首页 > 文献资料
-
人重组骨形成蛋白2对成牙骨质细胞DNA合成能力的影响
骨形成蛋白可以促进牙周组织的再生.其中骨形成蛋白2的诱骨活性强.为观察人重组骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein-2, rhBMP-2)对牛成牙骨质细胞(cementoblast, CB)DNA合成能力的影响,并与牙周膜细胞(periodontal ligament cell, PDLC)相比较,我们做了如下研究,以期为其临床应用提供实验基础.
-
成牙骨质细胞的研究进展
由成牙骨质细胞形成的牙骨质在牙周病治疗过程中意义重大,但迄今为止,我们对于牙骨质及形成牙骨质的成牙骨质细胞知之甚少.从成牙骨质细胞着手,建立体外培养的成牙骨质细胞系是进行这一领域研究的关键.本文就成牙骨质细胞目前的研究现状对其作一简要综述.
-
人重组白细胞介素-6对成牙骨质细胞的生长及分泌骨钙素能力的影响
目的:了解rhIL-6对成牙骨质细胞(cementoblasts, CBs)增殖活性及分泌骨钙素(osteocalcin, OC)能力的影响.方法:试验所用的CBs为用组织块法联合酶消化法培养所得的新生牛CBs.实验组培养液为10%(体积分数)FCS+RPMI1640加不同(质量)浓度的rhIL-6,对照组不加rhIL-6.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察CBs生长及存活状态;放射免疫分析法测定CBs培养上清液中OC的含量.结果:rhIL-6对CBs的生长有抑制作用,并呈剂量依赖趋势,但无统计学意义(P>0.05);同一(质量)浓度rhIL-6在不同的培养时间段对CBs分泌OC的影响不同,除0.1 μg*L-1 IL-6组外,1、10、100 μg*L-1组上清液中的OC浓度在初的5 d内有明显增高,以100 μg*L-1组显著,呈浓度依赖性,但在第7天时,100 μg*L-1组的OC浓度明显下降至仅略高于第3天的水平.0.1、1和10 μg*L-1组在第3天和第7天时,OC浓度均低于空白对照组.结论: IL-6可能通过调节CBs的生长和OC的分泌而在CBs的代谢及牙骨质的形成、修复中发挥一定的作用.
-
机械张应力刺激对成牙骨质细胞功能活性的影响
目的 探讨机械性张应力作用对成牙骨质细胞增殖及分化功能的影响.方法 采用流式细胞术及RT-PCR对接受了不同时间点张应力作用的成牙骨质细胞OCCM30进行细胞周期活性变化的检测及成骨相关矿化基因mRNA的检测.结果 各时间点间加力组增殖指数(PI)与0h相比差异均具统计学意义;3h,6h,12h,18h加力组与各自的对照组差异具有统计学意义;周期性张应力可规律性促进OCCM30相关矿化基因Runx2、Osterix、ALP、Col ⅠmRNA的表达.结论 周期性张应力刺激可引起成牙骨质细胞的细胞周期和增殖活性的变化,可促进OCCM30相关矿化基因Runx2、Osterix、ALP、Col Ⅰ mRNA的表达.
-
牙龈成纤维细胞及牙周韧带成纤维细胞细胞标记物的研究现况
发育中的牙周组织,间充质为疏松的结缔组织,含有大量的星网状细胞及丰富的细胞外基质,其星网状细胞为许多成熟牙周组织细胞的前体细胞.口腔上皮诱导胚胎期颌骨中间充质细胞形成具有成牙特性的细胞,牙滤泡的间充质则具有分化成成牙骨质细胞、成骨细胞和牙周韧带中的成纤维细胞(periodontal ligament cell, PDLC)[1].关于牙龈成纤维细胞(gingival fibroblast,GF)的发育起源还不清楚,牙齿未萌出前,龈嵴和后期的龈垫部位即为牙齿萌出的部位,龈垫及完全发育的固有牙板部位的牙龈成纤维细胞可能来自于滤泡周间充质(perifollicular mesenchyme).推测新形成的牙周韧带也可能参与牙龈成纤维细胞系的形成[2].
-
中药黄芩苷影响人牙周膜细胞增殖的时间效应
牙周膜细胞(periodontal ligament cell,PDLC),是一种具有多向分化功能的群体细胞,具有趋化、黏附、增生、生物合成和分化为成骨细胞、成牙骨质细胞和形成矿化组织等多项生物学功能[1].牙周膜细胞在牙周组织的再生和修复中起重要作用,但有关黄芩苷对牙周膜细胞增殖影响的研究,国内报道较少.
-
Wnt5a在小鼠牙骨质发育中的表达特点及其对成牙骨质细胞分化的影响
目的:探讨Wnt家族5A蛋白(Wnt5a)在小鼠出生后牙骨质中的表达特点以及其对体外培养成牙骨质细胞分化的影响,阐明Wnt非经典通路调控牙根发育的机制.方法:选择出生后0.5、4.5、10.5、16.5、20.5、24.5、26.5和30.5 d昆明小鼠并按以上相应时间点分组,每组3只;在相应时间点采用脱臼法处死小鼠,分离下颌第一磨牙及牙周组织.免疫组织化学染色法观察小鼠牙体和牙周组织中Wnt5a的表达特点.将小鼠成牙骨质细胞OCCM30分为实验组和对照组.实验组加入200 μg·L-1重组Wnt5a蛋白,对照组无添加;提取细胞总RNA.RT-PCR法检测2组OCCM30细胞中Ocn、Opn、Al p、Bsp、Wnt5a和Runx-2基因的相对表达水平.结果:小鼠出生后0.5d,第一磨牙牙胚中无Wnt5a阳性表达;出生后4.5d,成釉细胞和成牙本质细胞中Wnt5a阳性表达较强;出生后16.5d,可见成牙骨质细胞中Wnt5a呈阳性表达;出生后20.5～30.5 d,成牙本质细胞和牙周膜细胞中Wnt5a呈阳性表达.与对照组比较,实验组成牙骨质细胞中Ocn和Alp基因相对表达水平降低(P＜0.05).结论:Wnt5a在牙根发育过程中的表达特点为从无到有,呈现规律性表达;Wnt5a下调分化基因的表达,在牙骨质发育中发挥重要作用.
-
论破牙细胞
牙根的生理性吸收是乳牙所特有的现象,其机制迄今尚有不明之处.目前不少学者在其组织形态学,细胞生物化学及分子生物学等方面进行了研究.一、组织学表现乳牙牙根进行生理性吸收时,光镜下可见肉芽样的吸收组织(resorption tissue)[1,2,3],主要为细胞成分和扩张的血管.细胞成分由大量的破牙细胞(odontoclasr)及其它间叶细胞构成,包括成牙骨质细胞、成纤维细胞、巨噬细胞和中性粒细胞.吸收组织可在牙本质、牙骨质、牙釉质[1,4]及前期牙本质[5]表面形成各种吸收陷窝,呈波浪形.其中,破牙细胞起重要的作用.
-
甲状旁腺激素相关蛋白与成牙骨质细胞
成牙骨质细胞主要位于牙骨质表面,是由牙囊细胞分化而来.牙骨质覆盖于牙根表面,具有保持牙周组织平衡的作用.能否促进成牙骨质细胞形成新的牙骨质是评价牙周疾病治疗效果的重要方面.近年来一些研究对多肽类生长分化因子调控成牙骨质细胞生物活性的作用和机制进行了探讨,取得了新的进展,该文对甲状旁腺激素相关蛋白对成牙骨质细胞的调控作用进行综述.
关键词： 成牙骨质细胞 甲状旁腺激素相关蛋白 信号传导 -
微阵列芯片分析成牙骨质细胞矿化过程中microRNA表达谱的差异
目的:诱导小鼠成牙骨质细胞矿化,研究在成牙骨质细胞矿化过程中microRNA表达谱的变化.方法:体外培养小鼠成牙骨质细胞系OCCM30,使用抗坏血酸、β-甘油磷酸钠和地塞米松诱导成牙骨质细胞矿化.实时荧光定量PCR(qPCR)检测碱性磷酸酶和骨钙蛋白表达量变化来验证矿化情况.应用miRNA microarray芯片技术,分析成牙骨质细胞矿化过程中miRNA表达谱的变化.QPCR对芯片结果进行验证.结果:成功诱导了成牙骨质细胞的矿化.MiRNA microarray芯片检测发现成牙骨质细胞矿化过程中miRNA表达谱出现明显改变,其中上调的有4个,下调的有39个.QPCR证明芯片结果准确可靠.结论:建立了小鼠成牙骨质细胞矿化的细胞模型,应用miRNA芯片发现小鼠成牙骨质细胞矿化过程中差异表达的miRNA,提示这些miRNA可能参与成牙骨质细胞矿化过程的调控.
-
信号素3A对成牙骨质细胞系OCCM-30增殖和矿化功能影响的实验研究
目的:初步探讨信号素3A(Semaphorin3A,Sema3A)对成牙骨质细胞增殖、矿化的影响.方法:采用不同浓度的重组人Sema3A(0、0.5、1 mg/L)处理成牙骨质细胞OCCM-30.MTT法检测Sema3A对成牙骨质细胞增殖的影响,酶比活性法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的变化,实时荧光定量PCR法检测骨钙素(OCN),骨桥蛋白(OPN)和Runx2基因的表达,茜素红染色法检测矿化结节的形成.结果:Sema3A对成牙骨质细胞的增殖和ALP活性无明显影响.Sema3A抑制OCN和Runx2基因的表达(P＜0.05),并抑制矿化结节的形成.结论:Se-ma3A对成牙骨质细胞的增殖无明显影响,但对细胞的矿化功能起到抑制作用.
-
DAPT对成牙骨质细胞增殖活性的影响
目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对成牙骨质细胞株OCCM30的Notch信号通路是否有抑制作用,及对成牙骨质细胞增殖活性的影响,并初步探讨其作用机制.方法:γ-分泌酶抑制剂DAPT作用于OCCM30细胞,分别培养2、4、6d,采用RT-PCR检测Notch信号通路下游基因(Hes-1、Hey-1)和细胞周期相关基因(Cyclin D、Cyclin E)的表达,采用流式细胞术检测DAPT对OCCM30细胞周期的影响;DAPT作用于OCCM30细胞后,连续培养8d,采用CCK-8法测定细胞增殖活性.结果:实验组Hes-1、Hey-1、Cyclin D、Cyclin E mRNA的表达下降,G1/G0期细胞百分比增高,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);第2～8天,实验组细胞增殖活性(A450值)显著降低,呈浓度依赖性,且与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:DAPT能有效抑制成牙骨质细胞株OCCM30的Notch信号通路,抑制OCCM30细胞的增殖活性,其机制可能与DAPT下调细胞周期相关基因(Cyclin D、Cyclin E)表达有关.
-
牛成牙骨质细胞中骨相关标志物的表达
目的:探讨新生牛成牙骨质细胞 (cementoblast, CB) 中几种矿化相关蛋白在不同水平的表达及CB在体外矿化的能力.方法:体外分离培养CB,免疫细胞化学及原位杂交检测几种矿化相关蛋白:骨桥蛋白、骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原在CB中的表达;von Kossa 染色观察它们在体外形成矿化结节的能力.均以大鼠成骨细胞 (osteoblasts, OB)UMR106为阳性对照.结果:几种矿化相关蛋白在CB和OB中均呈阳性表达,在CB中的表达弱于OB;OPNmRNA、BSPmRNA在CB与OB中阳性表达;CB在体外可形成矿化结节,CB形成的矿化结节较OB形成者少而且小.结论:牛CB的生物学特性与OB相似,但其在体外形成硬组织的能力弱于OB.
-
釉基质衍生物促进牙周组织再生作用的研究进展
牙釉基质衍生物(enamel matrix derivatives,EMD,商品名Emdogain-Gel)有良好的促骨质和牙骨质再生能力,临床上也获得了较为理想的牙周再生效果,且优于传统的牙周翻瓣手术.EMD可以促进牙周韧带(periodontal ligament,PDL)细胞的迁移、黏附、增殖和细胞矿化小结的形成[1],同时还能刺激PDL细胞IGF-I、TGF-β1 mRNA水平的表达和其蛋白的分泌[2]并且减少和抑制成牙骨质细胞、牙囊细胞的矿化[3].EMD通过增加碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性提高骨钙素(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型胶原mRNA的表达和OCN的分泌以促进成骨细胞的分化成熟[4];同时它可以刺激局部生长因子(包括纤维结合蛋白的细胞外基质分子)的表达使细胞外基质的沉积,初期创伤的愈合,矿物沉积.这种促进牙周组织再生的过程与早期牙骨质形成、牙根发育的级联过程相似.
-
慢病毒介导的Stat3沉默对成牙骨质细胞分化、凋亡、自噬的影响
目的:构建Stat3-shRNA慢病毒表达载体,观察慢病毒介导的信号传导及转录激活因子3(Stat3)沉默对小鼠成牙骨质细胞OCCM-30分化、凋亡、自噬的影响及相关机制.方法:构建含有Stat3 shRNA的慢病毒载体,包装慢病毒后感染OCCM-30细胞,使用嘌呤霉素筛选出稳定细胞株.采用real-time PCR和Western Blot法检测慢病毒对Stat3的抑制效果.将细胞分成空白对照组、阴性对照组和Stat3抑制组三组,采用Western Blot检测Atg-5,Beclin-1,cleaved caspase-3,survivin蛋白水平的变化,使用real-time PCR法检测BSP,OCN,osterix在mRNA水平的变化.结果:成功构建Stat3-shRNA慢病毒表达载体并用慢病毒感染OCCM-30细胞,有效降低了Stat3的mRNA和蛋白的表达量.在mRNA水平上,Stat3抑制组BSP,OCN,osterix表达量降低.由Western Blot结果可知,Stat3抑制组Atg-5,Beclin-1,survivin蛋白表达量明显降低,cleaved caspase-3蛋白表达量增加.结论:慢病毒介导的Stat3-shRNA可有效抑制OCCM-30细胞内Stat3基因表达,从而抑制细胞分化和自噬,诱导凋亡,其相关机制可能是通过抑制Stat3信号转导通路实现的.
-
成牙骨质细胞体外矿化培养相关蛋白的时序性表达
目的检测骨涎蛋白(BSP)、硷性磷酸酶(ALP)、及牙骨质特异性蛋白-牙骨质附着蛋白(CAP)在成牙骨质细胞(CB)体外矿化培养过程中的时序性表达,并研究这一过程中CB的形态和生物学特征.方法将CB接种在盖玻片上,分别培养6、12h、1～6d后,取出盖玻片,应用免疫细胞化学的方法检测这三种蛋白在CB上的表达.结果CB接种在盖玻片6h后,在CB胞浆内三种蛋白都有表达;在2、3d,细胞聚集形成分层状,BSP、ALP表达减弱,CAP不表达;4d后,聚集的细胞增殖并分化,形成具有矿化功能的细胞结节.此时,3种蛋白的表达强弱不等,BSP、ALP在结节细胞表达强,在周围细胞表达弱,而CAP只在结节细胞表达,在周围细胞不表达.之后的10～16d,细胞结节进一步形成矿化结节.结论本实验揭示了CB在体外增殖、分化及矿化过程中,CAP,BSP和ALP的表达情况及细胞形态的变化.为CB在体内的增殖、分化、矿化及CB在体内形成牙骨质的研究提供了一些参考.
-
机械应力刺激对成牙骨质细胞骨涎蛋白mRNA表达影响的体外研究
目的 研究机械应力刺激对成牙骨质细胞矿化相关基因骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)mRNA表达的影响.方法 利用四点弯曲细胞力学加载装置,以体外培养的成牙骨质样细胞OCCM-30为研究对象,运用实时荧光定量技术,比较2 000、4 000 μstrain张应力和压应力加载组和不加力组OCCM-30在3 h、6 h、12 h、24 h BSP mRNA表达差异.结果 和对照组相比,2 000、4 000 μstrain的张应力和压应力在4个时间点均抑制OCCM-30 BSP mRNA的表达,且差异有统计学意义(F=5.614,P<0.05).结论 成牙骨质细胞是力学敏感性细胞,机械应力刺激通过影响其BSP mRNA的表达,进而可能影响成牙骨质细胞在牙根吸收和修复中的作用.
-
机械应力刺激对成牙骨质细胞骨桥蛋白表达影响的研究
目的 研究机械应力刺激对成牙骨质细胞矿化相关基因骨桥蛋白( osteopontin,OPN) mRNA表达的影响.方法 本研究设3个实验组和1个对照组,利用四点弯曲细胞力学加载装置,对体外培养的成牙骨质样细胞OCCM-30施加2000 μstrain张应力、2000μstrain压应力和4 000 μstrain压应力,对照组不加力.分析加力3h、6h、12 h、24h时成牙骨质样细胞OCCM-300PN mRNA表达差异,对数据进行统计学分析.结果 和对照组相比,2 000 μstrain压应力组和4000μstrain压应力组在加力初期(3 h)OPN的mRNA表达增加,加力后期(24h)其mRNA表达受到抑制,差异有统计学意义(P＜0.05)；2 000 μstrain张应力组在加力3h、6h和对照组相比,OPN mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05),加力12h、24 h OPN mRNA的表达受到抑制,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 机械应力刺激可以调节成牙骨质细胞OPN mRNA的表达,可能由此影响牙根吸收和修复过程.
-
Emdogain诱导人牙周膜细胞群向成牙骨质细胞分化的研究
目的 探讨人牙周膜细胞群(human periodontal ligament cell populations,hPDLPs)在Emdogain(EMD,商品化的猪釉基质蛋白)诱导下生物学特性的改变.方法 组织块法分离培养牙周膜细胞,用含100 mg/L EMD的培养液诱导6 d,光镜下观察细胞形态改变,扫描电镜观察细胞在牙骨质片上的形态变化.免疫细胞化学检测成牙骨质细胞相关矿化蛋白:骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ,COLⅠ)的表达.结果 EMD诱导后细胞由长梭形向多角形的类成牙骨质细胞分化.免疫组织化学检测结果显示诱导后BSP、COLⅠ的表达增强.结论 EMD可以诱导人牙周膜细胞群向类成牙骨质细胞方向分化.
-
成牙骨质细胞培养方法的研究进展
由成牙骨质细胞(CB)形成的牙骨质在正畸治疗过程中有着重要的作用,但迄今为止,人们对于牙骨质和形成牙骨质的CB知之甚少.从CB着手建立体外培养的CB系,是进行该细胞研究的关键.下面就牙骨质瘤来源的CB、CD1小鼠来源的CB和牙周膜细胞、人牙骨质来源的CB、人牙骨质薄层刮取物来源的CB、大鼠第一磨牙来源的CB、人牙周膜来源的CB、牛牙骨质来源的CB、人CB细胞系克隆株来源的CB和马后牙来源的CB在体外的分离培养研究进展作一综述.
