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釉质基质蛋白诱导延迟再植牙牙周愈合的研究
目的:研究应用釉基质蛋白对延迟再植比格犬恒切牙牙周再生的影响.方法:选取3只比格犬的15颗干燥60min的切牙随机分为两组,实验组10颗牙根涂釉基质蛋白;对照组5颗牙根不涂釉基质蛋白,进行再植.8周后处死犬,每隔500μm切取5μm厚的横断切片作组织学观察.结果:与对照组相比,实验组牙再植后能显著地增加牙周膜性愈合的数量(P＜0.001),并减少替代性吸收(P＜0.001).结论:釉基质蛋白能对延迟再植牙的牙周愈合有促进作用.
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釉基质蛋白对牙周膜细胞在牙骨质根面上生长的影响
目的观察釉基质蛋白(EMP)对牙周膜细胞(PDLC)在牙周炎患牙牙骨质根面上附着和增殖的影响.方法用EMP处理的牙周炎患牙根片为实验组,用生理盐水处理的患牙根片和健康牙根片分别作为对照.扫描电镜下观察PDLC在根面上的生长状况,用噻唑蓝比色法分析细胞在根片上的附着和增殖.结果实验组与健康对照组根片上,可见细胞间大量丝状伪足相连,优于病变对照组.实验组PDLC的附着和增殖显著多于病变对照组(附着:0.45±0.03与0.37±0.05,P<0.05;增殖:0.71±0.02与0.55±0.08,P<0.01),但低于健康对照组(附着:0.67±0.08,P<0.05;增殖:1.05±0.09,P<0.05).结论 EMP能促进PDLC在牙周炎患牙牙骨质根面上的附着和增殖.
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釉基质蛋白对人牙髓细胞成牙本质分化的影响
目的 探讨釉基质蛋白对人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPC)成牙本质分化的影响,为牙本质的组织工程学研究提供有效的生物活性物质.方法 将HDPC接种于6孔板(2×105个/孔)后分为5组,分别加入含1、10、100 mg/L釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMP)(分别为EMP 1、10、100 mg/L组)、10-8 mol/L地塞米松及100 mg/L抗坏血酸(dexamethasone and ascorbic acid,Dex-AA组)、单纯基础培养液(对照组).于培养1、5、10 d分别用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性,实时荧光定量反转录聚合酶链反应技术检测成牙本质相关基因牙本质基质蛋白1(dentine matrix protein-1,DMP-1)及牙本质涎磷蛋白(dentine sialophosphoprotein,DSPP)的表达,应用2-△△CT方法得出具体数值并进行单因素方差分析与Post Hoe 检验,用茜素红染色检测并定量分析矿化情况.结果 各组ALP水平呈时间依赖性上调,培养1d后各组ALP活性与对照组相比差异均无统计学意义；5 d后EMP 10、100 mg/L组及Dex-AA组ALP活性显著增高,分别达到7.573±0.267、6.119±0.502、5.846±0.096,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05)；10 d后10 mg/L EMP组及Dex-AA组ALP活性增高更显著,分别达21.035±0.149、13.223±0.797,与对照组(5.825±0.404)相比差异均有统计学意义(P＜0.01).培养1d后各组DMP-1及DSPP mRNA水平均较对照组显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.01)；培养10 d后10 mg/L EMP组DMP-1和DSPP表达水平均显著增高,分别达到14.791±0.164、12.238±0.421.培养10 d后各组均有矿化,10 mg/L EMP组钙离子浓度[(191.8±2.0) μmol/L]显著高于对照组[(81.1±8.1)μmol/L],差异有统计学意义(P＜0.01).结论 适当浓度的EMP对HDPC的成牙本质分化有一定的促进作用.
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釉基质蛋白对人牙髓细胞中骨涎蛋白表达的影响
目的 探讨釉基质蛋白(emdogain,EMD)对人牙髓细胞中骨涎蛋白基因mRNA和蛋白水平的影响,以期发现EMD诱导矿化的机制.方法 从2011年5至7月天津医科大学口腔医院口腔颌面外科门诊因正畸需要拔除的15颗健康双尖牙中提取人牙髓组织,并传代培养人牙髓细胞,分成不同质量浓度(25、50、100和250 mg/L)EMD组和空白对照组,在培养1、3、5、7d提取总RNA,通过实时定量PCR法检测EMD对骨涎蛋白mRNA表达水平的影响；通过蛋白质印迹法检测EMD刺激入牙髓细胞1、3、5、7d骨涎蛋白在蛋白水平的表达变化.结果 实时定量PCR结果显示,在1、3、5、7d,25、50、100和250 mg/L EMD组的骨涎蛋白表达(7d时分别为1.79 ±0.03、2.03±0.10、2.67±0.08、2.94±0.07)与空白对照组(7 d:1.06±0.11)相比差异均有统计学意义(P ＜0.001)；相同质量浓度(250 mg/L)的EMD在不同时间点(1、3、5、7 d)刺激细胞,骨涎蛋白的表达(2.30±0.06、2.65±0.05、2.76±0.05、2.94 ±0.07)各组间相比差异均有统计学意义(P＜0.05)；蛋白质印迹法结果显示,250 mg/L EMD可以促进人牙髓细胞骨涎蛋白表达增加,随着刺激时间的延长,骨涎蛋白表达明显增强.结论 EMD能诱导人牙髓细胞中骨涎蛋白基因mRNA和蛋白水平的增长.
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釉基质蛋白促进自体移植牙牙周愈合的实验研究
目的:研究釉基质蛋白对比格犬恒切牙自体移植后牙周愈合的影响.方法:选取3只比格犬的24颗切牙拔出后在生理盐水纱布中保存30min,然后将对照组12颗切牙直接植入同颌对侧同名牙牙槽窝中,实验组12颗切牙牙根涂釉基质蛋白后也植入对侧牙槽窝中.8周后通过组织学观察牙根的纵切片.结果:两组表面性吸收和炎症性吸收无统计学差异,但实验组牙根替代性骨吸收明显减少.结论:釉基质蛋白可减少牙根的替代性吸收,促进自体移植牙的牙周愈合.
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釉基质蛋白在牙髓细胞增殖中的作用
目的 探讨釉基质蛋白对牙髓细胞增殖的作用及其机理.方法 分离培养人的牙髓细胞,加入不同浓度的Emdogain,采用化学发光免疫测定方法 比较牙髓细胞的生长情况,采用Superarray方法 研究加入Emdogain对细胞周期相关因子的影响.结果 牙髓细胞在不同浓度的Emdogain作用下呈现不同的生长速率.Emdogain促进牙髓细胞生长的佳浓度为300μg/ml.细胞周期相关因子的Superarray分析显示,Emdogain通过上调cyclin D1,p21,E6-AP,SUMO-1基因达到对细胞生长的促进作用.结论 适宜浓度的Emdogain(45～600μg/ml)能够促进牙髓细胞的增殖.
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釉基质蛋白促进骨质疏松症大鼠股骨种植体骨结合的研究
目的 研究釉基质蛋白对骨质疏松条件下雌性Wistar大鼠股骨种植体周围新骨形成以及骨结合的促进作用.方法 实验用纯钛种植体采用放电加工法特制而成,直径1.6mm,长度3.5mm.种植体植入的部位为Wistar大鼠两侧股骨,一侧为实验组,种植窝内使用釉基质蛋白Emdogain.另一侧为对照组,种植窝内使用釉基质蛋白载体PGA.采用BSE(Backscattered electron image analysis)和脱位方法分别检测种植体植入后2周、4周时种植体表面新骨形成以及单位面积种植体脱位力.结果 种植体植入后2周、4周时,实验侧种植体周围骨形成较对照侧更为明显,图像分析显示实验组种植体骨接触率明显高于对照组,且实验组单位面积种植体脱位力检测明显高于对照组.但是4周组的两项指标较2周组明显下降.结论 釉基质蛋白可以改善种植体周围局部骨组织状况,有利于种植体周围新骨的形成,促进种植体骨结合的建立.
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釉基质蛋白对双重酸蚀后纯钛表面磷灰石生成的影响
背景：为提高钛种植体植入后的生物活性，常采用各种表面改性技术。目的：研究釉基质蛋白对双重热酸蚀纯钛表面仿生矿化沉积磷灰石层的影响。方法：提取猪未萌恒牙胚表面的釉基质蛋白并进行验证，纯钛片经抛光清洗后进行双重热酸蚀处理，然后放入含不同浓度釉基质蛋白的饱和矿化液中矿化7 d，对照组为不含釉基质蛋白的钙磷过饱和液。扫描电镜观察试件表面形貌，X射线能谱及X射线衍射分析涂层的元素成分及晶相结构。结果与结论：经双重酸蚀处理后的钛片表面形成规则凹坑状的粗糙表面，经过7d的矿化实验后，不添加釉基质蛋白的对照组试件上未见明显矿化涂层的形成。加入釉基质蛋白的实验组试件表面可形成矿化涂层，且随釉基质蛋白浓度的增加，矿化涂层的量及形态发生改变。能谱分析结果显示：矿化涂层中的主要元素为钙、磷、碳和氧，钙磷摩尔比在1.32-1.41之间。X射线衍射结果显示纯钛试件表面的沉积物为碳羟基磷灰石。提示釉基质蛋白可以促进双重酸蚀处理后的纯钛表面更快地生成磷灰石涂层。釉基质蛋白对纯钛表面磷灰石涂层的影响呈浓度相关性。
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釉基质蛋白组成及诱导细胞分化研究进展
背景:研究表明,釉基质蛋白不仅能够诱导牙周组织再生,还对其他类型的细胞也有不同程度的作用效果.目的:综述釉基质蛋白的组成成分及其在诱导干细胞分化方面的研究进展,深入解析釉基质蛋白的生物模拟作用及其可能的机制.方法:应用计算机检索中国生物医学文献数据库,中国知网,万方、维普数据库1997-01/2011-12相关文献,检索词"釉基质蛋白,分化"限定文献语言种类为中文.同时计算机检索PubMed,EBSCO HOST数据库1997-01/2011-12相关文献,检索词"Enamel matrix derivative,Emdogain?,differentiation",限定文献种类为英文.手工检索美国化学文摘数据库,荷兰医学文摘,进行文献初检.筛选后纳入38篇文章进行综述.结果与结论:釉基质蛋白组成成分复杂,包含有多种蛋白和类生长因子物质.釉基质蛋白具有生物模拟效果,对不同类型的干细胞具有不同程度的促进或抑制分化作用.提示釉基质蛋白将有可能不仅应用于牙周疾病的治疗,还可能应用于其他组织再生领域.
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釉基质蛋白促进牙周组织再生研究进展
近年来,牙周组织再生的研究取得了重要进展.来自上皮根鞘的釉基质蛋白不仅在胚胎时期参与无细胞性牙骨质的形成,而且可促进无细胞性牙骨质的再生.釉基质蛋白用于牙周组织再生治疗已成为近年来牙周病领域的研究热点.本文就釉基质蛋白促进牙周组织再生方面的研究概况做一综述.
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釉基质蛋白对猪骨髓基质细胞生物学特性的影响
目的 研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对体外培养的猪骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)生物学特性的影响.方法 抽取猪髂骨骨髓,全血培养法获得骨髓基质细胞.培养液中EMPs的浓度分别为25、50、100、200ug/ml,以不加EMPs为对照.用比色法检测不同浓度EMPs对BMSCs粘附性的影响.通过计数预定视野中伸展的细胞数,计算BMSCs在1h、3.5h、6.5h的伸展率.MTT法测定各组细胞的增殖活性.结果 猪BMSCs在含有EMPs的培养液中生长良好.对照组以及不同浓度EMPs对细胞粘附性的影响无统计学差异.在1h、3.5h、6.5h,各组细胞的伸展率无显著不同.EMPs对BMSCs的促增殖作用呈浓度和时间依赖性,200ug/ml浓度的EMPs从实验的第三天开始显著促进猪BMSCs的增殖.结论 EMPs对体外培养的猪BMSCs的粘附性和伸展率无影响,200ug/ml浓度的EMPs可显著促进猪BMSCs增殖,提示可尝试联合应用EMPs和BMSCs修复牙周组织缺损.
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釉基质蛋白对大鼠脂肪源性干细胞体外成骨分化能力的实验研究
目的：通过配制不同浓度的釉基质蛋白（enamel matrix proteins，EMPs）培养液，体外培养SD大鼠脂肪源性干细胞（adipose-derived stem cells, ADSCs），初步探究EMPs对ADSCs体外增殖活性及成骨分化能力的影响。方法：酶消化法获得大鼠脂肪间充质细胞，通过流式细胞仪技术分离、筛选干细胞，多向诱导分化对所得细胞进行鉴定；乙酸法制备EMPs干粉并通过蛋白免疫印记技术鉴定其成分，配制不同浓度的诱导液以备用；采用MTT法检测EMPs对ADSCs增殖活性的影响，并用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹的方法检测EMPs诱导ADSCs成骨分化标志物的mRNA及蛋白表达变化情况。结果：釉基质蛋白（EMPs）对大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)的增殖具有明显的促进作用(P<0.05)，并呈现剂量和时间依赖性； EMPs培养ADSCs 14 d后，成骨分化标志物Runx-2、Osteocalcin(OCN)、Collagen (Col-I)在mRNA和蛋白水平表达均增加，并且与EMPs成正比（P<0.05）。结论：釉基质蛋白可作为一种成骨诱导剂，能有效增强大鼠脂肪源性干细胞体外增殖活性并诱导其成骨分化。
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釉基质蛋白联合骨髓基质细胞膜片促进类牙骨质异位生成的实验研究
目的：研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins, EMPs）诱导犬骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）在裸鼠体内促进类牙骨质异位生成的作用和意义。方法：体外分离培养犬骨髓基质细胞并制备细胞膜片，包裹于牙本质根片上，与煅烧骨块紧密贴合捆绑后，制成牙根片/细胞膜片/煅烧骨复合物，体外模拟根周系统。据牙根片是否事先涂覆釉基质蛋白（EMPs），分为实验组和对照组。将2组的“牙根片/细胞膜片/煅烧骨复合物”分别植入裸鼠背部皮下，8周后取材，进行组织学观察和免疫组化检测。结果：实验组的根片上新生出了不规则类牙骨质样物质，并有矿化基质沉淀，有较强骨桥素(osteopontin，OPN)表达；对照组根片上未见类牙骨质样物质或矿化基质沉淀，OPN表达较弱。结论：釉基质蛋白在体内能诱导骨髓基质细胞向类成牙骨质细胞方向分化，从而促进牙周再生。
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Emdogain@促进牙周组织再生及口腔临床应用的研究
Emdogain@为釉基质衍生物(enamei matrix derivative,EMD)与其相应载体的结合物,是商品化的EMD.由于可以诱导牙周组织再生及防止牙根的替代性吸收,国外己将Emdogain@逐步应用于临床牙周病和牙创伤的治疗.近年来,随着分子生物学、细胞学、基因工程的发展以及研究手段、实验仪器的改进,对EMD的研究达到了较深的层次,因而成为众多学者关注的热点问题之一.
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新型壳聚糖基温敏凝胶膜引导骨再生性能的体外实验研究
目的:制备负载釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)的壳聚糖/β甘油磷酸钠(chitosan/β-glycerophosphate salt,CS/β-GP)温敏凝胶膜,探讨其体外引导骨再生的能力.方法:利用CS/β-GP体系的温敏相转变特性,制备新型生物膜并添加牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),利用蛋白浓度测定试剂盒(加强型)检测不同时点的蛋白释放浓度,绘制蛋白缓释曲线.添加EMPs的CS/β-GP(1.0 g)复合膜作为A组;单纯CS/β-GP(1.0 g)复合膜作为B组;同时,设空白对照组即C组,分别与ST2细胞共培养.检测膜的理化性能,MTT法检测复合膜的生物相容性,PNPP法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性.采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析.结果:不同浓度的复合膜可缓慢释放蛋白12d以上,并且随着β-GP浓度的升高,蛋白缓释总量增大.负载蛋白后,复合膜的理化性能均未发生显著变化(P＞0.05).MTT检测A、B、C3组的吸光度(OD)值,组间差异具有显著性,A、B组OD值均高于C组,A组OD值高于B组(P＜0.05).A、B组ALP表达高于空白对照组(P＜0.05),A、B2组之间ALP活性表达亦具有显著差异,A组高于B组(P＜0.05).结论:负载EMPs的新型壳聚糖基温敏凝胶膜在体外实验中表现出一定的引导骨再生活性,是一种具有应用潜力的新型生物膜材料.
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重组人釉原蛋白及猪釉基质蛋白对人骨髓基质细胞成骨作用的比较
目的:比较全长重组人釉原蛋白(recombinant human amelogenin,rhAm)和猪釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)体外诱导人骨髓基质细胞(human bone marrow stromal cells,hBMSCs)成骨分化的作用,探讨rhAm促进hBMSCs成骨的调控机制,为rhAm临床应用提供理论依据.方法:经诱导表达并纯化得到25 kDa全长rhAm;利用乙酸法提纯猪EMPs,体外原代培养hBMSCs.采用实时定量PCR及Western印迹法检测不同时间点rhAm和EMPs作用hBMSCs后成骨因子(Runx2、ALP、COL-I)的变化,观察时效关系.采用碱性磷酸酶和茜素红染色检测2种蛋白对hBMSCs成骨矿化作用的影响.采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:体外培养获得原代hBMSCs.实时定量PCR、Western印迹及细胞染色结果表明,10 μg/mL rhAm和200 μg/mL EMPs均可明显促进hBMSCs中成骨相关因子的基因及蛋白表达,且这种效果和蛋白作用时间有一定相关性.结论:rhAm与EMPs均能明显促进hBMSCs成骨,作用效果具有一定的时间依赖性.
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釉基质蛋白对化学处理钛表面磷灰石生成的影响
目的:研究釉基质蛋白对双重热酸蚀及碱热处理纯钛表面仿生矿化沉积磷灰石层的影响.方法:提取猪未萌恒牙胚表面EMPs,用SDS-PAGE电泳进行验证.纯钛片经抛光清洗,分别进行双重热酸蚀和碱热处理,放入含EMPs(150 μg/mL)的改良模拟体液(m-SBF)中浸泡7d,对照组为不含EMPs的m-SBF.扫描电镜观察试件表面形貌,X射线能谱,X射线衍射及傅里叶红外光谱等分析其元素成分及晶相结构.结果:酸蚀组经仿生矿化.对照组试件表面无沉积物生成,实验组加入EMPs,钛片表面有一定量的沉积物生成,能谱分析显示主要由Ca、P、O和C等元素组成.碱热处理组经仿生矿化,对照组与实验组试件表面均有沉积层形成,但后者有较多直径约为300～600nm的孔隙生成,元素组成主要为Ca、P、O和C,X射线衍射及傅里叶红外光谱分析显示沉积物为碳羟基磷灰石.结论:碱热处理纯钛表面有利于磷灰石层的形成,加入EMPs能促进磷灰石层的形成并改变其形貌.
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壳聚糖温敏凝胶负载釉基质蛋白对骨髓基质细胞的作用
目的:探讨在壳聚糖温敏凝胶支架材料中釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)活性的影响.方法:合成壳聚糖温敏凝胶并加入适当浓度的EMPs,通过考马斯亮蓝试剂盒检测其对EMPs的缓释作用.用全骨髓培养法获得大鼠BMSCs.含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代培养.含EMPs浓度分别为0、50、100、150μg/mL DMEM培养液培养第3代大鼠BMSCs,MTT法测定各组细胞的增殖活性.MTT法及ALP试剂盒检测大鼠BMSCs在负载100μg/mL EMPs及不负载EMPs的壳聚糖温敏凝胶支架材料中的增殖情况及ALP的活性.采用SPSS11.0软件包对实验数据进行单因素方差分析及两样本t检验.结果:EMPs可在壳聚糖温敏凝胶中持续释放3周以上.DMEM培养液中,50μg/mL EMPs组从实验的第3天开始,显著促进大鼠BMSCs的增殖(P＜0.01).壳聚糖温敏凝胶负载100μg/mL EMPs后.于实验的第3天和第5天明显促进大鼠BMSCs的增殖(P＜0.05)并且在实验的第7天(P＜0.05)和第9天(P＜0.01)显著促进大鼠BMSCsALP水平的提高.结论:壳聚糖温敏凝胶对EMPs具有缓释性,负载EMPs后,可以促进大鼠BMSCs增殖,提高ALP的活性.
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釉基质蛋白对牙周细胞覆盖体外创面的影响
目的:评价体外创面模型环境中,釉基质蛋白对牙周膜细胞、牙龈成纤维细胞覆盖创面能力的影响.方法:利用在盖玻片上形成的人牙周膜和牙龈成纤维细胞的融合培养物,以机械方法去除7mm宽的细胞层条带,形成体外创面模型.受损培养物在含有10%胎牛血清的培养液中继续培养2、6、9d,同时以100μg/ml的釉基质蛋白分别刺激牙周膜、牙龈成纤维细胞,并与不加釉基质蛋白者作对照.玻片经固定后作甲紫染色.以计算机辅助图像分析系统对细胞覆盖体外创面的面积进行百分比定量,采用SAS6.12软件包进行样本均数的t检验.结果:对照组组内牙周膜、牙龈成纤维细胞覆盖创面的面积存在差异,牙龈成纤维细胞覆盖创面面积在创面形成后第9天显著高于牙周膜细胞,差异有显著性(P＜0.05).在加用100μg/ml釉基质蛋白的条件下,牙周膜细胞覆盖体外创面的面积较对照组明显增加,创面形成后第6、9天,牙周膜、牙龈成纤维细胞覆盖体外创面面积均无显著差异(P＞0.05).结论:牙龈成纤维细胞覆盖创面的能力高于牙周膜细胞.釉基质蛋白有增进创面愈合,特别是牙周膜细胞创面覆盖的作用.
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釉基质蛋白对人骨髓基质细胞生长和黏附的影响
目的:探讨釉基质蛋白(enamel matrix protein,EMPs)对人骨髓基质细胞黏附、伸展和增殖的影响.方法:用全骨髓培养法获得人骨髓基质细胞,各实验组中EMPs的浓度分别为50、100、200、300 μg/ml,以不加EMPs作为空白对照组.细胞计数法测定细胞的黏附能力;通过计数高倍视野中伸展的细胞数,计算骨髓基质细胞在1、3、5和7h的伸展率;MTT法检测各组细胞的增殖活性.采用SAS6.12软件对所得数据进行单因素方差分析.结果:体外培养的人骨髓基质细胞生长良好;各实验组间及与对照组比较,对细胞的黏附性的影响无统计学差异;各组细胞的伸展率亦无显著性差异;EMPs对人骨髓基质细胞有较明显的促增殖作用,其中200 μg/ml浓度组EMPs对骨髓基质细胞的促增殖作用显著(P＜0.05).结论:EMPs对体外培养的人骨髓基质细胞的黏附性和伸展率无影响,但可明显促进其增殖.
