋亡率升高为(32.84±6.92)%,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,p-STAT3蛋白水平降低.结论 干扰HDAC1表达能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,作用机制可能与STAT3信号通有关.
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辛二酰苯胺异羟肟酸通过抑制组蛋白去乙酰化酶改善小鼠心肌肥厚的研究
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)改善小鼠心肌肥厚的作用,为防治心肌肥厚提供新思路.方法:选取60只昆明小鼠,随机分为正常组、假手术组、心肌肥厚组、心肌肥厚+SAHA组,通过部分结扎小鼠胸主动脉建立心肌肥厚模型,终每组纳入6只.采用苏木素伊红(HE)染色观察小鼠心肌细胞,超声心动图检测小鼠心功能,比色法检测HDAC活性,小鼠心肌组织中HDAC亚型HDAC5和β-肌球蛋白重链(β-MHC)信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平分别运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测.结果:HE染色结果表明心肌肥厚组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、细胞核深染.心肌肥厚组小鼠左心室舒张末期直径、左心室舒张末期容积均显著低于假手术组(P<0.05),而室间隔明显较假手术组增厚(P<0.05).心肌肥厚组小鼠HDACs活性显著高于假手术组(P<0.05);心肌肥厚组HDAC5和β-MHC的mRNA及蛋白表达水平均显著高于假手术组(P<0.05).SAHA能够显著降低HDAC5表达水平,显著下调心脏肥厚相关基因β-MHC的表达并改善小鼠心功能和心肌肥厚(P均<0.05).结论:HDAC参与了心肌肥厚的发生,HDAC抑制剂SAHA通过抑制HDAC5的表达从而改善小鼠心肌肥厚.
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人乳头状瘤病毒感染对宫颈上皮内瘤变及宫颈癌患者组蛋白去乙酰化酶1及基质金属蛋白酶表达的影响研究
目的：研究人乳头状瘤病毒（HPV）感染对宫颈上皮内瘤变及宫颈癌患者组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）及基质金属蛋白酶（M M Ps）表达的影响，为宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的诊治提供参考依据。方法选取2014年4月－2016年3月医院收治39例宫颈癌患者为A组，39例宫颈上皮内瘤变患者为B组，39名健康妇女为C组，检测与比较3组研究者组织HDAC1及MMP指标表达情况，并比较A组与B组中不同 HPV感染者的上述指标表达水平。结果 A 组患者组织 HDAC1及 MMP‐2、MMP‐3、MMP‐7、MMP‐9阳性表达率为71．79％及66．67％、64．10％、64．10％、66．67％，均高于B组患者38．46％及43．59％、38．46％、30．77％、35．90％，C 组5．13％及7．69％、2．56％、2．56％、5．13％，B组患者阳性表达率则高于C组，A组和B组中 H PV感染者阳性表达率高于HPV阴性者，且B组中高度病变者阳性表达率高于低度病变者，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论HPV感染对宫颈上皮内瘤变及宫颈癌患者组织的 HDAC1及MMP指标表达影响较大，因此应重视对上述指标的监测与控制。
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RNA干扰HDAC1对子宫内膜癌细胞迁移和侵袭的影响
目的 探讨干扰组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达对子宫内膜癌细胞迁移和侵袭的影响及机制.方法 将HDAC1 siRNA和siRNA control分别转染至子宫内膜癌细胞Ishikawa作为HDAC1 siRNA组和siRNA control组,以不作处理的细胞作为对照组.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HDAC1 mRNA的表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测HDAC1蛋白的表达水平,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell小室检测细胞的侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)的表达水平.结果 HDAC1 siRNA组中HDAC1 mRNA和HDAC1蛋白的表达水平均低于对照组和siRNA control组,HDAC1 siRNA组的细胞迁移率低于对照组和siRNA control组,HDAC1 siRNA组的侵袭细胞数目少于对照组和siRNA control组,HDAC1 siRNA组中MMP2、MMP9、p-STAT3蛋白的表达水平均低于对照组和siRNA control组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 干扰HDAC1表达能够降低子宫内膜癌细胞的迁移和侵袭能力,其作用机制可能与MMP2、MMP9和STAT3的表达有关.
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曲古抑菌素A对人肝癌细胞增殖凋亡影响及其机制的探讨
目的:观察曲古抑菌素A(TSA)对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖凋亡及细胞周期的影响,探讨其作用机制.方法:设TSA处理组和对照组.光镜观察细胞形态；噻唑蓝(MTT)此色法检测增殖抑制；流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期变化；RT-PCR法检测HDAC1mRNA的表达.结果:TSA处理组细胞增殖减慢,形态改变,增殖抑制作用呈明显剂量和时间依赖关系,同一浓度下,24h的抑制效果佳；FCM检测结果显示,不同浓度TSA作用24h后,细胞凋亡率明显升高,早期凋亡率由8.72％升至18.22％(P=0.026),TSA处理后,G0/G1期细胞明显增加,由28.97％升至52.31％(P=0.043),S期细胞由26.01％升至34.28％(P=0.051),G2/M期细胞由45.02％降至13.41％(P=0.036),细胞被阻滞于G0/G1期；RT-PCR法检测结果显示,HDAC1mRNA的表达明显减少,由0.34±0.02降至(0.11±0.01),P=0.020.结论:TSA对SMMC-7721有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与抑制HDAC1的活性,下调HDAC1mRNA表达及阻滞细胞周期有关.
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SAHA联合顺铂对裸鼠宫颈癌抑瘤作用及其机制
目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制药SAHA联合顺铂（cis-diamminedichloroplatinum，DDP）抑瘤作用及机制。方法饲养40只Balb/c-nu/nu雌性裸鼠，细胞悬液皮下注射法构建人宫颈癌SiHa细胞株裸鼠移植瘤模型，当移植瘤8~10 mm大小时，36只荷瘤裸鼠被随机分为6组（对照组、25 mg/kg SAHA组、50 mg/kg SAHA组、5 mg/kg DDP组、25 mg/kg SAHA+DDP组、50 mg/kg SAHA+DDP组），给药第17天拉颈处死裸鼠。对移植瘤的湿重、瘤体积、肿瘤生长抑制率输入SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果与各对照组比，联合组显示出大程度的肿瘤体积的缩小及肿瘤生长抑制率增加（P＜0.05）。结论 SAHA与DDP联合治疗宫颈癌，其作用机制可能与组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase 1，HDAC1）蛋白水平下调有关。
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下调组蛋白去乙酰化酶1的表达引起人白血病HL-60细胞的分化
研究RNA干扰沉默HDAC1基因对髓系白血病HL-60细胞株细胞分化的影响.HDAC1基因的siRNA片段转染入HL-60细胞后,采用RT-PCR、Westem blotting分别检测HDAClmRNA和蛋白的表达变化,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,流式细胞术分析CD13、CD33、CD14的表达变化,NBT还原比色实验观察细胞分化能力.结果表明,HDAClsiRNA可沉默该基因表达;HDACl siRNA的浓度为30～60 nmol.L-1时,24 h后细胞形态向成熟粒系分化;60 nmol.L-1组的NBT还原能力为0.25±0.02,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；但更高浓度组却无明显变化；60 nmol.L-1组细胞CD13、CD33表达率分别为(96.50±0.70)％、(66.73±0.50)％,而对照组分别为(3.39±0.68)％、(96.80±1.70)％,差异有统计学意义(P＜0.000 5);但是CD14的表达率无明显变化.结果提示,HDAClsiRNA的浓度在30～60 nmol.L-1时可诱导细胞向成熟粒细胞分化,有望成为白血病靶向基因治疗的新工具.
关键词： 组蛋白去乙酰化酶1 人白血病HL-60细胞 RNA干扰 细胞分化 -
缺血后适应抑制大鼠脑缺血-再灌注后星形胶质细胞的增生
目的：观察缺血后适应( ischemia postconditioning,IPostC)对大鼠脑缺血-再灌注损伤后胶质纤维酸性蛋白( glial fibrillary acidic protein,GFAP)和组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase1,HDAC1)表达变化,初步探讨 IPostC 对星形胶质细胞增生的影响。方法采用线栓法制备大鼠短暂性大脑中动脉阻塞模型(transient middle cerebral occlusion,tMCAO)模型,采用抽签法将21只健康雄性 Sprague Dawley(SD)大鼠(体质量280~300 g)随机分为7组,每组3只：①假手术组(S)；② tMCAO 1h 组(R-1h)；③ tMCAO+IPostC 1h 组(P-1h)；④ tMCAO 4h 组(R-4h)；⑤ tMCAO+IPostC 4h 组(P-4h)；⑥ tMCAO 24h 组(R-24h)；⑦tMCAO+IPostC 24h 组(P-24h)。缺血后适应的具体操作是在拔除线栓后即刻用动脉阻断夹夹闭双侧颈总动脉,阻断血流10 s后恢复血流10 s,如此反复操作5次。分别应用 Western blotting 法和免疫荧光法研究大鼠脑缺血-再灌注及后适应1、4和24 h 时HDAC1和 GFAP 表达的变化。结果(1)Western blotting 结果显示：①与 S 组相比,R 组 GFAP 蛋白的表达均有所增加,R-1h 和R-24h 显著增加(P<0.05),P 组的表达变化不大。与 R 组相比,P 组 GFAP 的表达下降,其中 P-4h 组显著下降(P<0.05)。②与 S组相比,R 组 HDAC1蛋白的表达均有所增加,其中 R-1h 显著增加(P<0.05),P 组的表达变化不大。与 R 组相比,P 组 HDAC1的表达下降。(2)免疫荧光结果显示：HDAC1和 GFAP 蛋白有共定位,且 HDAC1和 GFAP 的变化趋势同 Western blotting 结果相同。结论 IPostC 可能通过降低 HDAC1的表达来抑制星形胶质细胞的增生从而发挥对脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用。
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小鼠脑部SIRT1与IR受体的共定位
目的 组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)是一种NAD依赖的组蛋白去乙酰化酶,参与中枢神经系统复杂的生理过程.近研究显示其参与外周组织糖原的代谢过程及胰岛素分泌.在成年C57BL/6小鼠脑部,探讨组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)与胰岛素受体(IR)是否存在共定位,为揭示SIRT1与IR之间的联系及其可能起到的调控作用提供形态学依据.方法 应用免疫荧光双标技术研究SIRT1与胰岛素受体之间是否存在共定位,及其在脑组织中的分布情况.结果 SIRT1表达于小鼠海马CA1区椎体细胞,主要在神经元中表达.免疫荧光双标染色重叠图片显示,SIRT1与IR存在共定位,且其主要分布在小鼠的海马区、皮层、下丘脑等部位.体外研究显示胰岛素调节SIRT1的表达.结论 SIRT1主要表达于脑组织的神经元中,并与IR存在共定位现象.本研究结果为探讨SIRT1与IR在脑组织的生理及疾病过程中的调节机制提供了形态学依据.
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高血糖状态结直肠癌相关基因的验证及其诊疗效能评估
目的 验证高血糖状态结直肠癌相关基因表达并评估其诊断价值.方法 收集109例结直肠癌患者肿瘤组织、远端正常肠黏膜组织及外周血样本、30例糖尿病患者及30名健康志愿者外周血样本,采用实时荧光定量PCR法检测上述样本葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)、癌胚抗原相关的细胞黏附分子5(CEACAM5)、热休克蛋白60 (HsP60)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因mRNA表达,采用Pearson相关性分析基因表达与临床病理参数的关联;采用诊断试验方法计算上述基因在结直肠癌患者血清中表达的灵敏度、特异度、准确度、预测性、正确指数、似然比,绘制受试者工作特征曲线,并计算受试者工作特征曲线下面积,评价多基因联合检测的诊断效能.结果 GRP78 (P =0.001)、NOX1 (P=0.022)、CEACAM5 (P=0.000)、HSP60 (P =0.044)、HDAC1 (P =0.047)基因mRNA表达分别与空腹血糖状态呈显著正相关;与正常血糖状态结直肠癌肿瘤组织及血清相比,高血糖状态结直肠癌肿瘤组织及血清中的NOX1 (P =0.000,P=0.008)及HDAC1(P=0.000,P=0.037) mRNA表达均显著增高;NOX1mRNA表达与结直肠癌肿瘤直径呈显著正相关(P=0.013),HDAC1 mRNA表达与结直肠癌发病部位(P =0.049)、原发灶浸润深度(P=0.025)、TNM分期(P =0.042)均呈显著正相关;NOX1、CEACAM5、HDAC1的受试者工作特征曲线下面积分别为0.931、o.852、0.860(P均=0.000);NOX1、HDAC1 mRNA在高血糖状态结直肠癌患者血清中表达的特异度、准确度及阴性预测值均在90％以上.联合检测NOX1、CEACAM5、HDAC1表达的灵敏度为98.82％,特异度为99.93％.结论 联合检测高血糖状态结直肠癌相关基因可提高高血糖人群早期筛查结直肠癌的诊断效能.
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组蛋白去乙酰化酶1对脐静脉内皮细胞增殖迁移和凋亡及管状结构形成能力的影响
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移、凋亡和管状结构形成等生物学特性的影响.方法 通过实验确定p人类免疫缺陷病毒(HIV) 7-U6-shSIRT1-红色荧光蛋白(RFP)干涉慢病毒(shSIRT1组)及pHIV7-U6-Scramble-RFP对照慢病毒(RFP-SC组)的佳感染复数,并感染HUVEC,48h后测定HUVEC内的SIRT1基因和蛋白表达水平;检测HUVEC的增殖能力、迁移能力、凋亡情况及体外成管能力.结果 慢病毒感染HUVEC 48 h后,shSIRT1组的SIRT1基因及蛋白表达水平均明显低于RFP-SC组[(0.271 ±0.005)比(1.000±0.018),(0.499±0.028)比(1.000±0.023)] (P＜0.01).细胞贴壁的第2、3、4天,shSIRT1组HUVEC的增殖能力明显低于RFP-SC组[(4.84±0.61)比(6.16±1.19)、(6.23 ±0.35)比(9.67 ±0.86)、(7.32±0.67)比(10.40±0.61)](均P＜0.01).shSIRT1组细胞的迁移能力明显低于RFP-SC组[5个视野的平均细胞数:(72±17)个比(195±32)个](P＜0.001).shSIRT1组的细胞凋亡率明显高于RFP-SC组[(26.9±3.9)％比(9.9±2.0)％](P＜0.05).shSIRT1组细胞的成管能力明显低于RFP-SC组[5个复孔的平均成管数:(13.9±0.8)个比(25.6±1.4)个](P＜0.05).结论 HUVEC内SIRT1表达水平下降可以抑制细胞增殖、迁移和体外成管能力,并促进细胞凋亡.
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非小细胞肺癌患者血清中HDAC1和DNMT1蛋白的表达及意义
目的 观察非小细胞肺癌患者血清中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)和DNA甲基转移酶1(DNMT1)蛋白的表达,探讨其临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对2012年9月至2013年6月郑州大学第一附属医院呼吸内科136例原发性肺癌患者(肺癌组)和同期郑州市第六人民医院进行健康体检的147名健康人群(对照组)血清中HDAC1和DNMT1蛋白浓度进行测定,分析其与临床病理特征的关系.结果 肺癌组血清中HDAC1和DNMT1蛋白浓度分别为(145±53)ng/L和(50±11)μg/L,显著高于对照组的(78±56)ng/L和(27±6)μg/L(t=596.16、152.64,均P=0.000);HDAC1和DNMT1蛋白浓度与性别、年龄、吸烟史均有显著相关性(均P＜0.05);HDAC1与DNMT1蛋白浓度呈正相关(r=0.525,P=0.000);不同组织学类型和不同临床分期肺癌患者血清HDAC1和DNMT1蛋白浓度差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 血清中HDAC1和DNMT1蛋白高表达可能增加患非小细胞肺癌的危险性,可能在肺癌发展早期过程中起重要作用.
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HDAC1在燃煤污染型氟暴露人群及染氟人原代成骨细胞中的转录及表达
目的 本研究以燃煤污染型氟人群和原代人成骨细胞为研究对象,检测氟暴露对组蛋白去乙酰化酶1 (histone deacetylase1,HDA C1)mRNA转录及蛋白的表达的影响,从人群和细胞两个体系探讨HDA C1基因在地方性氟中毒发生发展中的作用.方法 选择贵州省燃煤污染型地方性氟中毒病区295例氟暴露人群及非氟暴露区85例村民作为调查对象,在知情同意的原则下,采集调查对象的尿液及外周血.依据尿氟(UF)含量将调查对象分为正常尿氟组(UF＜1.96 mg/g Cr,140例)、低氟组(1.96 mg/g Cr≤UF＜3.92 mg/g Cr,93例)、中氟组(3.92 mg/g Cr≤UF＜7.84 mg/g Cr,82例)和高氟组(UF≥7.84 mg/g Cr,65例).同时以0、125、250、500、1 000μmol/L氟化钠处理人原代成骨细胞72 h.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测氟暴露人群外周血及染氟人原代成骨细胞HDA C1 mRNA水平,以酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法(Western-blot)分别检测外周血、成骨细胞HDAC1蛋白表达.结果 调查对象外周血HDA C1 mRNA转录水平各组间比较差异有统计学意义(F=16.502,P＜0.05),低、中、高尿氟组HDA C1 mRNA水平均低于正常尿氟组(P＜0.05);外周血HDAC1蛋白表达,各组间比较差异有统计学意义(F=4.885,P＜0.05),低、中、高尿氟组HDAC1蛋白含量均高于正常尿氟组(P＜0.05).氟化钠处理人成骨细胞72 h后,HDA C1 mRNA水平,组间比较差异有统计学意义(F=226.81,P＜0.05),随着染氟浓度的升高,HDA C1 mRNA转录水平逐渐升高(P＜0.05);HDAC1蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=20.60,P＜0.05);随着染氟浓度的升高,HDAC1蛋白表达水平逐渐升高(P＜0.05).结论 HDAC1参与氟中毒的发生发展过程,其蛋白表达增强可能是氟骨症发生的早期分子事件.
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RNA干扰HDAC1提高人宫颈癌HeLa细胞化疗敏感性研究
目的：探讨体外应用RNA干扰技术抑制组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)表达,提高人宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的作用及机制。方法体外合成针对HDAC1的小干扰RNA(siRNA),脂质体法转染HeLa细胞,将其分为正常对照组(无干预措施)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)及siRNA干扰组(转染HDAC1基因siRNA)。采用Western blot法检测各组细胞HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4(Ac-H4)的表达,采用聚合酶链反应(PCR)法检测HDAC1基因和NF-κB基因mRNA表达。 HeLa细胞经不同浓度顺铂作用后,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测对顺铂的敏感性,以及采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果与正常对照组及阴性对照组比较,siRNA干扰组HeLa细胞HDAC1基因mRNA和蛋白表达均降低( P<0．05或P<0．01),细胞内Ac-H4表达增加( P<0．05),同时NF-κB基因mRNA表达降低(P<0．05)。经不同浓度顺铂作用后,与正常对照组及阴性对照组比较,siRNA干扰组HeLa细胞对顺铂的50%抑制浓度降低(P<0．05或P=0．01),细胞凋亡率增加(P<0．01)。结论 HDAC1基因siRNA能够提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的敏感性,增加组蛋白乙酰化水平、抑制HDAC1基因及NF-κB基因表达可能是其作用机制。
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肾透明细胞癌中DNMT1和HDAC1表达相关性研究
目的 通过检测DNA甲基化转移酶1(DNMT1)和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在肾透明细胞癌(RC-CC)组织及癌旁组织中的蛋白表达情况,探讨其与RCCC发生、发展及生物学行为相关性. 方法 采用免疫组织化学S-P法分别检测114例RCCC组织、50例癌旁组织中DNMT1和HDAC1蛋白表达情况,并分析其表达水平与临床病理特征的关系. 结果 DNMT1蛋白在RCCC中的阳性率(71. 93%)明显高于癌旁组织(24. 00%),差异有统计学意义(P<0. 05);HDAC1蛋白在RCCC中的阳性率(59. 65%)高于癌旁组织(38. 00%),差异有统计学意义(P<0. 05).DNMT1及HDAC1蛋白在RCCC中的表达与Fuhrman分级及临床病理分期相关(P<0. 01),而与性别、年龄、肿瘤大小及淋巴结转移情况无关(P>0. 05). 相关性检验结果显示:DNMT1 与 HDAC1 蛋白表达呈正相关(rs =0. 282,P=0. 034). 结论 DNMT1和HDAC1可能参与了RCCC的发生、发展,并有协同作用.
关键词： 肾透明细胞癌 DNA甲基化转移酶1 组蛋白去乙酰化酶1 免疫组织化学 -
鞘氨醇激酶1调控沉默信息调节因子1表达的研究
目的 探讨鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPK1)与沉默信息调节因子1(silent mating type informa-tion regulation 2 homolog 1,SIRT1)表达的关系.方法 用病毒感染复数(MOI)=20 pLKO.1-shSPK1-GFP干涉慢病毒(shSPK1组)及pPIG-U6-Scramble-GFP对照慢病毒(GFP-SC组)感染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothe-lial cells,HUVECs),48 h后提取细胞RNA及蛋白,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)测定SIRT1基因及蛋白表达水平.用MOI=20 pHIV7-U6-shSIRT1-RFP干涉慢病毒(shSIRT1组)及pHIV7-U6-Scramble-RFP对照慢病毒(RFP-SC组)感染HUVECs,48 h后提取细胞RNA并用RT-PCR检测细胞SPK1基因表达水平.用100 nmol 1-磷酸鞘氨醇(S1P)处理HUVECs,分别在0.5、2、24及36 h提取细胞RNA,24、48及72 h提取细胞蛋白,检测SIRT1基因及蛋白表达水平.用100 nmol S1P处理干涉过SIRT1的HUVECs检测细胞的增殖、迁移及体外管状结构形成能力.结果 shSPK1组SIRT1基因和蛋白表达水平低于GFP-SC组(P＜0.01).shSIRT1组SPK1基因表达水平与RFP-SC组比较差异无统计学意义(P＞0.05).100 nmol S1P处理HUVECs不同时间SIRT1基因及蛋白表达水平高于未处理组,HUVECs增殖能力高于shSIRT1组(P ＜0.05,P＜0.01).shSIRT1组HUVECs迁移率低于RFP-SC组,S1P处理组高于RFP-SC、shSIRT1组(P＜0.05).shSIRT1组HUVECs体外管状结构形成能力低于RFP-SC组,S1P处理组高于shSIRT1组(P＜0.05).结论 SPK1可以正向调控SIRT1表达并对HUVECs功能产生影响.
