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异体脂肪源干细胞移植对大鼠的抗衰老作用
目的 从筋膜学的角度设计观察脂肪源干细胞(ADSCs)异体移植对衰老模型大鼠体内自由基和免疫功能的影响,探索一种新的抗衰老方法.方法 30只SD大鼠随机分成空白对照组(A组)、模型组(B组)和治疗组(C组).B、C组大鼠注射D-半乳糖(D-gal)复制亚急性衰老模型.C组大鼠在造模8周后,经尾静脉输入体外扩增培养的脂肪源干细胞3×10~6个.治疗2周后,检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶( SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、血清白细胞介素-2( IL-2)水平和脾脏指数.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠血清SOD、NO、IL-2水平及脾脏指数均显著性降低,血清MDA水平显著升高;移植ADSCs后,治疗组大鼠较模型组大鼠血清SOD、NO、IL-2水平及脾脏指数均有所提高,而MDA含量显著降低.结论 异体移植ADSCs可有效增强大鼠机体清除自由基和抗氧化能力,提高机体免疫功能,从而延缓D-gal诱发的大鼠衰老.
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脂肪源干细胞与聚丙烯网片的生物相容性
目的 观察脂肪源干细胞(ADSC)与聚丙烯网片体内外的生物相容性.方法 制备兔脂肪源性干细胞悬液,行流式细胞术鉴定.取聚丙烯网片浸提液培养ADSC.用MTT法检测24、48、72 h实验组(聚丙烯网片材料浸提液)、阴性对照组(10％FBS的低糖DMEM)与阳性对照组(6.4％苯酚溶液)的细胞活力,评价支架细胞毒性.ADSC传代扩增后,接种到聚丙烯网片支架上,体外培养1周,用扫描电子显微镜观察细胞在支架上黏附生长及增殖.分别将聚丙烯网片、ADSC复合聚丙烯网片植入新西兰大白兔的腹直肌表面,4周后观察网片腐蚀、粘连情况,HE染色进行组织学观察,采用RT-PCR技术动态检测网片周围组织VEGF mRNA的表达水平.结果 ADSC强阳性表达CD90、CD44及CD73 (98.54％、95.32％、98.49％),低表达CD45、CD34及CD14(1.21％、3.01％、2.14％).ADSC在聚丙烯网片浸提液中可保持较高的增殖率,24、48、72 h实验组细胞相对增殖率分别为(97.0±12.5)％、(96.0±10.3)％、(101.0±22.8)％,与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05),与阳性对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05),聚丙烯网片浸提液无细胞毒性.ADSC种植于两种支架材料后生长速度快,聚丙烯网片、ADSC复合聚丙烯网片均有不同程度的腐蚀、粘连,但聚丙烯网片粘连更致密.与聚丙烯网片比较,ADSC复合聚丙烯网片诱导慢性炎性反应轻,炎性反应评分低[0.6(0.3,0.9)比1.1(0.9,1.4),P=0.001],新生血管形成[2.6(2.1,3.1)比1.7(1.2,2.1),P=0.000]和成纤维细胞增殖[2.2(0.9,2.6)比0.9(0.6,1.5),P=0.001]评分更高.ADSC复合聚丙烯网片周围组织VEGF mRNA含量(1.53±0.11)高于聚丙烯网片(0.96±0.05) (t=1 1.005,P＜0.05).结论 聚丙烯网片支架与ADSC具有良好的生物相容性,可作为脂肪组织工程较理想的生物支架材料.
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Pellet培养与纤维蛋白凝胶支架体外成软骨能力的比较
目的 比较Pellet培养和纤维蛋白凝胶支架两种培养方式诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化及合成细胞外基质的差异.方法 人脂肪组织酶消化分离脂肪干细胞,培养基为DMEM含10%胎牛血清,利用Pellet培养和纤维蛋白凝胶支架两种培养体系将P3代脂肪干细胞诱导成软骨后21天取材进行苏木精-伊红染色,番红O染色,DMMB法测定胞外基质中GAG含量,荧光定量PCR测定II型胶原基因表达.结果 苏木精-伊红染色与番红-O染色显示,纤维蛋白凝胶实验组软骨细胞外基质大量分泌,并融合成片,说明纤维蛋白凝胶支架可更好促进干细胞成软骨分化、维持软骨细胞表型.GAG/DNA结果显示,纤维蛋白凝胶组促GAG分泌的能力优于其余各组(P<0.05),其II型胶原mRNA表达的能力也强(P<0.05).结论 利用纤维蛋白凝胶支架诱导人脂肪干细胞成软骨分化的能力优于无支架的Pellet三维培养体系.
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脂肪干细胞覆膜聚丙烯补片在大鼠体内的生物相容性
目的 探讨脂肪干细胞(ADSCs)覆膜聚丙烯补片在大鼠体内的生物相容性.方法 培养扩增检测大鼠脂肪干细胞后,将其接种到聚丙烯补片上,体外培养10 d.成年雄性SD大鼠12只,个体质量约(250±20)g,随机分为覆膜补片组和未覆膜补片组,每组6只.分别将聚丙烯补片和ADSCs覆膜聚丙烯补片植入大鼠的腹壁肌肉表面,30 d后观察补片侵蚀、粘连情况,测量补片厚度、硬度、韧性等,并进行组织学观察.结果 细胞呈长梭形,并形成小集落,呈束状、菊花状或旋涡状生长,活力良好,免疫荧光检测结果显示干细胞特异性标记CD90表达≥97％.ADSCs在聚丙烯补片上附着生长良好.植入大鼠体内30 d后,ADSCs覆膜聚丙烯补片炎症反应较聚丙烯补片轻,炎症细胞评分[(0.95±0.23)分vs(2.62±0.40)分,P＜0.05],而成纤维细胞增殖和新生血管生成却更多,分别为[(2.6±0.4)分vs(1.8±0.4)分,P＜0.05]和[(2.4±0.4)分vs (1.5±0.4)分,P＜0.05].30 d后ADSCs覆膜聚丙烯补片的硬度与聚丙烯补片无明显差别[(2.1±0.3)分vs(2.2±0.3)分,P＞0.05],而厚度[(2.67±0.37)分vs (1.13±0.24)分,P＜0.05]、韧性[(2.67±0.31)分vs(2.27±0.26)分,P＜0.05]等均大于聚丙烯补片.结论 ADSCs覆膜聚丙烯补片相较聚丙烯补片植入大鼠体内后可以减轻局部炎症反应、增加局部腹壁顺应性.
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小鼠脂肪源干细胞分离培养和成骨诱导前后造血调控因子的表达
背景:小鼠脂肪源干细胞的体外分离培养和诱导分化以及成骨诱导前后造血调控因子表达的报道甚少.目的:观察小鼠脂肪源干细胞的体外分离培养方法以及成骨诱导前后造血调控因子分子水平的表达.方法:采用酶消化法获得雄性C57BL/6小鼠脂肪来源的细胞,传代培养至第3代,分别进行成脂与成骨细胞诱导.结果与结论:小鼠脂肪来源的细胞体外培养呈梭形贴壁生长,可稳定传代.细胞表面标志CD29表达率强阳性,CD34表达率较低,CD106、CD49d低表达.成脂及成骨细胞诱导均为阳性.造血调控因子β-连环蛋白表达量高,基质细胞衍生因子1和神经钙黏素次之,其余干细胞因子、巨噬细胞炎性蛋白1α、配体jagged1、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子均为低表达.结果证实,小鼠脂肪来源的细胞为脂肪源干细胞,其成骨诱导前后的造血调控因子均有表达,但差异无显著意义.
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干细胞治疗骨质疏松症的可能与可行
背景:药物治疗骨质疏松并不理想,近年来越来越多的科学家尝试采用干细胞移植方法治疗骨质疏松症.目的:旨在探究通过干细胞治疗骨质疏松的进展,以促进其临床应用.关键词中以"stem cell,osteoporosis,bone metabolism,osteoporosisbone marrow mesenchymal stem cells(BMMSCs),Adipose-derived stem cells (ADSCs)或"干细胞,骨质疏松,骨代谢,骨髓间充质干细胞,脂肪源干细胞"为检索词进行检索.选择文章内容与干细胞治疗骨质疏松有关者,同一领域文献则选择近期发表在权威杂志文章.摘要、方法:由第一作者应用计算机检索PubMed、中国期刊全文数据库(CNKI) 1997-05/2011-10相关文献.在标题、结果与结论:初检得到144篇文献,根据纳入标准选择50篇文献进行综述.应用干细胞治疗骨质疏松主要是通过增加成骨细胞的数量来达到治疗目的,常用的方法有干细胞移植及诱导干细胞分化.干细胞可以从根本上治疗骨质疏松,并且能避免药物治疗的毒副作用,具有广阔应用前景.
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维甲酸和睾酮单独与联合诱导脂肪源干细胞周期的变化
背景：目前关于维甲酸对干细胞增殖作用的研究较少见，对睾酮的研究主要集中于其抑制细胞衰老的作用方面。目的：探索维甲酸和睾酮单独和联合诱导对脂肪源干细胞细胞周期的影响。方法：分离培养2月龄SD雌性大鼠脂肪源干细胞，传至第3代进行成脂、成骨诱导和表面标记鉴定。将其分为6组：①对照组。②10-5 mol/L 维甲酸组。③10-6 mol/L 维甲酸组。④10-5 mol/L维甲酸+睾酮组。⑤10-6 mol/L维甲酸+睾酮组。⑥睾酮组。对照组应用DMEM+体积分数10%胎牛血清培养液，其余各组均在对照组的基础上加相应剂量维甲酸或睾酮或二者联合诱导剂。各组培养36 h后行流式细胞仪检测各细胞分期的变化。结果与结论：与对照组相比，10-5 mol/L 维甲酸组和10-6 mol/L 维甲酸组G 1期细胞数比例明显升高，S期细胞数比例明显降低。与对照组相比，睾酮组G 1期细胞数比例明显下降，S期细胞数比例为明显上升。10-5 mol/L维甲酸+睾酮组与10-5 mol/L 维甲酸组比较，10-6 mol/L维甲酸+睾酮组与10-6 mol/L 维甲酸组比较，G 1期细胞数比例有所下降，S期细胞数比例为明显上升。结果表明，维甲酸可将脂肪源干细胞周期阻滞于G 1期，延缓细胞周期由G1期向S期的进程；睾酮可加速脂肪源干细胞周期由G1期向S期的进程；联合诱导可加速脂肪源干细胞的细胞周期由G1期向S期的进程。
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大鼠脂肪源干细胞中骨形态发生蛋白信号通路相关分子的表达
目的:探讨大鼠脂肪源干细胞(ADSCs)成骨和成脂肪分化能力及骨形态发生蛋白(BMP)信号通路相关分子的表达.方法:切取Wistar雌性大鼠腹股沟脂肪垫,用酶消化法培养ADSCs.将第4代ADSCs经成骨和成脂肪诱导分化培养后,进行相应的茜素红和油红O染色,以鉴定ADSCs的分化潜能.同时取培养的第4代ADSCs进行流式细胞术检测部分表面抗原.提取ADSCs的总RNA进行RT-PCR,检测BMP信号通路相关分子mRNA的表达.结果:光学显微镜下观察贴壁ADSCs形态多呈梭形、多边形,细胞大小均匀;流式细胞术鉴定ADSCs的表面抗原显示CD90、CD106呈阳性,CD45、CD49d呈阴性;成脂诱导培养14d后,油红O染色显示特异性脂滴,而阴性对照孔中未观察到红染的脂滴.成骨诱导培养21d后,茜素红染色显示矿化结节呈特异性的粉红色,阴性对照孔中未见被染成粉红色的钙结节;RT-PCR检测结果显示BMP信号通路相关分子Bmpr1a、Bmpr1b、Bmpr2; Smad1、Smad5、Smad8的mRNA均阳性表达.结论:ADSCs具有多向分化潜能,可向成骨和成脂肪分化;ADSCs可能存在BMP信号通路.
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体外扩增后人脂肪源干细胞的体外免疫调节功能的实验研究
目的 研究体外扩增后人脂肪源干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)在体外的免疫调节功能,以期以少量组织获得足够量的低免疫原性且具有免疫调节功能的脂肪源干细胞,用于组织修复及细胞治疗. 方法 流式细胞仪检测扩增至第2代及第5代的人脂肪源干细胞表面标记物,观察在扩增的过程中ADSCs表面标记物的变化;同时,检测扩增至第5代的ADSCs在体外抑制淋巴细胞增殖的能力,以评价ADSCs的免疫原性及免疫调节功能. 结果 ADSCs在扩增过程造血干细胞标记物表达降低,间质细胞表型及内皮细胞表型变化无显著性差异,同时第5代的ADSCs在体外不会引起淋巴细胞的增殖,并且在混合淋巴细胞反应中可以抑制淋巴细胞的增殖. 结论 扩增中的ADSCs逐渐表达均一的间充质干细胞的表面标记物,并在扩增至第5代时仍保持有低免疫原性及免疫调节的能力.
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骨组织工程基因治疗在颅颌面重建中的应用
骨组织工程中直接添加生长因子的方法存在着诸多不足,基因治疗和组织工程技术的结合,为克服这一难题提供了新的方向.本文回顾骨组织工程基因治疗的原理和特点,介绍了脂肪细胞作为骨组织工程靶细胞的研究现状,以及一种大动物模型报告基因的应用;并就颅颌面骨组织工程基因治疗中两种新的组织特异性成骨基因作一综述.
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脂肪源干细胞-聚丙烯复合网片的生物相容性实验研究
目的：如何避免合成补片与人体组织产生的排异反应是目前急需解决的问题，文中探讨脂肪源干细胞（ adipose derived stem cells， ADSCs）与聚丙烯网片在动物体内的生物相容性。方法制备兔脂肪源性干细胞悬液。 ADSCs传代扩增后，接种到聚丙烯网片支架上，体外培养1周。分别将聚丙烯网片、ADSCs-聚丙烯复合网片植入家兔的腹直肌表面，4周后观察网片腐蚀、粘连情况，HE染色进行组织学观察，采用RT-PCR检测VEGF mRNA 的表达水平。结果流式细胞仪检测结果提示ADSCsCD90、CD44、CD73、CD45、CD34及CD14表达分别为98．54％、95．32％、98．49％、1．21％、3．01％、2．14％。聚丙烯网片、ADSCs-聚丙烯复合网片均有不同程度的腐蚀、粘连，但聚丙烯网片粘连更致密。与聚丙烯比较，ADSCs-聚丙烯复合网片诱导慢性炎症反应轻，炎症评分降低[（1．1±0．2）分vs （0．6±0．1）分， P＝0．001]，新生血管形成评分升高[（1．7±00．）分 vs （2．6±0．3）分， P＝0．000]，成纤维细胞增殖评分升高[（0．9±0．1）分 vs （2．2±0．2）分， P＝0．001]。 ADSCs-聚丙烯复合网片周围组织VEGF mRNA含量高于聚丙烯网片（t＝94．6，P＜0．05）。结论 ADSCs-聚丙烯复合网片具有良好的生物相容性，可作为脂肪组织工程较理想的生物支架材料。
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脂肪干细胞覆膜聚丙烯补片减轻疝修补术后炎症反应的研究
目的 探讨脂肪干细胞(ADSCs)覆膜聚丙烯补片对大鼠疝修补术后炎症反应的影响.方法 培养扩增检测脂肪干细胞并接种到聚丙烯补片上,体外培养10天.成年SD大鼠12只,分为覆膜组6只,未覆膜组6只,分别将ADSCs覆膜聚丙烯补片和聚丙烯补片植入覆膜组和未覆膜组大鼠的腹壁肌肉表面,检测大鼠术前及术后3、7、14、21、28天血常规、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平.结果 ADSCs在聚丙烯补片上附着生长良好,免疫荧光检测显示干细胞特异性标记CD90表达≥97％.覆膜组在术后14天炎症反应高峰时期白细胞计数[(10.86±0.56)×109/L比(11.92±0.56)×109/L,P＜0.05]、TNF-α[(87.12±12.59) μg/L比(175.28±34.37) μg/L,P＜0.01]、IL-1β[(275.69±54.28) μg/L比(501.36±98.15) μg/L,P＜0.01]均低于未覆膜组,差异有统计学意义.结论 与聚丙烯补片组比较,ADSCs覆膜聚丙烯补片可减轻大鼠疝修补术后全身炎症反应.
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诱导脂肪源干细胞分化成软骨细胞的研究进展
脂肪源干细胞具有取材容易、能反复取材及细胞增殖快速等优点.因此脂肪源干细胞已经逐渐取代骨髓间质干细胞在组织工程中的地位.随着人类对脂肪源干细胞的不断研究,现已经初步掌握了细胞的提取和鉴别.组织工程和干细胞技术的发展使脂肪源干细胞有望在软骨修复中得到更加广泛的应用.本文对诱导脂肪源干细胞分化成软骨细胞模型的研究进展进行综述.
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脂肪源干细胞修复兔膝关节全层软骨缺损研究
[目的]观察评价兔膝关节髌股关节面中心人工制造全层关节软骨缺损后,单纯脂肪源干细胞复合海藻酸钙凝胶移植到软骨缺损处对关节全层软骨缺损的修复效果,以探索关节软骨缺损修复简单有效的途径.[方法]新西兰大白兔27只随机分为A、B、C三组,A组关节软骨缺损处置入海藻酸钙凝胶,B组软骨缺损处不做任何处理,C组缺损处置入未经诱导的脂肪源干细胞复合海藻酸钙凝胶,分别于术后第4、8、12周处死动物,通过大体、组织切片观察以及透射电镜等技术手段对修复效果进行观测,采用改良的Wakitani评分标准对修复组织进行评分,所得评分采用统计软件SPSS 11.5进行统计学分析.[结果]A、B组软骨缺损处为纤维组织状物填充,组织学切片可见为原纤维覆盖,C组软骨缺损处为类透明软骨组织填充,组织切片可见类软骨细胞及其周围的陷窝,电镜下可见细胞周围大量胶原纤维,C组在各个时期与A组、B组的评分比较差异都具有统计学意义(P<0.01),示C组修复效果较其他两组为优.[结论]单纯脂肪源干细胞复合海藻酸钙凝胶可有效修复关节软骨全层缺损.
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温度敏感性材料培养的脂肪源性干细胞作为眼表重建种子细胞的可行性研究
背景 组织工程角膜学的发展为角膜盲的治疗提供了新的选择,但目前暂未发现培养方法简单、可行性好的角膜上皮种子细胞和理想的支架材料.研究表明,脂肪源性干细胞(ADSCs)具有自我更新能力同时也具有类上皮的特质,而温度敏感性材料(TRSs)作为支架进行干细胞培养也为细胞层片技术的进步提供了技术支撑. 目的 研究兔ADSCs在TRSs上的培养特性,并与经典的口腔黏膜上皮细胞(OMECs)特性进行比较,探讨ADSCs作为眼表重建种子细胞的可行性.方法 异丙基丙烯酰胺溶于二丙醇后均匀涂于直径35 mm的聚苯乙烯培养皿表面,利用电子束照射制备TRSs,兔颈背部皮下脂肪组织2～3g经消化培养后获得ADSCs,同时取出兔口腔黏膜组织进行消化培养,获得OMECs.将2种干细胞均接种于TRSs上继续培养,比较2种细胞形态、生长速度、脱附时间和成活细胞的总计数,将ADSCs层片和OMECs层片行组织病理学检查,观察2种细胞的形态特征;采用免疫组织化学法检测2种细胞中干细胞标志物和上皮细胞标志物的表达;应用扫描电子显微镜检查2种细胞层片的表面超微结构.结果 自制TRSs透明性和光滑度与普通培养皿接近,任意观察的5个样品中有4个水接触角＞10°,成功率为80％.TRSs上培养的ADSCs呈长梭形,OMECs呈不规则圆形.ADSCs生长周期在TRSs上为12～ 14 d,脱附时间为(46.0±9.6) min,细胞总计数为(7.9±1.1)×105/片,而TRSs培养的OMECs生长周期为14～16 d,脱附时间为(91.9±10.9) min,细胞计数为(45.8±26.5) ×105/片,2种细胞间层片脱附时间和细胞计数的差异均有统计学意义(P=0.002、0.028).组织病理学检查显示,TRSs上的ADSCs呈1～3层排列,而OMECs呈4～5层覆层结构.免疫组织化学染色显示,ADSCs和OMECs细胞层片细胞角蛋白12(CK12)及干细胞标志物p63、ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)均呈阳性表达.扫描电子显微镜下观察可见ADSCs和OMECs表面均有致密的上皮微绒毛结构,细胞间连接紧密.结论 自制的TRSs可作为脂肪干细胞的培养支架,ADSCs取材广泛,TRSs上培养的ADSCs层片细胞活力好,可操作性强,可作为眼表重建新的种子来源.
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低强度脉冲超声波对大鼠脂肪干细胞增殖及成骨分化的影响
目的 探讨低强度脉冲超声波(LIPUS)对体外分离培养的大鼠脂肪源干细胞(ADSCs)增殖及成骨分化的影响.方法 取4周龄Sprague-Dawley大鼠腹股沟处脂肪组织,分离出脂肪干细胞并体外培养,经免疫磁珠分选、流式细胞仪鉴定ADSCs表面标志后,取第3代ADSCs,经LIPUS作用不同时间后,采用流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞增殖指数,采用CCK-8法比较细胞增殖活性.取第3代ADSCs,设置阴性对照组、LIPUS组、成骨诱导组及LIPUS联合成骨诱导组,于LIPUS作用7 d、14 d时测定各组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;于LIPUS作用21 d时采用Von kossa染色比较各组细胞成骨分化能力.结果 第3代ADSCs高表达CD29、CD44,低表达CD34,符合ADSCs表面标志物特征;LIPUS组细胞增殖指数较对照组明显提高,细胞增殖加快.与阴性对照组比较,LIPUS组于实验进行7 d、14 d后ALP活性明显升高;LIPUS作用能促进ADSCs致矿化结节形成,但其矿化结节数量不及LIPUS联合成骨诱导组.结论 LIPUS能加速ADSCs增殖,促进ADSCs向成骨细胞分化.
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兔脂肪源干细胞与牙周膜成纤维细胞共培养的实验研究
目的:研究脂肪源干细胞能否与牙周膜成纤维细胞直接共培养,在共培养状态下,脂肪源干细胞能否促进牙周膜成纤维细胞胶原特异基因的表达.方法:分别从新西兰白兔皮下脂肪和牙周膜组织中分离出脂肪源干细胞和牙周膜成纤维细胞,体外常规培养;将两种细胞等量混合共培养,利用光镜和F-actin 染色标记细胞骨架的方法观察共培养细胞的形态变化,并与单纯培养的细胞比较;利用DAPI 染色标示细胞核细胞计数法检测共培养细胞的增殖情况;利用定量PCR 法检测特异基因I 型胶原在单纯培养和共培养细胞中的表达.结果:脂肪源干细胞和牙周膜成纤维细胞能直接共培养;共培养细胞形态近似牙周膜成纤维细胞;共培养对细胞增殖无明显影响;脂肪源干细胞可提高牙周膜成纤维细胞I型胶原基因的表达.结论:脂肪源干细胞可与牙周膜成纤维细胞共培养,并促进牙周膜成纤维细胞的胶原分泌.
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静电纺丝聚乳酸/聚己内酯共混纤维支架与兔脂肪源干细胞的体外生物相容性研究
目的 利用兔脂肪源干细胞评价静电纺丝聚乳酸/聚己内酯共混纤维支架的生物相容性.方法 脂肪源干细胞取自新西兰白兔皮下脂肪组织,经分离、培养后接种到待检支架上,使用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞在支架上的生长形态;MTT法比较支架上培养和常规培养条件下的脂肪源干细胞生长曲线与倍增时间.结果 脂肪源干细胞在纤维支架上生长良好,生长曲线与常规培养时基本一致,两组间细胞倍增时间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脂肪源干细胞能够在静电纺丝聚乳酸/聚己内酯共混纤维支架材料上正常生长增殖,该支架材料生物相容性好.
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不同浓度细胞松弛素D对人脂肪源干细胞分化能力的影响
目的 观察不同浓度细胞松弛素D(Cyto D)对人脂肪源干细胞(hASC)成骨分化和成脂分化能力的影响. 方法 在生长培养基、成脂诱导培养基及成骨诱导培养基中分别加入0.05、0.1、0.2 μg/ml的Cyto D处理hASC,干扰肌动蛋白的延长,并在处理的第1、4、7d时分别进行油红O染色、ALP染色及CCK8等实验检测细胞性能的改变.结果 7d时实验组0.2μg/ml的存活率相比于对照组下降了1/3.CytoD能抑制hASCs的存活和增殖,且浓度越大细胞的存活率越低.单纯的CytoD既能促使hASC胞内脂滴形成,又能改变细胞内成骨的基础状态.Cyto D与成脂诱导液联合使用后能极大的促进成脂,且不同的浓度具有不同的成脂效果,低浓度使脂滴数量增加,高浓度促进脂滴成熟;与成骨诱导液联合使用后Cyto D用药浓度和成骨效果成反比. 结论 细胞松弛素D能增强成骨或成脂诱导液效果,且低浓度细胞松弛素D能够促进成骨,低浓度和高浓度细胞松弛素D都能促进成脂.本实验探究了细胞松弛素D引起的肌动蛋白解聚对脂肪源干细胞的分化能力影响,为研究脂肪源干细胞的分化机制提供了重要生物学信息.
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维甲酸对成纤维细胞及脂肪源干细胞成骨诱导的影响
目的 探究维甲酸(RA)对乳鼠真皮成纤维细胞(DFB)及脂肪源干细胞(ADSCs)成骨诱导分化的影响.方法 分别离体培养5～7 d龄乳鼠DFB及ADSCs.对DFB进行波形蛋白的免疫荧光鉴定,对ADSCs进行成骨、成脂肪诱导并做表面标记物鉴定.用RA及传统成骨诱导液分别对两类细胞进行成骨诱导2周,茜素红染色检测细胞内钙结节的形成,酶标仪检测细胞诱导后ALP的OD值. 结果 两类细胞在常规成骨诱导及RA诱导成骨后,均有钙结节形成.传统成骨诱导与RA成骨诱导组与各自对照组相比,ALP活性均升高.在DFB组中,RA诱导的ALP活性比传统成骨诱导高,而在ADSCs组中,结果相反. 结论 RA可以促进DFB及ADSCs的成骨分化,并且因细胞种类不同而显著效果不同.
