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间充质干细胞的成骨细胞分化和免疫组织化学鉴定
目的 探讨脐带的间充质干细胞分化为成骨细胞的影响因素和免疫组织化学鉴定.方法 收集306例冻存的健康胎儿脐带,采用华尔通胶组织块贴壁法从脐带组织中分离间充质干细胞,利用荧光显微镜观察原代细胞的细胞形态.脐带间充质干细胞的免疫表型和细胞周期采用免疫组织化学检测.复苏冻存的脐带间充质干细胞,并传代培养至10代.对第10代的脐带间充质干细胞进行成骨诱导,其成骨能力分别通过钙结节和骨涎蛋白的免疫荧光检测以及茜素红染色检测来确定.结果 免疫组织化学结果显示,培养的细胞高表达间充质干细胞的表面标志物CD73、CD90和CD105,但是不表达造血细胞的表面标志物CD34和CD45.复苏后细胞的存活率是90％.细胞周期显示,第10代的细胞有80％处于G0/G1期,20％处于S+G2/M期.成骨细胞刺激因子诱导干细胞的骨涎蛋白染色呈阳性,并形成矿化的钙结节.结论 冻存的脐带间充质干细胞在成骨细胞刺激因子下能被诱导分化为成骨细胞,具有高度自我增殖和多向分化能力.
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成骨细胞骨涎蛋白成熟肽修饰位点和进化踪迹分析
目的 探讨成骨细胞中骨涎蛋白(BSP)的表达以及进化踪迹,并对成熟肽基因行序列分析,获得BSP修饰位点.方法 体外培养成骨细胞,提取成骨细胞总RNA,反转录合成eDNA,以特异性引物扩增BSP成熟肽基因并克隆到pBluescript KS载体,筛选阳性克隆进行序列测定.以成骨细胞的骨涎蛋白为种子序列,利用多种生物信息学工具进行细胞的骨涎蛋白的序列查找及其同源蛋白的搜索,并以此为基础对骨涎蛋白的进化踪迹位点及相关的功能位点进行比较研究.结果 共得到具有完整结构域的同源蛋白序列72条,骨涎蛋白家族的BSP-前肽结构域具16个全家族保守残基,以及10个RGD结合域和BSP结构域的33个亚家族特异性残基.骨涎蛋RGD结构域的配基结合位点主要分布于结合口袋的中间区域.PCR扩增到一特异性的900bp片段,克隆后筛选出阳性克隆进行序列分析,测定结果与数据库的序列基本相同.结论 成骨细胞中能表达并翻译为有活性的BSP,BSP成熟肽存在甲基和乙酰化修饰位点.
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非胶原蛋白在颌面部骨肉瘤病理诊断中的价值
目的探讨骨钙蛋白(OC)、骨涎蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)在骨肉瘤病理诊断及鉴别诊断中的意义.方法利用免疫组化方法检测OC、BSP、OPN在50例各型骨肉瘤肿瘤细胞、基质中的表达.结果OC、BSP、OPN在各型骨肉瘤肿瘤细胞中均有一定程度的表达(80.0%～86.0%),在未矿化、矿化骨基质中,BSP、OPN的阳性率(83.3%～97.7%)均显著高于OC(48.8%～60.4%).在软骨基质中,OC、BSP、OPN的阳性率相对较低(25.0%～50.0%).结论OC、BSP、OPN在检测骨肉瘤中的肿瘤细胞时均有较高的阳性率.在鉴别肿瘤骨基质时,BSP、OPN较OC更有价值.OC、BSP、OPN在成软骨细胞型骨肉瘤的鉴别诊断中具有参考价值.
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食管鳞状细胞癌组织中骨涎蛋白的表达及其临床意义
目的 探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中骨涎蛋白(BSP)的表达及其临床意义.方法 利用组织微阵列技术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法,检测211例ESCC患者肿瘤组织及其癌旁正常食管黏膜组织中BSP mRNA和蛋白的表达水平.结果 211例ESCC组织和癌旁正常食管黏膜组织中,BSP mRNA阳性率分别为93.8％(198/211)和16.6％(35/211,P＜0.001),BSP蛋白阳性率分别为56.9％(120/211)和31.3％ (66/211,P＜0.001).BSP蛋白表达与ESCC患者的淋巴结转移和TNM分期有关(均P＜0.05).BSP蛋白阳性的ESCC患者5年生存率明显低于BSP蛋白阴性者(P＜0.05).多因素分析显示,肿瘤分化程度、TNM分期和BSP蛋白表达为影响ESCC患者预后的独立因素(均P＜0.05).结论 BSP的表达异常可能在ESCC的发生、发展及预后中起重要作用,BSP可作为反映ESCC生物学行为的指标之一.
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大鼠牙齿发育过程中骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达
目的 探讨骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在大鼠牙齿发育中的时间和空间分布特点,及两者在矿化中的作用.方法用免疫组化方法检测了SD大鼠出生后1 d及1、2、3、5、8周的牙胚和颌骨中BSP及OPN的表达特点.结果成熟的成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞和成骨细胞及基质中均表达BSP和OPN.牙骨质和牙槽骨中BSP和OPN的表达高于牙釉质和牙本质.在牙骨质和牙槽骨中,BSP在未矿化的基质和已矿化的基质中均有高表达,而OPN仅在矿化的前沿和新生线处有高表达.结论 BSP和OPN在大鼠牙齿及颌骨的形成和矿化中具有重要作用,尤其是OPN与牙釉质的形成也有重要关系.BSP和OPN的表达特点不同,提示二者在矿化组织的形成和矿化中的作用不同.
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氢氧化钙对人牙髓细胞中骨涎蛋白基因转录的影响
目的 观察氢氧化钙对人牙髓细胞中骨涎蛋白基因转录的影响,研究氢氧化钙诱导矿化的机制,为研制更有效的盖髓剂提供实验依据.方法 收集天津医科大学口腔医院口腔颌面外科门诊因正畸拔除的双尖牙15颗,提取牙髓组织并进行细胞培养,将培养传代的人牙髓细胞分成不同浓度(0.012、0.120、0.400和1.200 mmol/L)氢氧化钙实验组和对照组,提取总RNA,通过实时定量聚合酶链反应实验,检测确定人牙髓细胞中氢氧化钙对骨涎蛋白mRNA水平的佳刺激浓度.同时,检测佳浓度氢氧化钙在不同时间点(0、3、6、12和24 h)对骨涎蛋白、核心结合蛋白因子2(runt-related transcription factor-2,Runx-2)和成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX) mRNA水平的影响；通过瞬时转染实验,将人骨涎蛋白基因不同长度片段的启动子插入荧光素酶基因中,通过脂质体瞬时转染进人牙髓细胞,检测骨涎蛋白启动子在氢氧化钙实验组和对照组中转录活性的变化.组内和组间比较均采用两独立样本t检验,以双侧P＜ 0.05为差异有统计学意义.结果 实时定量聚合酶链反应实验中,佳刺激浓度1.200 mmol/L氢氧化钙作用人牙髓细胞12h后,骨涎蛋白mRNA的水平增长为(2.86±0.09),而1.200 mmol/L氢氧化钙在不同的时间点(0、3、6、12和24 h)刺激细胞,骨涎蛋白mRNA水平6h时为(1.45±0.36),12 h时增长到(2.66±0.18)；Runx-2 mRNA水平在6h时为(2.38±0.08),12h时增长到(2.73±0.16),24 h时下降至初始水平；OSX mRNA的水平从12 h开始增长,24 h达峰值(3.30±0.06).瞬时转染实验也证实了氢氧化钙刺激人牙髓细胞12h后,人骨涎蛋白基因- 84LUC ～ - 868LUC启动子转录活性氢氧化钙刺激组比对照组增强了2.00～2.60倍.结论 氢氧化钙诱导矿化中增强了人骨涎蛋白基因的转录,转录位点可能位于人骨涎蛋白基因启动子的- 84 ～ - 868区域.
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釉基质蛋白对人牙髓细胞中骨涎蛋白表达的影响
目的 探讨釉基质蛋白(emdogain,EMD)对人牙髓细胞中骨涎蛋白基因mRNA和蛋白水平的影响,以期发现EMD诱导矿化的机制.方法 从2011年5至7月天津医科大学口腔医院口腔颌面外科门诊因正畸需要拔除的15颗健康双尖牙中提取人牙髓组织,并传代培养人牙髓细胞,分成不同质量浓度(25、50、100和250 mg/L)EMD组和空白对照组,在培养1、3、5、7d提取总RNA,通过实时定量PCR法检测EMD对骨涎蛋白mRNA表达水平的影响；通过蛋白质印迹法检测EMD刺激入牙髓细胞1、3、5、7d骨涎蛋白在蛋白水平的表达变化.结果 实时定量PCR结果显示,在1、3、5、7d,25、50、100和250 mg/L EMD组的骨涎蛋白表达(7d时分别为1.79 ±0.03、2.03±0.10、2.67±0.08、2.94±0.07)与空白对照组(7 d:1.06±0.11)相比差异均有统计学意义(P ＜0.001)；相同质量浓度(250 mg/L)的EMD在不同时间点(1、3、5、7 d)刺激细胞,骨涎蛋白的表达(2.30±0.06、2.65±0.05、2.76±0.05、2.94 ±0.07)各组间相比差异均有统计学意义(P＜0.05)；蛋白质印迹法结果显示,250 mg/L EMD可以促进人牙髓细胞骨涎蛋白表达增加,随着刺激时间的延长,骨涎蛋白表达明显增强.结论 EMD能诱导人牙髓细胞中骨涎蛋白基因mRNA和蛋白水平的增长.
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人牙髓细胞骨基质蛋白表达的研究进展
骨基质蛋白在骨骼和牙齿形成,以及损伤修复过程中起着重要作用.本文对骨涎蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)、牙本质涎蛋白(DSP)、牙本质磷蛋白(DPP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)的表达,以及在牙齿形成、损伤修复,对组织工程中成骨组织作用等研究进展进行了概述.
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成纤维生长因子2对人乳腺癌细胞MCF7骨涎蛋白表达的影响
[目的]研究成纤维生长因子2(FGF2)对人乳腺癌细胞MCF7骨涎蛋白(BSP)表达的影响.[方法]将MCF7细胞随机分为5组:空白对照组、FGF2(10ng/ml)刺激3、6、12和24 h组,分别应用实时荧光定量PCR和免疫印迹技术检测BSP mRNA和蛋白表达水平.[结果]各实验组均有BSP的mRNA表达,其表达水平在FGF2刺激后呈时间依赖性增加,6h增强为明显.BSP蛋白表达量也呈时间依赖性增加,12h增强为明显.[结论]乳腺癌细胞MCF7组成性表达BSP,在FGF2作用下BSP表达水平呈时间依赖性增强.
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OPNmRNA与BSPmRNA在羊下颌骨牵张成骨过程中的表达
目的观察骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)与骨涎蛋白(Bone Sialoprotein BSP)在羊下颌骨牵张成骨过程中的表达情况.方法用自制的牙支抗下颌骨牵引装置,对山羊下颌骨进行牵张,速度为0.25mm/12h,共牵引16天,分别于开始牵引的8、16、32、48天取材,观察颌骨的延长情况;标本常规进行OPN与BSP mRNA的原位杂交反应,并对阳性细胞进行计数.结果羊下颌骨成功地获得了延长;8天时OPNmRNA少量出现在成纤维样细胞及幼稚的成骨细胞内,之后以成骨细胞内表达为主;阳性细胞数在16天组明显增多,32天组高,之后减少.BSPmRNA仅见于成骨细胞内,阳性细胞数随着时间延长逐渐增加.结论 OPN与BSPmRNA主要在成骨细胞内表达,与成骨细胞的成熟程度一致, 表明它们与牵张成骨过程中新骨的成熟和矿化相关.
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葛根素干预小鼠成骨细胞分化相关特征性蛋白mRNA的表达
背景：研究证实葛根素对小鼠卵巢以及与睾丸切除所致骨质疏松具有很好的防治作用，但关于葛根素对成骨细胞分化的影响却少有报道。
目的：观察葛根素对成骨细胞碱性磷酸酶mRNA、骨涎蛋白mRNA、骨桥蛋白mRNA以及骨钙素mRNA表达的影响情况。
方法：体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞，随机分为3组。空白对照组仅更换培养基；葛根素组更换为含有葛根素1×10-6 mol/L 培养基；雌二醇组更换为含有雌二醇1×10-7 mol/L 培养基。RT-PCR 法测定MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶、骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨钙素mRNA的表达
结果与结论：葛根素和雌二醇能够延长碱性磷酸酶表达时间，在第12天达到高峰；葛根素和雌二醇在第10天和第12天能够增加骨涎蛋白mRNA的表达。葛根素和雌二醇在第5天和第12天能够减少骨桥蛋白的表达；葛根素和雌二醇在第10天和第12天能够增强骨钙素表达。结果表明葛根素能够通过影响成骨细胞分化相关特征性蛋白mRNA表达，促进成骨细胞的分化，可能是葛根素抗骨质疏松的重要的细胞分子机制之一。 -
Sema7A干预钛微粒诱导鼠MC3T3-E1成骨细胞的凋亡
背景：Sema7A 是一种细胞表面蛋白，它可以促进破骨细胞的融合同时促进成骨细胞的迁移，从而影响骨的动态平衡。推测，Sema7A siRNA可能减弱钛微粒成骨细胞分化。目的：分析信号素7A(Sema7A)对钛颗粒抑制鼠MC3T3-E1前成骨细胞活性过程的影响。方法：取第六七代生长状态良好的小鼠颅骨前成骨细胞(MC3T3-E1)，分为4组培养。其中空白对照组为单独培养的细胞；标准对照组加入了钛微粒共培养；实验1组加入 Sema7A 过表达质粒，实验2组加入Sema7AsiRNA进行干扰。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况；Q-PCR检测骨涎蛋白、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达情况；Western-blot检测骨涎蛋白、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达情况；茜素红钙结节染色检测成骨细胞的矿化程度。结果与结论：结果提示标准对照组、实验1组检测到骨涎蛋白、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少而实验2组骨涎蛋白、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白则比标准对照组表达增加(P <0.05)。流式细胞仪结果提示实验1组成骨细胞凋亡率明显高于其他组(P <0.05)，而实验2组则比标准对照组凋亡率降低(P <0.05)。茜素红染色检测结果显示实验1组未见明显的矿化结节，实验2组有矿化结节形成。结果表明通过基因干扰技术抑制Sema7A活性可以对钛颗粒抑制鼠MC3T3-E1成骨细胞分化的过程进行干扰，进而为临床上用生物技术治疗磨损微粒诱导的骨溶解问题提供了一条可行的思路。
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冻存脐带间充质干细胞向成骨细胞的分化
背景：在骨组织工程中，脐带间充质干细胞是的一种新兴的种子细胞。目前认为低温冻存是长期保存细胞的有效方法。
目的：探究冻存的脐带间充质干细胞能否被诱导分化成成骨细胞。
方法：采用组织块贴壁法从脐带的华尔通氏胶组织中分离出间充质干细胞。然后，用倒置显微镜观察原代细胞的细胞形态。脐带间充质干细胞的免疫表型和细胞周期用流式细胞仪检测。在冻存6个月后，复苏第2代脐带间充质干细胞进行冻存复苏，并传代培养至12代。对第12代的脐带间充质干细胞进行成骨诱导，它的成骨能力分别通过碱性磷酸酶活性检测，骨钙素和骨涎蛋白的免疫荧光检测以及茜素红染色检测来确定。
结果与结论：原代脐带间充质干细胞呈现典型的成纤维细胞样形态。流式细胞仪显示培养的细胞高表达间充质干细胞的表面标志CD73、CD105和CD90，但是不表达造血细胞的表面标志CD34和CD45。复苏后细胞的存活率是90%。细胞周期显示P8的细胞有75%处于G0/G1期，25%处于S+G2M期。经成骨诱导液处理的第12代细胞显示出比对照组更高的碱性磷酸酶活性(P <0.01)。此外，在成骨诱导液中诱导的细胞对骨钙素和骨涎蛋白的染色呈阳性，并形成矿化了结节。冻存后的脐带间充质干细胞仍保持了它们的生物学特性，并且在成骨诱导液中能被诱导分化成成骨细胞。 -
右归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞中GPR48、ATF4、BSP表达影响实验研究
目的:通过右归丸含药血清对大鼠成骨细胞GPR48、ATF4、BSP的实验研究,探究右归丸对治疗骨质疏松症的疗效机制.从而为“肾藏精”这一理论提供实验依据.方法:将SPF级大鼠随机分为正常组、右归丸组、诱导液组、骨疏康组、福善美组,对大鼠进行灌胃5d.制备含药血清,并观察右归丸含药血清对成骨细胞的影响.结果:与正常组和阳性药物组及诱导液组相比,右归丸组的蛋白表达水平明显上升.结论:①正常大鼠骨组织中存在GPR48、ATF4、BSP蛋白表达;②右归丸组中的GPR48、ATF4、BSP与正常组相比含量均大幅提升,说明右归丸含药血清能够调控GPR48、ATF4、BSP的蛋白浓度,并可促进骨髓间充质干细胞向骨细胞分化,从而对骨质疏松症起到防治作用.
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TNF-α对大鼠牙乳头细胞中BMP2及相关蛋白的表达调节研究
目的:在大鼠牙乳头间充质细胞中探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对骨形态发生蛋白2(BMP2)及矿化相关蛋白的表达调控.方法:体外分离培养SD新生大鼠牙乳头间充质细胞,在添加 TNF-α梯度的血清培养基中诱导培养,RT-PCR 、WB及ELISA方法检测骨形态发生蛋白2(BMP2)表达情况;添加 TNF-α不同时间梯度,RT-PCR、WB检测成骨分化标志蛋白碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)表达变化.结果:TNF-α处理后,大鼠牙乳头间充质细胞中BMP2表达上调,ALP、BSP表达有所提高.结论:在大鼠牙乳头细胞中,TNF-α能够上调BMP2表达,进而诱导成牙骨质细胞矿化相关蛋白ALP,BSP表达,对牙齿发育矿化可能起到促进作用.
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骨涎蛋白在亚慢性过量氟暴露大鼠骨组织中表达水平的研究
目的 探讨亚慢性过量氟暴露对大鼠骨组织中骨涎蛋白(BSP)表达水平的影响.方法 雄性Wistar大鼠60只,体重(90±5)g,随机分为4组,对照组(饮自来水)、低氟组(饮水含氟50 mg F-/L)、中氟组(饮水含氟100 mgF-/L)、高氟组(饮水含氟150 mg F-/L).采用免疫组织化学法检测大鼠骨组织中骨涎蛋白的表达水平.结果 在同一个染氟月份内,各染氟组的平均综合光密度值均明显高于对照组(P<0.01);同一个染氟剂量组BSP的平均综合光密度值随着染氟时间的延长而不断升高(P<0.01).在同一染氟月份中,大鼠骨组织中BSP阳性表达的平均综合光密度与骨氟含量呈明显的正相关关系.结论 亚慢性过量氟暴露对大鼠骨组织中骨涎蛋白表达水平有影响,各染氟组大鼠BSP的表达水平高于对照组,且BSP的表达水平与骨氟含量间存在着明显的正相关关系.推测BSP可能在慢性氟中毒的病理性骨转换过程中发挥重要的促进作用.
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骨涎蛋白在大鼠磨牙第三期牙本质形成过程中的表达
目的:观察大鼠牙髓修复第三期牙本质形成过程中骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)的表达变化及意义.方法:选取6周龄雄性Wistar大鼠10只,建立实验大鼠模型,利用免疫组化法检测大鼠第三期牙本质中骨涎蛋白的表达情况.结果:盖髓2周后,在盖髓处下方有第三期牙本质形成.与原发性牙本质(PD)相比,第三期牙本质小管数目少且形态不规则.BSP在原发性牙本质中没有表达,但在盖髓下方和髓角下第三期牙本质中都有表达.结论:BSP可能通过参与羟基磷灰石(HA)的形成以及调节新分化的成牙本质细胞向新形成的牙本质基质的粘附来参与早期的第三期牙本质的生成.
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骨涎蛋白单克隆抗体对亲骨转移乳腺癌细胞与骨基质黏附的抑制
目的:探讨骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)单克隆抗体对亲骨转移乳腺癌细胞(MDA-MB -231-BO)与骨基质黏附的抑制作用. 方法:免疫组化方法检测MDA-MB-231-BO、肺癌细胞SPC-1、大肠癌细胞LOVO、乳腺癌细胞BSP的表达;体外骨基质黏附实验检测肿瘤细胞与骨基质的黏附,以及BSP单克隆抗体对MDA-MB-231- BO细胞与骨基质黏附的抑制;以ELISA法检测肿瘤细胞中生长因子TGF-β1分泌的变化.结果:免疫组化结果表明,MDA-MB-231-F10细胞表达BSP,SPCA-1和LOVO细胞不表达BSP;MDA-MB-231-BO细胞黏附骨基质数明显大于SPCA-1细胞和LOVO细胞(P＜0.01);BSP抗体对MDA-MB-231-BO细胞和骨基质黏附具有特异抑制作用,随着抗体质量浓度升高(25、50、100、200 μg/ml),其抑制率分别为22.1%、35.0%、39.2%、41.9%,抑制率与抗体浓度呈正相关;同时BSP抗体能特异性抑制MDA-MB-231-BO细胞与骨基质黏附所介导TGF-β1的释放.结论:BSP单克隆抗体对MDA-MB-231-BO细胞和骨基质黏附具有特异抑制作用,提示BSP抗体可抑制乳腺癌特异性骨转移.
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过量氟对大鼠切牙骨涎蛋白表达的影响
目的:研究过量氟对牙硬组织发育过程中骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)时空表达的影响,从蛋白水平上探讨氟牙症的发病机制.方法:20只Wistar大鼠随机分为对照组(饮用蒸馏水)和实验组(100mg/L F-)2组.饲养8周后处死动物,通过免疫组织化学染色观察并比较BSP在对照组与实验组大鼠牙胚上皮中的表达,采用计算机图像分析系统对免疫组化染色阳性结果进行计算机图像分析,采用SASv6.12统计软件对2组图像分析结果进行t检验.结果:对照组,各期成釉细胞排列均匀整齐,细胞形态正常,成熟的成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞中BSP表达为阳性;实验组,大鼠切牙成釉细胞由原有的高柱状变矮,细胞排列成多层,釉基质形成混乱,大鼠牙胚上皮中BSP表达显著低于对照组,P＜0.01.结论:氟化物能抑制大鼠牙胚上皮BSP的表达,提示氟可能通过抑制BSP在牙胚发育过程中的表达,从而抑制牙胚上皮细胞(成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞)的增殖分化及随后的基质合成与分泌,导致氟斑牙的形成.
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牙本质基质蛋白1、骨桥蛋白及骨涎蛋白在小鼠牙骨质形成中的组织学定位
目的:研究牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及骨涎蛋白(bore sialoprotein,BSP)在小鼠成牙骨质细胞分化及牙骨质形成中的时空分布特点.方法:取出生后第5、10、15、25天的BALB/c小鼠36只,引颈处死,解剖分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,新鲜配制4%多聚甲醛固定过夜,甲酸-甲酸钠复合脱钙液脱钙1～3周,常规石蜡包埋,近远中向5μm连续切片,免疫组化PV二步法检测DMP1、OPN及BDP的表达.采用CMIAS2000多功能真彩色病理图像分析系统,高倍镜下每张切片阳性部位沿牙骨质表面随机选取不相重叠的10个视野,计算机测量其积分光密度值,取其均值,计为该指标的1个标本的积分光密度值.相同指标重复3次,均值作为该指标在该标本中的表达强度,各指标在不同发育期的积分光密度值采用重复测量数据方差分析,分别进行统计学处理.结果:DMP1、OPN及BSP在小鼠成牙骨质细胞分化及牙骨质形成过程中呈先后不同的时相表达.DMP1表达早,出生后第5天在牙囊细胞中表达阳性,一旦牙囊开始分化为牙周膜细胞、成牙骨质细胞和成骨细胞,其表达开始转为阴性;而OPN至出生后第10天出现表达,第15天达到高峰,此后持续表达至牙发育完成的第25天;BSP直到第15天开始表达,持续到第20天后开始减弱,至牙根发育第25天近阴性表达.对3种调节因子的染色积分光密度值的方差分析结果显示:除OPN在第15～25天之间无显著性差异外,其他各因子两两比较差异均具有显著性.结论:牙骨质是由不同序贯发生的多种调节信号顺序启动牙囊细胞分化成牙骨质细胞而形成,DMP1、OPN及BSP在这一过程中先后起着重要的调节作用.
