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釉基质衍生物对口腔相关细胞作用的研究进展
釉基质衍生物(enamel matrix derivative,EMD)已被广泛应用于口腔软硬组织的重建治疗,在促进组织再生方面发挥着重要的作用,日益成为组织工程和再生医学研究的热点.本文将釉基质衍生物对常见口腔相关细胞的研究背景、研究现状等进行综述,并对未来应用前景进行展望.
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牙龈和牙周膜成纤维细胞功能相关分子与基因差异表达研究进展
牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞均为毗邻相近组织的间充质细胞,具有同源性,但在牙周组织的生理,病理过程中发挥不同的作用,本文从二者在生物学功能和基因的表达的差别,进行综述.
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环孢素A和肿瘤坏死因子α对人牙龈成纤维细胞增殖的影响
目的 研究环孢素A(cyclosporinA)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对体外培养人牙龈成纤维细胞增殖的影响,探讨牙龈炎症与药物性牙龈增生的关系及环孢素A所致牙龈增生的相关机制.方法用原代培养的方法获取5名健康人的牙龈成纤维细胞,体外培养、传代后取其中1个生长良好的组织块4～8代细胞用于实验.按以下条件进行实验分组:A组:空白对照组；B1组:10 μg/L环孢素A,B2组:50 μg/L环孢素A,B3组:250 μg/L环孢素A,B4组:1250 μg/L环孢素A；C组:5μg/L TNF-α; D1组:10 μg/L环孢素A+5μg/L TNF-α,D2组:50 μg/L 环孢素 A+5μg/L TNF-α,D3组:250 μg/L环孢素A+5μg/L TNF-α,D4组:1250 μg/L环孢素A+ 5 μg/L TNF-α.将条件培养液分别作用于牙龈成纤维细胞,培养3、5、7d后用甲基噻唑基四唑法测定细胞的增殖情况.结果不同质量浓度的环孢素A作用于成纤维细胞后,细胞的增殖受到抑制,A值下降,其中B1、B2、B3组与A组相比差异无统计学意义,B4组与A组相比差异具有统计学意义(P =0.001)；5μg/L的TNF-α作用于成纤维细胞可以刺激细胞的增殖,A值(0.542)与A组(0.441)相比显著升高(P＜0.01).环孢素A和TNF-α共同作用于成纤维细胞后,D1、D2、D3组A值均较A组升高,但均较C组显著降低(P＜0.05).D4组细胞增殖显著增加,与C组相比差异具有统计学意义(P＜0.01).结论环孢素A对成纤维细胞的增殖无促进作用,高浓度时可抑制细胞的增殖；TNF-α可以促进成纤维细胞的增殖；高浓度环孢素A与TNF-α共同作用于成纤维细胞可促进成纤维细胞增殖,提示在一定浓度下环孢素A可能放大了TNF-α刺激成纤维细胞增殖的效应.
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人转化生长因子β1基因转染牙龈成纤维细胞促进牙周组织再生的动物实验
目的 评价人转化生长因子β1(human transform growth factor-β1,hTGF-β1)基因转染犬自体牙龈成纤维细胞(gingival fibroblast,GF)在治疗人工Ⅱ度根分叉骨缺损中作为组织工程种子细胞所发挥的作用.方法 将hTGF-β1基因转染后的犬自体GF作为组织工程种子细胞,与海螵蛸骨天然纳米羟基磷灰石(cuttlebone-transformed nanometer hydroxyapatite,CBHA)体外复合,制备犬下颌前磨牙区的Ⅱ度根分叉人工骨缺损模型,应用随机化完全区组设计方法将36颗犬前磨牙分为以下4组:①阴性对照组:不作任何处理直接缝合;②阳性对照组:置入牙周韧带细胞(periodontal ligament cell,PDLC)-CBHA复合物;③转染GF组:置入hTGF-β1基因转染犬GF-CBHA复合物;④未转染GF组:置入犬GF-CBHA复合物.每组9颗牙.对各组进行组织学观察和测量,并作示踪实验.结果 与阴性对照组比较,转染GF组、阳性对照组均可显著促进根分叉区牙周组织的再生(P＜0.01),两组的新生牙骨质高度(NC)、新生牙槽骨高度(NB)及新生结缔组织高度(NCT)分别为:(2.97±0.50)、(4.29±0.26)及(4.73±0.06)mm;(3.09±0.26)、(4.46±0.25)及(4.69±0.10)mm,且两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).未转染GF组虽可促进牙槽骨再生[NB=(3.46±0.32)mm],但牙根有一定程度的吸收;示踪实验显示:转染后的GF在新生牙槽骨及牙周膜组织中均可发现.结论 hTGF-β1基因转染后的犬自体GF作为组织工程种子细胞,与CBHA体外复合后在人工Ⅱ度根分叉骨缺损的治疗中有显著的促牙周组织再牛的作用,参与了新牛牙槽骨及牙周膜的形成.
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人类β防御素3对人牙龈成纤维细胞增殖及分泌前列腺素E2、基质金属蛋白酶1的影响
目的 观察人类β防御素3(human β-defensin-3,HBD-3)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)增殖及分泌前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)的影响,了解HBD-3调节牙周免疫的分子机制.方法 采用组织块原代培养法培养HGF,取P4代细胞接种于96孔板,分为对照组和4个实验组,实验组分别加入100μl质量浓度为0.3、1.0、3.0、10.0 mg/L的HBD-3,对照组加入等量达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium,DMEM)培养液,37 ℃、5％ C02、饱和湿度条件下培养7d,以甲基噻唑基四唑法检测各组HGF的增殖情况并绘制生长曲线,以酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组12h时培养上清液中PGE2及MMP-1的含量.各组结果数据的总体比较采用单因素方差分析,组间比较采用双侧t检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 细胞生长曲线显示各组HGF数量均随时间延长而增加,且与HBD-3质量浓度呈一定的依赖性;ELISA结果显示1.0 mg/L HBD-3组培养上清液中PGE2及MMP-1含量高,分别为(350.56 ±63.96) ng,/L和(13.22± 0.59) μg/L,且与对照组、10.0 mg/L HBD-3组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HBD-3可以促进HGF增殖,且呈浓度依赖性;低质量浓度的HBD-3上调HGF的PGE2及MMP-1分泌,在牙周免疫反应中发挥一定作用.
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牙龈成纤维细胞作为种子细胞在组织工程研究中的应用进展
组织工程研究中种子细胞的来源十分广泛,研究多以胚胎干细胞和成体干细胞为主.其中,成体干细胞中又以骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞等的应用为常见.然而,在细胞培养过程中无论哪种来源的间充质干细胞都存在一系列的缺陷,如早期衰老问题、鉴定时缺乏特异性表面标志物、取材受限制问题等.牙龈成纤维细胞已被证实具有多向分化的潜能,其修复和再生能力极强,取材方便,不留瘢痕等优点使其成为组织工程研究中种子细胞的又一新的来源.
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人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定
目的:分离培养人牙龈成纤维细胞,为进一步研究细胞因子对牙龈成纤维细胞的调控作用提供实验条件.方法:用组织块法培养人牙龈成纤维细胞,并进行形态学和免疫学鉴定.结果:牙龈成纤维细胞原代培养成功并稳定传代,细胞呈长梭形或星形,免疫学鉴定抗波形丝蛋白抗体阳性,抗角蛋白抗体阴性,为中胚层来源的成纤维细胞.结论:组织块法培养的细胞符合牙龈成纤维细胞的形态学和免疫学特征,可作为体外细胞模型,为研究细胞因子对其功能的调控作用奠定基础.
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烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-2、MMP-13表达实验探讨
目的：观察不同种类烤瓷牙金属基底冠浸提液对人牙龈成纤维细胞中 MMP-2、MMP-13表达水平的影响。方法制备纯钛、钴铬、镍铬和金合金提取液，通过组织块改良的方法来对牙龈周围的纤维细胞进行培养，经过浸提液浸泡之后，分别收集样本上的细胞清液，作为MMP-13表达水平的测定样本，测定方法为ILISA测定法。结果钴铬合金和镍铬合金MKMP-13表达水平高于阴性对照组和其他实验组，各项指标对比，差异有统计学意义（P＜0.05）；金、纯钛合金组MMP-13表达水平与阴性对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论钴铬合金和镍铬合金MKMP-13表达水平较高，一定程度上会损伤牙龈成纤维细胞；金、纯钛合金生物相容性比较好。
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纳米银改性钛片细胞生物毒性实验研究
目的 观察纳米银改性钛片对人牙龈成纤维细胞毒性的影响.方法 通过MTT、扫描电镜、荧光显微镜观察并分析比较人成纤维细胞在光滑钛片和纳米银钛片表面的生长状况、形态变化.结果 MTT结果显示在各个时点各组间均无显著性差异(P＞0.05);扫描电镜显示对照组与实验组相比,细胞排列较稀疏、形态扁平;荧光染色显示人牙龈成纤维细胞形态典型,呈梭型或者多边形,细胞微丝明显,细胞有些单个存在,有些相互连结在一起,两组钛片细胞骨架无明显差异.结论 纳米银改性钛片对人牙龈成纤维细胞生长增殖无不良影响,改性钛片无细胞毒性,能为材料的临床运用提供理论依据.
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钙拮抗剂维拉帕米抑制牙龈成纤维细胞从组织块中的移动
目的评价维拉帕米对牙龈成纤维细胞移出的影响.方法采用牙龈组织块培养的方法,在培养液中加入10-4M维拉帕米,观察牙龈成纤维细胞的移出.结果在维拉帕米的作用下,组织块周围无细胞移出.撤除维拉帕米后,组织块周围出现成纤维细胞.结论维拉帕米抑制牙龈成纤维细胞的迁移.
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IL-1α刺激人牙龈成纤维细胞产生IL-11和IL-6的比较研究
目的比较IL-lα刺激牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)IL-11和IL-6的表达和调控.方法收集细胞上清液,ELISA法测定IL-11/IL-6的水平;提取细胞mRNA,实时定量RT-PCR法分析IL-11mRNA的表达.结果IL-1a显著增加HGF IL-11/IL-6的表达(P＜0.05),其中IL-6水平增加为显著;HGF受到IL-lα刺激IL-11mRNA表达明显增强.吲哚美欣在蛋白质(P＜0.05)和mRNA水平都显著抑制了IL-lα刺激的HGF IL-11的产生,但对IL-6的产生在蛋白质水平则有不同影响,五株HGF细胞系中有四株IL-6的产生受到显著抑制(P＜0.05),另一株则表现为轻微促进IL-6的产生.IL-1α刺激IL-11的产生也都受到staurosporine的抑制(P＜0.05),而IL-6的产生在细胞株HGF-2受到显著抑制(P＜0.05),在HGF-3株则不受影响.结论IL-lα刺激HGF显著增加IL-11/IL-6的产生,IL-11与IL-6在该刺激产生过程中受内源性前列腺素及蛋白激酶C信号途径调控的机理不完全相同.
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氯化镧对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌白细胞介素-8的影响
目的探讨稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌白细胞介素-8(IL-8)的影响.方法组织块法培养人牙龈成纤维细胞,用脂多糖对其进行诱导,ELISA法检测IL-8分泌量.结果经氯化镧处理的成纤维细胞虽有脂多糖诱导但细胞分泌IL-8量明显低于对照组(P＜0.01).结论氯化镧具有抑制脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-8的作用,据此推测氯化镧的抗炎作用机理可能与其抑制脂多糖介导的炎症因子释放有关.
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牙龈成纤维细胞及牙周韧带成纤维细胞细胞标记物的研究现况
发育中的牙周组织,间充质为疏松的结缔组织,含有大量的星网状细胞及丰富的细胞外基质,其星网状细胞为许多成熟牙周组织细胞的前体细胞.口腔上皮诱导胚胎期颌骨中间充质细胞形成具有成牙特性的细胞,牙滤泡的间充质则具有分化成成牙骨质细胞、成骨细胞和牙周韧带中的成纤维细胞(periodontal ligament cell, PDLC)[1].关于牙龈成纤维细胞(gingival fibroblast,GF)的发育起源还不清楚,牙齿未萌出前,龈嵴和后期的龈垫部位即为牙齿萌出的部位,龈垫及完全发育的固有牙板部位的牙龈成纤维细胞可能来自于滤泡周间充质(perifollicular mesenchyme).推测新形成的牙周韧带也可能参与牙龈成纤维细胞系的形成[2].
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四种烤瓷冠基底金属浸提液干预人牙龈成纤维细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂的表达
背景:修复材料的生物相容性是决定临床修复效果的重要因素之一.目的:通过比较4种金属浸提液对人牙龈成纤维细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂表达的差异探索其生物相容性.方法:选用活体牙龈,原代培养人牙龈成纤维细胞,采用镍铬、钴铬、纯钛及金钯合金4种金属浸提液进行干预,以未进行干预的细胞作为对照.结果与结论:ELISA检测结果显示镍铬和钴铬合金浸提液干预后细胞尿纤溶酶原激活剂表达增加;免疫荧光实验结合电镜观察发现镍铬和钴铬合金浸提液干预的细胞胞质荧光染色深,分布均匀,遍布整个细胞,提示细胞Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂表达增加.而纯钛和金钯合金浸提液对细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂的表达无影响.说明纯钛和金钯合金的生物相容性优于镍铬和钴铬合金.
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三种排龈线对体外培养人牙龈成纤维细胞毒性的比较
背景:近年来,国内外学者研究热点主要集中在排龈药物的排龈效果,而对商品化排龈线的生物相容性研究较少.目的:评价3 种排龈线对人牙龈成纤维细胞的毒性作用,为指导临床选择理想的排龈线提供理论依据.方法:3 种排龈线(含肾上腺素排龈线、含硫酸铝排龈线、不含药排龈线)浸透在含体积分数为10%胎牛血清的DMEM中24 h,再按1∶1 和1∶4 浓度稀释,分别作用于体外培养的牙龈成纤维细胞,阴性对照组为含体积分数为10%胎牛血清的DMEM.结果与结论:MTT 比色法结果显示,3 种排龈线均可抑制人牙龈成纤维细胞生长及增殖,3 种排龈线浸提液1∶1 稀释后的毒性明显大于1∶4 稀释组和对照组(P < 0.05),肾上腺素排龈线浸提液1∶4 稀释后的毒性也明显大于对照组(P < 0.05).透射电镜观察显示肾上腺素组部分细胞出现凋亡.结果可见3 种排龈线对牙龈成纤维细胞都有一定的毒性,肾上腺素排龈线毒性大,硫酸铝排龈线毒性次之,不含药排龈线毒性小.
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hbFGF基因及hBMP-7基因修饰的组织工程化复合物联合应用促进牙槽骨再生动物实验研究
目的 观察人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因及人骨形成蛋白-7(hBMP-7)基因修饰的组织工程化复合物联合应用对牙槽骨缺损再生的影响.方法 利用hbFGF基因转染Beagle犬牙龈成纤维细胞(GFs),并将其接种于脱细胞真皮基质(ADM)形成组织工程化复合物,同时以hBMP-7基因转染Beagle犬骨髓基质细胞(BMSCs),将其与胶原膜BME-10X复合,共同植入Beagle犬的人工牙周组织缺损区,通过组织学观察和测量分析,评价其对牙槽骨再生的影响.结果 术后6、12周,光镜下观察可见转染GFs复合ADM组和未转染GFs复合ADM组均较单纯BMSCs复合BME-10X组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质样组织生长；术后12周各组相对于术后6周的各组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质样组织.新生牙骨质与新生牙槽骨测量显示,转染hbFGF的GFs/ADM复合物的联合应用能显著提高hBMP-7基因修饰的组织工程化复合物修复牙周组织缺损的程度.结论 转染bFGF的GFs/ADM复合物有助于促进hBMP-7基因修饰的组织工程化复合物对牙周组织缺损的修复.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 牙龈成纤维细胞 骨形成蛋白-7 牙槽骨 牙骨质 -
碱性成纤维细胞生长因子基因修饰的组织工程化复合物促进牙龈组织再生实验研究
目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因修饰的组织工程化复合物对牙龈组织缺损再生的影响.方法 本研究于2007年7月至2009年1月在福建省高校口腔医学重点实验室进行.利用bFGF基因转染Beagle 犬牙龈成纤维细胞(GFs),并将其接种于脱细胞真皮基质(ADM)形成组织工程化复合物,植入Beagle犬的人工牙周组织缺损区,通过对治疗前后牙周指标测量分析,评价该组织工程化复合物对牙龈组织再生的影响.结果 实验前后附着丧失差值测定显示GFs与ADM复合物组及转染bFGF基因的GFs复合物组之间无显著性差异,与空白对照组相比均有明显增加(P＜ 0.05).角化龈宽度差值,6周时转染基因组有明显增加,12周时两实验组均比空白对照组明显增加(P＜0.05).结论 复合GFs的ADM可能有助于改善附着丧失的程度及角化龈宽度,而bFGF的作用并不肯定.组织工程技术能有效促进牙龈组织再生.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 牙龈成纤维细胞 脱细胞真皮基质 附着丧失 角化龈宽度 -
RGD肽修饰纯钛表面对人牙龈成纤维细胞和上皮细胞黏附影响研究
目的 探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽修饰纯钛表面对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)和上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGE)初期黏附行为的影响.方法 应用羰基二咪唑(1,1’-carbonyldiimidazole,CDI)活化法将含RGD的短肽共价连接到纯钛表面,免疫荧光法检测钛表面RGD肽.评价RGD接枝与未接枝纯钛表面对HGF和HGE初期黏附的影响.结果 RGD肽可以通过CDI活化方法接枝到纯钛表面,HGF和HGE在RGD接枝钛表面黏附和增殖的细胞数量显著高于未接枝钛表面,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 生物活性肽RGD接枝纯钛表面可有效促进HGF和HGE在其表面的黏附.
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尼古丁对人牙龈成纤维细胞中抑癌基因WWOX表达的影响
目的 观测不同浓度尼古丁培养液对体外培养的人牙龈成纤维细胞(hmu-na gingival fibroblast,HGF)内抑癌基因WWOX转录水平的影响,从分子水平探讨吸烟对口腔肿瘤发生的影响.方法 取第5代HGF,以FBS作为空白对照组,实验组分别加入终浓度为0.01、0.1、1 μg/mL的尼古丁,标准条件下培养4天,提取细胞总RNA进行RT-PCR反应,测量基因转录水平.结果 WWOX基因mRNA在空白组的比值为0.89 720,加入尼古丁培养液后HGF中WWOX基因mRNA表达水平降低,低浓度组为0.88 650,中浓度组为0.75 320,高浓度组为0.61 760.结论 尼古丁影响了HGF中WWOXmRNA的转录,随着尼古丁浓度的增加WWOXmRNA合转录水平降低.
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环孢素A对大鼠牙龈成纤维细胞TGF-β/Smad3通路的影响
目的:体外实验研究环孢素A (cyclosporine A,CsA)对大鼠牙龈成纤维细胞TGF-β/Smad3通路的影响,探讨CsA所致药物性牙龈增生的发生机制.方法:使用CCK-8法观察100、200、400和800 ng/mL CsA对大鼠牙龈成纤维细胞增殖的影响.实时荧光定量PCR检测200 ng/mL CsA作用下,牙龈成纤维细胞中TGF-β1、Smad3和Ⅰ型胶原的mRNA表达变化;蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光实验检测TGF-β1、Smad3、p-Smad3和Ⅰ型胶原的蛋白表达变化.细胞划痕实验观察200 ng/mL CsA对牙龈成纤维细胞迁移能力的影响.采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析.结果:大鼠牙龈成纤维细胞在200 ng/mL CsA作用下,细胞增殖和迁移能力明显增强;200 ng/mL CsA显著上调牙龈成纤维细胞中TGF-β1和Ⅰ型胶原的mRNA表达,蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光实验提示,TGF-β1、p-Smad3和Ⅰ型胶原的表达同样显著上调.结论:CsA可能通过激活牙龈成纤维细胞的TGF-β/Smad3信号通路,从而促进牙龈成纤维细胞增殖、迁移和胶原分泌,导致牙龈增生.
