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翼状胬肉组织中ATP结合盒转运蛋白B5的表达变化及意义
背景 角膜缘干细胞(LSCs)缺乏可引起多种眼表疾病,如翼状胬肉等.ATP结合盒转运蛋白B5(ABCB5)是新发现的特异性LSCs标志物,研究ABCB5在翼状胬肉组织中的表达变化对于翼状胬肉的防治具有重要的临床意义. 目的 研究ABCB5在翼状胬肉组织中的表达变化,探讨其在翼状胬肉发生和发展中的作用.方法 收集2015年1-11月在解放军474医院行原发性翼状胬肉切除术的手术标本37例,同期收集年龄匹配的行斜视矫正术和视网膜脱离复位术患者的正常结膜组织22例.采用免疫组织化学法检测ABCB5在翼状胬肉组织标本中的表达和定位,分别采用Western blot和实时荧光定量PCR法检测翼状胬肉标本中ABCB5蛋白及其mRNA的相对表达量,并与正常结膜标本进行比较. 结果 ABCB5蛋白表达于所有22例正常结膜复层扁平细胞的细胞质和细胞核中,以基底层细胞中表达更为明显,呈现明显极性.在37例翼状胬肉标本中,可见ABCB5阳性表达者34例,占91.89％,ABCB5表达阴性者3例,占8.11％.正常结膜组和翼状胬肉组ABCB5蛋白相对表达量分别为0.90±0.31和0.59±0.41,ABCB5 mRNA表达量分别为1.01±0.26和0.65±0.32,翼状胬肉组ABCB5蛋白和mRNA的相对表达量均明显低于正常结膜组,差异均有统计学意义(t=-0.266,P=0.011;t=-4.560,P=0.000). 结论 LSCs标志物ABCB5的表达下调提示LSCs的减少和缺失与翼状胬肉的发生和发展有关,提示ABCB5检测可能作为翼状胬肉发生和发展、术后复发及疗效评估的观察指标之一,也可能成为翼状胬肉的治疗靶点.
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温度敏感性材料培养的脂肪源性干细胞作为眼表重建种子细胞的可行性研究
背景 组织工程角膜学的发展为角膜盲的治疗提供了新的选择,但目前暂未发现培养方法简单、可行性好的角膜上皮种子细胞和理想的支架材料.研究表明,脂肪源性干细胞(ADSCs)具有自我更新能力同时也具有类上皮的特质,而温度敏感性材料(TRSs)作为支架进行干细胞培养也为细胞层片技术的进步提供了技术支撑. 目的 研究兔ADSCs在TRSs上的培养特性,并与经典的口腔黏膜上皮细胞(OMECs)特性进行比较,探讨ADSCs作为眼表重建种子细胞的可行性.方法 异丙基丙烯酰胺溶于二丙醇后均匀涂于直径35 mm的聚苯乙烯培养皿表面,利用电子束照射制备TRSs,兔颈背部皮下脂肪组织2～3g经消化培养后获得ADSCs,同时取出兔口腔黏膜组织进行消化培养,获得OMECs.将2种干细胞均接种于TRSs上继续培养,比较2种细胞形态、生长速度、脱附时间和成活细胞的总计数,将ADSCs层片和OMECs层片行组织病理学检查,观察2种细胞的形态特征;采用免疫组织化学法检测2种细胞中干细胞标志物和上皮细胞标志物的表达;应用扫描电子显微镜检查2种细胞层片的表面超微结构.结果 自制TRSs透明性和光滑度与普通培养皿接近,任意观察的5个样品中有4个水接触角＞10°,成功率为80％.TRSs上培养的ADSCs呈长梭形,OMECs呈不规则圆形.ADSCs生长周期在TRSs上为12～ 14 d,脱附时间为(46.0±9.6) min,细胞总计数为(7.9±1.1)×105/片,而TRSs培养的OMECs生长周期为14～16 d,脱附时间为(91.9±10.9) min,细胞计数为(45.8±26.5) ×105/片,2种细胞间层片脱附时间和细胞计数的差异均有统计学意义(P=0.002、0.028).组织病理学检查显示,TRSs上的ADSCs呈1～3层排列,而OMECs呈4～5层覆层结构.免疫组织化学染色显示,ADSCs和OMECs细胞层片细胞角蛋白12(CK12)及干细胞标志物p63、ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)均呈阳性表达.扫描电子显微镜下观察可见ADSCs和OMECs表面均有致密的上皮微绒毛结构,细胞间连接紧密.结论 自制的TRSs可作为脂肪干细胞的培养支架,ADSCs取材广泛,TRSs上培养的ADSCs层片细胞活力好,可操作性强,可作为眼表重建新的种子来源.
