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中药补肾固齿丸对牙周炎治疗作用机制的探讨
目的 研究补肾固齿丸水提液对LPS影响人牙周膜成纤维细胞生长及分泌IL-1β作用的调节能力,初步探讨补肾固齿丸的治病作用机理,以期为更好的利用中药治疗牙周病提供理论依据.方法 人牙周膜成纤维细胞分别与脂多糖LPS 50μg/ml、LPS 50μg/ml+补肾固齿丸水提液12.5μg/ml、LPS 50μg/ml+补肾固齿丸水提液25μg/ml、LPS 50μg/ml+补肾固齿丸水提液50μg/ml 共同孵育6、72h,于6h收集细胞培养上清液,应用ELISA法检测细胞IL-1β分泌水平;72h应用MTT法检测存活细胞数量,评价细胞生长增殖情况.结果 LPS可显著抑制牙周膜成纤维细胞生长(OD=0.198±0.097),并刺激细胞IL-1β分泌水平显著升高(1.122±0.370 pg/ml)(P<0.01);而补肾固齿丸水提液25μg/ml和50μg/ml则可显著抑制LPS的细胞毒性作用(OD=0.354±0.055,OD=0.368±0.029)、细胞IL-1β分泌量也显著降低(0.685±0.168 pg/ml,0.525±0.143 pg/ml),差异有统计学意义(P<0.05).结论 补肾固齿丸有效治疗牙周病的作用机理可能与降低细菌对宿主细胞生长抑制的毒性作用以及调节宿主免疫反应作用有关.
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缺氧环境对牙周膜成纤维细胞增殖及凋亡的影响
目的：研究缺氧环境对牙周膜成纤维细胞的增殖及凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用氯化钴模拟法构建人牙周膜成纤维细胞缺氧模型。观察缺氧条件下牙周膜成纤维细胞形态变化,采用CCK-8检测细胞增殖情况,并用Western Blot方法检测凋亡相关因子p53、Bcl-2及caspase-7的表达变化。结果随着时间延长,缺氧组细胞数量减少,体积逐渐变小,细胞胞浆浓缩,细胞存活率降低。 Western Blot 结果显示缺氧组 p53、Bcl-2及caspase-7蛋白表达量随着缺氧时间延长逐渐升高。缺氧组p53蛋白、caspase-7表达高于常氧组,Bcl-2表达低于常氧组。结论缺氧环境可影响牙周膜成纤维细胞形态、增殖活性及凋亡相关蛋白的表达。
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压力作用时间对人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1的影响
目的:探讨压力作用不同时间对人牙周膜成纤维细胞表达TGF-β1的影响.方法:本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加1.0MPa的压力,分别持续1Omin、30min、50min、通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量.结果:加载1Omin组在细胞受力后的各个时段TGF-β1含量与对照组相比无显著性差异(P>0.05).加载30min组(0.51±0.06)和加载50min组(0.46±0.06)TGF-β1含量在细胞受力后的第12h同对照组(0.78±0.08)相比明显降低(P<0.05).结论:在一定加载时间内,人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1量随着压力作用时间的延长而有所降低.
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bFGF对成骨细胞和成纤维细胞生物学特性的影响
目的:明确bFGF对体外成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、矿化相关蛋白合成的影响,以探讨bFGF促进牙周组织再生的内在机制以及在牙种植体组织界面局部应用bFGF诱导类牙周膜形成的可行性.方法:同一只SD大鼠来源的两种细胞经传代培养至第四代,建立细胞迁移模型,分别在普通培养基和含bFGF的培养基中培养,观察测量细胞迁移速度,并分别测试两种细胞在普通培养基和含bFGF的培养基中的碱性磷酸酶(ALP)活性及Ⅰ型胶原的含量.结果:普通培养基培养时,成骨细胞迁移速度快于成纤维细胞;但牙周膜成纤维细胞加bFGF培养迁移速度明显高于其他各组;bFGF抑制成骨细胞的Ⅰ型胶原的合成和ALP的活性.结论:bFGF能明显促进牙周膜成纤维细胞的移行;bFGF能抑制成骨细胞的碱性磷酸酶活性.
关键词： 牙周膜成纤维细胞 成骨细胞 碱性成纤维细胞生长因子 -
牙龈和牙周膜成纤维细胞功能相关分子与基因差异表达研究进展
牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞均为毗邻相近组织的间充质细胞,具有同源性,但在牙周组织的生理,病理过程中发挥不同的作用,本文从二者在生物学功能和基因的表达的差别,进行综述.
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定量观察力值对人牙周膜细胞骨改建相关细胞因子表达的影响
目的 定量观察不同力值的机械牵张力对体外培养的人牙周膜细胞骨改建相关细胞因子的影响.方法 利用北京理工大学研制的细胞加力装置对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)施加不同大小的周期性牵张力(5％、10％细胞表面拉伸率),检测其对细胞的骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨保护素配体(receptor activator of nuclear factor kappa-Bligand,RANKL)及成骨相关转录因子RUNX2、Osterix表达的影响.实验结果用SPSS 13.0进行统计分析.结果 加力后RUNX2、Osterix在5％组表达量呈现时间依赖性增加,但变形量10％组增加出现的较早且之后会出现平台期;细胞受力后OPG在5％和10％组表达量均呈现时间依赖性增加,两组间不存在显著性差异;细胞受力后RANKL的表达量在两组中均受到抑制.结论 周期性牵张力刺激对人牙周膜细胞成骨相关因子RUNX2、Osterix和破骨相关因子OPG、RANKL的表达有一定的影响,并且在不同力值刺激下这些细胞因子的表达随时间变化的形式不同.
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Nd:YAG激光照射对提高人牙周膜成维细胞增殖力的作用
目的 观察Nd:YAG激光对人牙周膜成纤维细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响.方法 采用酶消化组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞,并进行波形蛋白及角蛋白的免疫细胞化学染色,对所培养的细胞进行鉴定.将牙周膜成纤维细胞分组,接受不同能量密度的Nd:YAG激光照射.测定牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性并观察其生长情况.结果 5个实验组的细胞增殖速度及碱性磷酸酶含量均高于对照组,其中能量密度为60 j/cm2组、80 j/cm2组、100 j/cm2组与对照组相比有统计学的差异.结论 低能量密度,短时间的Nd:YAG激光照射能促进牙周膜成纤维细胞的增殖,提高碱性磷酸酶活性.
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环孢素A联合脂多糖对牙周膜成纤维细胞增殖的影响
目的 探讨环孢素A(CsA)联合牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)增殖的影响.方法 改良组织块法培养hPDLFs,分别用CsA(10、100、200、400 ng/ml),Pg-LPS(10、100、1000 ng/ml),CsA(100 ng/ml)加Pg-LPS(100 ng/ml),CsA(100 ng/ml)加Pg-LPS(1000 ng/ml)作用于生长良好的第3～5代细胞,MTT法测其药物作用用下的增殖情况.结果 细胞经上述浓度CsA或Pg-LPS作用后形态无明显变化,CsA在100 ng/ml浓度情况下,促细胞增殖作用明显;高浓度Pg-LPS(1000 ng/ml)显著抑制细胞增殖,100 ng/ml CsA能够显著降低Pg-LPS(1000 ng/ml)对细胞增殖的抑制效应;CsA(100 ng/ml)与Pg-LPS(100 ng/ml)联合作用于细胞时,对细胞的增殖无明显影响.结论 在一定的浓度下,CsA促PDLF增殖作用明显;CsA能对抗脂多糖(LPS)抑制细胞增殖的效应.
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雌激素对牙周组织细胞的影响
雌激素在人体内具有广泛的生物学活性.它不仅对众多经典靶组织如生殖道、乳腺、骨骼、心血管系统的功能有调节作用,还对牙周组织内不同细胞的生长发育有影响.本文综述了牙周组织不同细胞中雌激素受体的分布情况,以及雌激素对不同细胞的影响.
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糖尿病患者牙周膜成纤维细胞凋亡的研究进展
糖尿病作为严重影响骨改建的代谢性疾病,可造成骨丧失.人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)是牙周组织修复与重建的前体细胞之一,且在牙周病病理变化和转归中占据重要的地位,发挥着极其重要的作用.糖尿病与牙周膜成纤维细胞凋亡是否存在一定的相关性,尚无统一定论.本文对糖尿病、牙周膜成纤维细胞凋亡之间的相互关系作一综述,旨在为临床中治疗伴糖尿病牙周炎的患者提供新的理论依据.
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雌激素对牙周膜细胞生物学性质的影响
目的:明确雌激素对体外牙周膜成纤维细胞迁移、增殖和碱性磷酸酶的影响,以探讨雌激素对牙周组织改建的影响.方法:SD大鼠来源的牙周膜成纤维细胞经传代培养至第四代,建立体外创伤模型,分别在普通培养基和含雌激素的培养基中培养,观察测量细胞迁移情况,运用MTT、酶联检测仪测定细胞的增殖速度,对细胞的ALP进行提取和测定.结果:MTT结果显示加入雌激素对该细胞的增殖无明显影响;在含雌激素的培养基中成纤维细胞的迁移速度加快;同时牙周膜成纤维细胞的ALP表达显著提高.结论:雌激素能明显促进牙周膜成纤维细胞的迁移,促进其分化.
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牙周膜成纤维细胞对成骨细胞细胞数量和碱磷酶活性的影响
目的:观察人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)对成骨细胞(Osteoblast cells,OBs)细胞数量和碱磷酶活性的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础.方法:建立人OBs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察人牙周膜成纤维细胞对成骨细胞细胞数量和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响.结果:3d和5d时,共培养组OBs细胞计数分别为4.5×104 及8.5×104,明显高于对照组,且两组分别与对照组OBs细胞计数有显著性差异(P<0.05).transwell共培养组与对照组相比,在3d时,两组OBs ALP活性有显著性差异( P<0.05),5 d及7 d时差异尤其显著( P<0.01),transwell共培养组OBsALP活性低于对照组.结论:人HPLFs能增加OBs的细胞数量,但抑制OBs ALP活性.
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内毒素对人牙周膜成纤维细胞增殖及IL-8分泌的影响
目的:观察不同浓度的内毒素(lipopolysaccharides,LPS)对牙周膜成纤维细胞增殖的影响及IL-8的分泌情况.方法:本实验共分为七组,牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)组、PDLFs+ 10μg/ml碱性成纤维细胞生长因子(Basic Fibroblast Growth Factor,BFGF)组、Iμg/mlLPS组、10μg/ml LPS组、100μg/mlLPS组、200μg/ml LPS组、500μg/ml LPS组.各组细胞进行培养,MTT法观察细胞增殖变化.取培养24h,96h的细胞上清液进行IL-8 ELISA检测.结果:与空白组牙周膜成纤维细胞相比,24h:1μg/mlLPS、10μg/mlLPS、100μg/ml LPS组无统计学差异.200μg/ml LPS、500μg/ml LPS组促进IL-8分泌,有显著性统计学差异.96h:与牙周膜成纤维细胞相比,1μg/mlLPS、10μg/ml LPS组无统计学差异.100μg/ml LPS、200μg/ml LPS组促进IL-8分泌,100μg/ml LPS、200μg/ml LPS组之间无统计学差异.500μg/ml LPS组抑制IL-8分泌,有显著性统计学差异.细胞增殖变化:BFGF促进牙周膜成纤维细胞增殖.l μg/ml LPS、100μg/ml LPS组与正常牙周膜成纤维生长增殖无差异.10μg/ml LPS可以促进牙周膜成纤维细胞增殖.200μg/ml LPS、500μg/ml LPS明显抑制PDLFs增殖.结论:不同浓度的内毒素对牙周膜成纤维细胞增殖、IL-8分泌合成释放有调节作用.
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TIMP-1对人牙周膜成纤维细胞增殖与ALP活性表达的影响
目的:探讨金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)对人牙周膜成纤维细胞的增殖与碱性磷酸酶(ALP)活性表达的影响.方法:采用MTr和ALP活性检测法,观察不同浓度的TIMP-1在第24、48和72 h对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(PDLF)的作用.结果:与对照组比较,1 ng/ml的TIMP-1在24、48和72 h,10 ng/ml的TIMP-1在48、72 h可显著促进PDLF的增殖;1 ng/ml的TIMP-1在24、48和72 h,10 ng/ml的TIMP-1在48 h对PDLC有显著增强ALP活性作用.结论:TIMP-1可促进人PDLF生长和分化.
关键词： 牙周膜成纤维细胞 金属蛋白酶组织抑制剂-1 MTT 碱性磷酸酶 -
银杏叶提取物对牙龈卟啉菌膜泡抑制牙周膜成纤维细胞活性的影响
目的：探讨银杏叶提取物(GBE)对牙龈卟啉菌(Pg)膜泡(ECV)的影响。方法采用酶动力学方法,测定银杏叶提取物对膜泡生物活性的阻断作用和膜泡对人牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果与空白对照组相比,50μg/ml ECV可明显抑制人牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶(ALP)的活性(P<0.01),与膜泡组相比差异有统计学意义(P<0.01),且随着浓度升高而升高。结论膜泡生物活性可被银杏叶提取物有效阻滞,从而促使牙周膜成纤维细胞向成骨细胞转化,有利于病变的愈合。
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PI3K-Akt信号通路在尼古丁致牙周膜成纤维细胞细胞凋亡中的保护作用
目的 探讨尼古丁诱导的牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)凋亡的信号转导机制.方法 向7×l04/ml的PDLFs细胞悬液中分别加入0(对照)、1、10、100μg/ml的尼古丁溶液培养24h.采用RT-PCR法检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,Akt)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA的表达量,采用Western blot法检测Akt蛋白的Thr308、Ser473位点磷酸化和caspase-3蛋白的表达量.结果 与对照组比较,各剂量尼古丁染毒PDLFs细胞的PI3K mRNA表达水平上调(P＜0.05),Akt mRNA表达水平下调(P＜0.05),PDLFs细胞Akt在Thr308、Ser473位点磷酸化水平均升高(P＜0.01),caspase-3mRNA和蛋白的表达水平均升高(P＜0.05,P＜0.01).且随着尼古丁染毒剂量的升高,PI3K mRNA的表达水平呈逐渐增高的趋势,Akt mRNA的表达水平呈逐渐降低的趋势,PDLFs细胞Akt在Thr308位点磷酸化水平呈逐渐增高的趋势,PDLFs细胞Akt在Ser473位点磷酸化水平呈先上升后降低的趋势,PDLFs细胞caspase-3 mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增高的趋势.结论 PI3K-Akt信号通路在尼古丁致PDLFs细胞凋亡中具有抗凋亡的保护作用.
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脂多糖对牙周膜成纤维细胞IL-8和RANKL基因表达的调节作用
目的:研究牙龈卟啉单胞菌(P.g.)脂多糖(LPS)列人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中白细胞介素8(IL-8)和NF-κB受体活化因子配体(RANKL)基因表达的调节.方法:取第4代hPDLFs细胞在含有10％胎牛血清(FCS)的DMEM培养基中培养至完全融合后,分别用0.01、0.1、1、10、100 mg/L P.g.LPS作用hPDLFs 10h,实时荧光定量PCR检测IL-8和RANKL mRNA的表达水平.结果:P.g.LPS浓度依赖性地刺激hPDLFs中IL-8和RANKL mRNA的表达水平升高,10 mg/L P.g.LPS上调IL-8 mRNA水平,达到峰值(P＜0.01);100 mg/L P.g.LPS显著增强RANKL mRNA水平(P＜0.01).结论:高浓度的P.g.LPS明显刺激hPDLFs中IL-8和RANKL的基因表达增强.
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低氧对种植术后骨重建细胞的影响
牙种植术后常造成牙周低氧,加重了牙槽骨的骨吸收,导致骨量不足,是即刻种植或延期种植失败的主要原因之一.如何促进拔牙窝新骨形成和避免拔牙区牙槽骨的吸收萎缩,对于后期的种植修复具有重要的临床意义.未来的牙槽骨增量技术将会更多地涉及到分子、细胞、组织工程、基因治疗等领域.成骨细胞、破骨细胞和牙周膜成纤维细胞是骨重建过程中的重要细胞.本文主要从细胞水平综述低氧对种植术后骨重建的影响,为新的骨增量方法提供理论基础.
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高浓度脂多糖对骨唾液酸蛋白和IL-8基因表达的影响
目的 研究高浓度牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g.)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)中骨唾液酸蛋白(Bone sialoprotein,BSP)和白细胞介素8(Interleukin 8,IL-8)基因表达的调节.方法 10mg/L P.g.LPS处理第4-5代体外培养的hPDLFs不同时间(1、4、8、12、24小时)后,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测骨唾液酸蛋白(BSP)和IL-8基因的表达水平.结果 10mg/L P.g.LPS作用hPDLFs 1、4小时后BSP mRNA的表达水平稍有下降(P＞0.05),并在刺激8、12、24小时后BSP mRNA的表达水平显著下降(P＜ 0.01);此外10mg/L P.g.LPS明显上调hPDLFs中IL-8 mRNA表达水平,在处理8h时刺激作用为明显,达到高峰(P＜0.01).结论 高浓度(10mg/L) P.g.LPS对hPDLFs的BSP基因表达有抑制作用,而对IL-8基因表达有增强作用.
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IL-1β作用于人牙周膜成纤维细胞后TRAF6蛋白表达的研究
目的 通过研究IL-1β干预下,TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的蛋白表达,为细胞因子网络对细胞功能调控作用的研究提供新资料.方法 原代培养人牙周膜成纤维细胞,并进行免疫学鉴定.取5～8代细胞以IL-1β梯度浓度干预,采用免疫组织化学方法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达.结果 TRAF6在正常的人牙周膜成纤维细胞中呈阴性表达,IL-1β干预后,TRAF6呈阳性表达,并且随IL-1β干预的浓度的升高而增强.结论 IL-1β作用后,TRAF6在牙周膜成纤维细胞出现表达,且与IL-1β作用浓度相关.
关键词： 牙周膜成纤维细胞 细胞培养 肿瘤坏死因子受体相关因子6
