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卵黄高磷蛋白对人牙髓细胞增殖的影响
目的 研究卵黄高磷蛋白对体外培养的人牙髓细胞增殖的影响.方法 4个实验组分别采用1、10、100、1000ng/mL的卵黄高磷蛋白,对照组采用10%胎牛血清,分别作用于体外培养的第6代人牙髓细胞,每组8个标本,培养3、6day后分别对每组作MTT法检测,OD值进行t检验.实验组用100ng/mL卵黄高磷蛋白,对照组用10%胎牛血清作用上述人牙髓细胞,培养48h,常规消化,固定,经DNA荧光染色后,用流式细胞仪测定DNA含量.结果 1~100ng/mL 卵黄高磷蛋白作用3、6day均促进人牙髓细胞增殖.10、100ng/mL卵黄高磷蛋白作用6day,对人牙髓细胞增殖的促进作用与对照组相比有显著差异(P＜0.05).1000ng/mL卵黄高磷蛋白作用3、6day均抑制人牙髓细胞增殖.100ng/mL 卵黄高磷蛋白作用人牙髓细胞,与对照组相比DNA合成前期细胞比例明显降低,而DNA合成期细胞比例和细胞增殖指数均显著增高.结论 卵黄高磷蛋白具有促进人牙髓细胞增殖和DNA合成的作用,可能主要通过促进处于合成前期的细胞进入合成期来实现的.
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应用不同方法进行人牙髓细胞原代培养的比较研究
目的比较并建立人牙髓细胞原代培养的理想方法.方法分别采用组织块法、酶消化法和组织块消化法进行人牙髓细胞的体外原代培养,倒置显微镜及台盼蓝染色观察并比较三者的培养成活率、细胞活力、细胞形态和数量、培养耗时等,免疫组化法鉴定细胞来源.结果三种方法均可从人牙髓组织分离培养获得外胚间充质来源的牙髓细胞.组织块法耗时较长,4周能进行首次传代,传代成功率50%,细胞形态较单一;酶消化法能在较短时间内获得形态多样的人牙髓细胞,但培养成活率较低,且细胞数量较少,8天时传代成功率为20%;组织块消化法不仅培养成活率(75%)和8天传代成功率(62.5%)较高,而且在较短时间内可多量获得多种形态类型的人牙髓细胞.结论组织块消化法是一种更加科学可行的人牙髓细胞原代培养的优化方法,可为进行人牙髓干细胞的分离培养及特性研究提供实验方法学基础.
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釉基质蛋白对人牙髓细胞成牙本质分化的影响
目的 探讨釉基质蛋白对人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPC)成牙本质分化的影响,为牙本质的组织工程学研究提供有效的生物活性物质.方法 将HDPC接种于6孔板(2×105个/孔)后分为5组,分别加入含1、10、100 mg/L釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMP)(分别为EMP 1、10、100 mg/L组)、10-8 mol/L地塞米松及100 mg/L抗坏血酸(dexamethasone and ascorbic acid,Dex-AA组)、单纯基础培养液(对照组).于培养1、5、10 d分别用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性,实时荧光定量反转录聚合酶链反应技术检测成牙本质相关基因牙本质基质蛋白1(dentine matrix protein-1,DMP-1)及牙本质涎磷蛋白(dentine sialophosphoprotein,DSPP)的表达,应用2-△△CT方法得出具体数值并进行单因素方差分析与Post Hoe 检验,用茜素红染色检测并定量分析矿化情况.结果 各组ALP水平呈时间依赖性上调,培养1d后各组ALP活性与对照组相比差异均无统计学意义；5 d后EMP 10、100 mg/L组及Dex-AA组ALP活性显著增高,分别达到7.573±0.267、6.119±0.502、5.846±0.096,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05)；10 d后10 mg/L EMP组及Dex-AA组ALP活性增高更显著,分别达21.035±0.149、13.223±0.797,与对照组(5.825±0.404)相比差异均有统计学意义(P＜0.01).培养1d后各组DMP-1及DSPP mRNA水平均较对照组显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.01)；培养10 d后10 mg/L EMP组DMP-1和DSPP表达水平均显著增高,分别达到14.791±0.164、12.238±0.421.培养10 d后各组均有矿化,10 mg/L EMP组钙离子浓度[(191.8±2.0) μmol/L]显著高于对照组[(81.1±8.1)μmol/L],差异有统计学意义(P＜0.01).结论 适当浓度的EMP对HDPC的成牙本质分化有一定的促进作用.
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生物活性玻璃对牙髓细胞血管生长因子作用的体外研究
目的 体外观察、比较新型纳米生物活性玻璃nano-58S和传统生物活性玻璃45S5对人牙髓细胞增殖及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的作用,以期为进一步研究生物活性玻璃是否可在牙髓再生的组织工程学中发挥作用奠定基础.方法 实验组用45S5 (45S5组)、nano-58S(nano-58S组)生物活性玻璃浸提液培养人牙髓细胞,空白对照组用达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium,DMEM)培养,每组3孔.培养人牙髓细胞1、2、3d分别采用甲基噻唑基四唑法观察浸提液对细胞增殖的影响,用实时荧光定量反转录PCR和酶联免疫吸附测定法检测VEGF、bFGF基因表达水平和蛋白分泌量.结果 人牙髓细胞培养第2天,45S5组、nano-58S组细胞增殖率分别为空白对照组的(134.5±5.0)％和(146.3±19.8)％,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05)；45S5组和nano-58S组在第1天VEGF蛋白分泌量分别为(189.29±4.64)和(216.18±14.67) ng/L,均显著高于空白对照组[(159.03±11.69) ng/L] (P＜0.05),nano-58S组VEGF蛋白分泌量显著高于45S5组(P＜0.05)；两个实验组的bFGF蛋白分泌量亦显著高于空白对照组(P＜0.05)；45S5组和nano-58S组的VEGF基因表达量在第1天分别为(1.70±0.19)和(1.63±0.42),均显著高于空白对照组(1.00 +0.02) (P ＜0.05)；bFGF基因相对表达量在第3天分别为(1.49±0.02)和(2.30±0.04),亦均显著高于空白对照组(1.29 ±0.04) (P＜0.05).结论 生物活性玻璃可促进人牙髓细胞的增殖及VEGF、bFGF的基因表达和蛋白分泌,nano-58S比45S5的促进作用更显著.
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重组人白细胞介素1β对人牙髓细胞蛋白质组的影响
目的 创建牙髓损伤模型,比较牙髓细胞在不同条件下蛋白质表达的异同；探讨重组人白细胞介素1β(recombinant human IL-1β,rhIL-1β)对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulpcells,HDPC)蛋白质的影响及牙髓损伤机制.方法 在HDPC的培养液中加入rhIL-1β 12 h,用双向凝胶电泳分离HDPC全蛋白,获得对照组(未加rhIL-1β)及诱导组(加入rhIL-1β诱导)HDPC蛋白质图谱,Image Master2D Elit 5.0软件分析确认差异表达蛋白.结果 诱导组牙髓细胞中有39个蛋白质点差异明显,其中15个蛋白质点高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达.结论 rhIL-1β诱导HDPC后有多种蛋白质分子发生变化,双向凝胶电泳能够显示HDPC的全蛋白,而且能够发现差异表达蛋白质,这些差异表达蛋白质可能参与了牙髓细胞损伤的过程.
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凝溶胶蛋白gelsolin对人牙髓细胞增殖及迁移的影响
目的：研究凝溶胶蛋白gelsolin（GSN）对人牙髓细胞（hDPC）增殖及迁移的影响。方法激光共聚焦检测gelsolin在hDPC中的表达。以小干扰RNA（siRNA）沉默hDPC中的gelsolin， CCK?8法检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期；Transwell实验观察细胞的迁移情况。采用单因素方差分析数据。结果激光共聚焦显示gelsolin普遍表达于hDPC胞浆。沉默gelsolin，hDPC的增殖率在24、48、72 h时分别下降47.8%（F=6.182，P=0.035）、48.9%（F=5.520，P=0.044）、64.1%（F=15.440，P=0.004）；流式结果显示干扰gelsolin，hDPC的凋亡率增加约4.5%（F=21.162，P=0.002），而细胞周期未发生明显阻滞，S期细胞比例升高约5%（F=4.526，P＞0.05），G1期细胞比例下降约8%（F=4.743，P＞0.05）；Transwell结果显示，24 h内hDPC的迁移能力降低约60%（F=12.781，P＜0.001）。结论 gelsolin对hDPC的增殖及迁移具有调控作用。
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两型腺相关病毒对培养人牙髓细胞转染效率的研究
目的 探讨两种不同腺相关病毒(AAV)介导的增强型绿色荧光蛋白rAAV2-EGFP和rAAV2/1-EGFP对人牙髓细胞的转染效率及对人牙髓细胞的毒性,为AAV携带目的基因治疗提供理论依据与实验基础.方法 采用组织块加酶消化法培养人牙髓细胞并鉴定组织来源.按照感染复数(MOI)为104、105、5 × 105转染第2代人牙髓细胞,并选择适MOI值;流式细胞仪检测转染后7 d,rAAV2-EGFP和rAAV2/1-EGFP对人牙髓细胞的转染效率;MTT法检测AAV2-EGFP,AAV2/1-EGFP转染后4、6、8、10、12 d人牙髓细胞的增殖活性.结果 荧光显微镜下观察rAAV-EGFP对人牙髓细胞的转染效率及荧光蛋白强度,随着MOI值的增加而增高,其中105为转染适MOI值,7 d时,流式细胞仪检测AAV2-EGFP、AAV2/1-EGFP转染率分别为35.8%、76.9%;病毒转染细胞后,细胞生长正常,MTT显示转染后各转染组与未转染组的吸光度值差异无统计学意义.结论 rAAV2-EGFP对体外培养的人牙髓细胞转染效率高于rAAV2/1-EGFP,是腺相关病毒中转染人牙髓细胞比较适合的载体.
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成骨生长肽对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响
目的 观察成骨生长肽(OGP)对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响.方法 酶消化组织块法体外培养人牙髓细胞(hDPCs),倒置相差显微镜观察hDPCs的形态.CCK-8、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测筛选佳浓度OGP;佳浓度组、对照组、单纯矿化液组和含佳浓度的矿化液组做茜素红、Von Kossa染色和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 酶消化组织块法可以良好的体外培养hDPCs;OGP浓度在10-7 ～ 10-11 mol/L均能促进hDPCs增殖和ALP活性:促增殖佳浓度为10-10 mol/L,随时间延长,与10-9 mol/L浓度组间差异无统计学意义;OGP浓度为10-9 mol/L时能显著增强ALP活性.茜素红和Von Kossa染色观察第14、21天,四组均有钙化结节形成,联合组结节大,数量多;RT-PCR结果显示第7、14、21天,联合组的Ⅰ型胶原、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素(OCN)的mRNA表达量均高于其他各组(P ＜ 0.01).结论 OGP能促进体外hDPCs的增殖和分化,结合两者优浓度为10-9 mol/L;茜素红和Von Kossa染色可以观察钙化结节形成过程;OGP联合矿化诱导液可以显著提高体外hDPCs的矿化.
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PI3K/AKT信号通路对体外人牙髓细胞增殖和成牙本质向分化能力的影响
目的 研究PI3K/AKT信号通路对人牙髓细胞(hDPC)体外增殖作用和成牙本质向分化能力的影响.方法 体外培养hDPC,采用PI3K通路抑制剂LY294002(LY)处理hDPC,CCK8法检测细胞增殖情况,Western blot蛋白印记检测PI3K/AKT通路下游蛋白AKT、磷酸化AKT(p-AKT)水平在6、12、24、48、72 h的改变,检测成牙本质向分化指标DSPP的蛋白水平变化;设立空白对照组、矿化诱导组、LY组、矿化诱导+LY组共4组,成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节形成情况.结果 CCK8结果显示,LY294002在24、48和72 h可抑制hDPC的增殖(24 h:Z=-0.358,P＜ 0.05;48 h:t=11.674,P＜ 0.05;72 h:t=10.832,P＜ 0.05);Western blot显示,LY294002抑制PI3K/AKT通路下游蛋白p-AKT活性,在24 h时作用明显,成牙本质向分化指标DSPP蛋白水平降低;茜素红染色结果显示,矿化结节的数量B组多、C组少.结论 PI3K/AKT信号通路可促进hDPC的增殖和成牙本质向分化能力.
关键词： PI3K/Akt信号通路 人牙髓细胞 增殖 成牙本质向分化 -
MEPE基因沉默对人牙髓细胞增殖与成牙本质分化的作用研究
目的:研究细胞外基质磷酸化糖蛋白(Matrix Extracellular Phosphoglycoprotein,MEPE)基因沉默对人牙髓细胞(Human Dental Pulp Cells,hDPCs)增殖和成牙本质分化能力的影响,探讨其在牙髓损伤修复中的功能.方法:酶消化组织块法分离培养hDPCs,以lipo2000介导siRNA-hMEPE转染hDPCs,以阴性对照组和未转染组设为对照,l、3、5、7d后,CCK-8法检测细胞增殖情况;转染hDPCs后以矿化诱导液培养5、7、10d后,实时荧光定量RT-PCR检测骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、牙本质涎磷蛋白(Dentin Sialophos-phoprotein,DSPP)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、Collagen I mRNA表达水平.结果:CCK-8结果显示Si-h-MEPE转染hDPCsld后OD值下降,3d时到达低值,且均低于未转染组与阴性对照组,3d时差异有统计学差异(P＜0.05),未转染组与阴性对照组中,OD值持续升高,7d时到达峰值,与各自组内其他时间点比较有统计学差异(P＜0.05);ALP活性检测结果显示,Si-h-MEPE转染hDPCs3d细胞OD值低,且明显低于未转染组与阴性对照组(P＜0.05),未转染组与阴性对照组hDPCsOD值呈现逐渐升高趋势,在7d时达到大值(P＜0.05).Si-h-MEPE转染hDPCs3d时BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ mRNA的表达量均较未转染组与阴性对照组下调(P＜0.05).在未转染组中,BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ mRNA水平持续升高,在7d时达高值,与3d比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MEPE基因瞬时沉默抑制hDPCs增殖、使BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ基因表达下调,ALP活性降低,与未转染组与阴性对照组比较结果提示MEPE可能通过调控hDPCs的增殖和成牙本质分化能力,在牙髓损伤修复中发挥重要作用.
关键词： 人牙髓细胞 成牙本质分化 重组人细胞外基质磷酸化糖蛋白 -
探讨激活Notch信号通路对人牙髓细胞增殖与分化的作用
目的：探讨激活Notch信号通路对人牙髓细胞增殖与分化的作用。方法选取完整拔除的健康前磨牙与第三磨牙，应用酶消化法进行原代培养与传代培养。观察培养结果。结果第4代B组人牙髓细胞中的Notch信号通路的下游基因Hesl表达量低于C组(P<0.05)；第8代， B组人牙髓细胞中的Hesl表达量与C组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；第10代， B组人牙髓细胞中的Hesl表达量与C组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论Notch信号通路是进化过程中的信号转导机制，能够细胞间作用对其命运进行控制，牙髓细胞存在较高的增殖以及多向分化的成体干细胞，在组织中起到非常重要的作用。
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碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞增殖和迁移的影响
目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对体外培养人牙髓细胞增殖、迁移活性的影响.方法 以常规组织块培养法体外获得人牙髓细胞,实验组分别加入终浓度为1.0,5.0、10.0和50.0ng/ml的bFGF,对照组仅加入等量的空白培养基,采用CCK-8法分别测定450nm下各组光吸收度A值,研究bFCF对牙髓细胞增殖活性的影响;应用Transwell小室培养法,研究bFGF对牙髓细胞迁移活性的影响.结果 与对照组相比,bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下可促进牙髓细胞的增殖(P<0.05),bFGF低显效浓度为1.0ng/ml,佳显效浓度为10.0ng/ml.bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下诱导细胞迁移(P<0.05).结论 bFGF可诱导体外培养人牙髓细胞的增殖和迁移,在牙髓牙本质复合体修复中可能发挥重要作用.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 人牙髓细胞 增殖 迁移 -
氟羟基磷灰石凝胶对人牙髓细胞增殖和分化的影响
目的 评价新研制的氟羟基磷灰石(fluorohydroxyapatite,FHA)凝胶对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)增殖和分化的影响.方法 采用酶消化法培养hDPCs.用含氟羟基磷灰石凝胶(FHA)浸提液的DMEM培养液培养hDPCs.分别于1,3,5,7天通过CCK-8实验检测细胞增殖、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的检测以及实时定量逆转录聚合酶链反应检测分化基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和ALP表达,评估FHA凝胶对hDPCs增殖和分化的影响.结果 FHA组各时间点细胞增殖与阴性对照组无明显差异(P＞0.05),第3,7天的ALP活性低于阴性对照组,ALP染色阳性细胞少于阴性对照组.Real Time-PCR结果显示FHA组细胞第3,7天DSPP和OCN表达显著高于阴性对照组,而ALP表达低于阴性对照组.结论 FHA对人牙髓细胞的增殖无负面作用,但是可以促进人牙髓细胞向成牙或成骨向分化,有生物诱导活性.
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表皮生长因子对人牙髓细胞DNA合成及细胞周期的影响
目的研究表皮生长因子(EGF)对体外培养的人牙髓细胞(HDPCs)DNA合成及细胞周期的影响.方法将培养的第5代HDPCs分成EGF(1ng/ml)实验组和对照组,分别以含5%FBS的DMEM培养48h;常规消化、固定细胞,调整细胞密度为2.0×106/ml,经DNA荧光染色后用流式细胞仪(FCM)测定DNA分子含量.结果与对照组相比,EGF实验组HDPCs的DNA合成前期细胞比例(G1%)明显降低,而DNA合成期细胞比例(S%)及细胞增殖指数PrI值(S+G2M)%均显著增高.结论EGF具有促进HDPCs的DNA合成和分裂增殖的作用,可能主要是通过促使处于G1期的细胞进入S期来实现的;提示EGF在牙髓组织的损伤修复过程中起着重要作用.
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碱性成纤维细胞生长因子对牙髓细胞Delta蛋白表达的影响
研究已证明碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)能明显地刺激体外培养的人牙髓细胞(hDPCs)增殖,有剂量依赖性[1].同时还可能参与牙齿的发育及修复性牙本质的形成[2].本实验通过研究不同浓度bFGF对体外培养的人牙髓细胞合成Delta蛋白的影响.
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人牙髓干细胞的体外培养及神经样诱导分化
背景：牙髓组织来源干细胞的发现及概念的确立有助于从细胞水平上认识牙齿发育和再生修复机制。目的：了解人牙髓干细胞向神经元样细胞诱导分化能力和诱导分化条件。方法：取健康青年人的第三磨牙的牙髓组织后，制成单细胞悬液，加入含有体积分数为15%胎牛血清α-MEM培养基在6孔板培养，传代培养后加入丁羟基茴香醚、forskolin、β-巯基乙醇、碱性成纤维细胞生长因子诱导剂进行培养。结果与结论：免疫荧光和反转录-聚合酶链反应检测显示，诱导2周后人牙髓细胞除了stro-1，Col-Ⅰ，牙本质涎蛋白表达阳性外，还有巢蛋白，神经元特异性烯醇化酶的表达也是阳性，而牙龈纤维细胞表达均为阴性。说明人牙髓组织中存在成体干细胞，在一定的诱导培养条件下，牙髓干细胞有向神经元样细胞分化的潜能。
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胶原-生物活性玻璃-聚己内酯复合支架材料促进人牙髓细胞的增殖、迁移和分化
背景:胶原-生物活性玻璃-聚己内酯复合材料具有良好的生物相容性、机械性能及可降解性,对细胞的黏附、增殖及血管生成极为有利.目的:观察胶原-生物活性玻璃-聚己内酯复合支架材料对人牙髓细胞的增殖、迁移和分化能力的影响.方法:分离培养人牙髓细胞,接种在胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上,接种前及接种后第1,3,7,14,24天,采用MTT法检测细胞增殖,采用划痕实验检测细胞的迁移能力,采用ELISA法检测细胞上清液中的碱性磷酸酶活性.结果与结论:①与接种前比较,接种于胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞增殖能力明显增强(P<0.01);随着接种时间的延长,胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞增殖能力逐渐增强;②与接种前比较,接种于胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞迁移能力明显增强(P<0.01);随着接种时间的延长,胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞迁移能力逐渐增强;③与接种前比较,接种于胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞上清液中碱性磷酸酶水平明显增加(P<0.01);随着接种时间的延长,胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞上清液中碱性磷酸酶水平逐渐增强;④结果表明,胶原-生物活性玻璃-聚己内酯复合支架材料可促进人牙髓细胞的增殖、迁移和分化过程.
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体外培养人牙髓细胞的初步实验观察
目的经过人牙髓细胞的培养,获得足够量的传代细胞,为进一步的实验提供基础;观察人牙髓细胞的形态、结构.方法组织块法、酶消化法联合应用体外培养人牙髓细胞;应用倒置相差显微镜、透射电镜观察人牙髓细胞的形态与结构.结果体外培养人牙髓细胞成功率低;人牙髓细胞呈成纤维细胞形.结论培养的人牙髓细胞维持了体内牙髓细胞的形态结构,可以用来进行牙髓生物学、牙科材料毒理学等研究.
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地塞米松对人牙髓细胞增殖分化影响的研究
目的 观察地塞米松对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化的影响.方法 收集拔除的无龋坏、无牙周疾病的健康前磨牙及第三磨牙,获得牙髓,酶消化联合组织块法体外培养人牙髓细胞(Human dental pulp cells,hDPCs),扩增后取第4代生长状态良好的细胞用于实验.分为两组,实验组hDPCs在含2％胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)的αMEM培养基中加入10-8 mol/L地塞米松(Dexamethasone,Dex)培养,对照组单纯使用含2％FBS的αMEM培养基培养.在细胞培养第1、3、5天检测细胞增殖情况；细胞培养的第1、5、10天分别进行ALP染色及ALP定量分析检测细胞分化情况;细胞培养第10天进行茜素红染色观察钙化结节形成情况.结果 细胞增殖活性检测显示,实验组培养第3天及第5天可见hDPCs增殖活性得到显著抑制,与对照组相比有统计学差异；ALP染色及定量测定:培养10d后,地塞米松实验组ALP活性明显高于对照组;茜素红染色结果:培养10 d后两组细胞茜素红染色均为阳性,表明实验组与对照组均有钙化结节形成,但是实验组钙化结节形成数量较多.结论 酶消化联合组织块法可以成功体外培养hDPCs.10-8 mol/L地塞米松可显著抑制hDPCs的增殖活性,提高hDPCs的ALP活性及矿化能力.
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富血小板纤维蛋白凝胶三维结构及其对人牙髓细胞体外增殖的影响
目的:分析富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)凝胶的三维结构,并探索不同浓度PRF凝胶析出液对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)体外增殖的影响,评价PRF凝胶作为牙髓组织再生支架的可行性.方法:采用Choukroun一步离心法,制备PRF凝胶,分别行组织学和扫描电镜(SEM)观察.将新鲜制备的PRF凝胶浸泡于DMEM培养基中,于第7天取出析出液.分别用含PRF凝胶析出液浓度(体积分数)为25％(1PRF组)和75％(3PRF组)的DMEM培养基培养hDPCs.采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测24、48、72、96、120、144、168 h各时间点的细胞增殖活性.采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学处理.结果:光镜和SEM观察结果均表明,血小板和白细胞主要分布在PRF凝胶的白膜层,此层由粗大而密集的纤维蛋白条索构成.CCK-8结果显示,在24、48、72、96 h,1PRF组和3PRF组的光密吸光度(OD)值与对照组相比,差异无显著性(P＞0.05);在120、144、168 h,1PRF组和3PRF组的光密度值显著高于对照组(P＜0.05);1PRF组的OD值和3PRF组相比,差异无显著性(P＞0.05).结论:PRF凝胶的三维结构由纤维蛋白网构成,其白膜层聚集了大量可释放生长因子的血小板与白细胞;PRF凝胶析出液对hDPCs体外增殖的促进作用具有时间依赖性,提示PRF凝胶有望成为牙髓再生的良好支架材料.
关键词： 富血小板纤维蛋白凝胶 三维结构 人牙髓细胞
