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牙本质基质蛋白1基因转染猪成纤维细胞的实验研究
目的 评价牙本质基质蛋白1(dental matrix protein-1,DMP1)转基因修饰猪口腔黏膜成纤维细胞(porcine oral mucosa fibroblasts,POMF)后,对POMF生物学特性及DMP1表达的影响.方法 构建pEGFP-DMP1绿色荧光融合蛋白真核表达载体,脂质体介导转染POMF,同时转染猪骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)作为对照.检测转染后细胞的DMP1、釉鞘蛋白、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)基因表达以及DMP1、DSP蛋白的表达情况,同时检测转染细胞矿化诱导后钙盐染色及转染细胞三维立体培养钙结节的形成情况.结果 成功构建了DMP1真核表达载体pEGFP-DMP1,转基因后的POMF及MSC均可见有DMP1、釉鞘蛋白、DSP基因表达及DMP1、DSP蛋白表达阳性.DMP1转染POMF及MSC矿化诱导后钙盐染色,以及DMP1转染细胞三维立体培养石蜡切片HE染色,其矿化结节形成率均高于未转染细胞.结论 POMF转基因表达DMP1能增强其矿化能力,诱导牙齿发育相关基因釉鞘蛋白及DSP的表达.
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地塞米松调控牙本质基质蛋白1在成骨细胞中的表达
目的 研究地塞米松诱导成骨细胞(MC3T3-E1)中牙本质基质蛋白1(DMP1)的表达变化情况.方法 利用实时荧光定量PCR反应技术检测不同浓度的地塞米松处理MC3T3-E1细胞后不同时间段细胞中DMP1基因表达变化,通过单因素方差分析法在每个浓度和48 h下对实验组和对照组进行表达差异比较.利用蛋白印迹法(Western blot)检测10-6 g/L的地塞米松处理MC3T3-E1细胞后不同时间段的细胞中DMP1蛋白表达变化.结果 不同浓度地塞米松分别处理MC3T3-E1成骨细胞DMP1基因表达水平在24、48和72 h均较对照组0 h显著降低(P<0.05),48 h组较24和72 h组显著降低(P<0.05);48 h下10-6 g/L组较10-7 g/L组显著降低(P<0.05),而与10-5组相比较没有差异(P>0.05).10-6 g/L地塞米松处理MC3T3-E1成骨细胞后,不同时间点的DMP1蛋白表达量均较0 h降低.结论 地塞米松抑制成骨细胞MC3T3-E1中DMP1的表达,提示地塞米松可能是通过调控DMP1的表达而影响成骨细胞的骨形成.
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MAPK-ERK在牙本质基质蛋白1信号通路中的作用
目的 探讨在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、小鼠前成骨细胞(MC3T3)和成牙本质细胞(MDPC-23)中,牙本质基质蛋白1(DMP1)是否通过激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路发挥作用.方法 Western blot 检测不同时间点rDMP1C 和rDMP1F 蛋白处理hMSC、MC3T3-E1 和MDPC-23 后,对MAPK-ERK 的激活情况;并检测使用MAPK 抑制剂后,ERK 的激活是否被抑制;细胞免疫荧光技术观察MAPK 抑制剂抑制激活的ERK 从胞浆向胞核的转位情况.Western blot 检测siRNA 沉默Ras 基因后,对rDMP1 引起MAPK-ERK 信号通路激活的影响.结果 三种细胞中,rDMP1F 和rDMP1C 在5 min ～ 3 h 均可以激活MAPK-ERK 通路,而总ERK 在各时间点均无显著变化;rDMP1F 激活信号通路的持续时间均明显长于rDMP1C;MAPK 抑制剂处理组的p-ERK 条带与rDMP1F/C 处理组的p-ERK 条带差别明显.hMSC 中,rDMP1F 激活MAPK 信号通路持续时间要长于其在MC3T3 和MDPC-23 中的作用.细胞免疫荧光检测发现,MAPK 抑制剂组可以阻断ERK 向细胞核内的转位.MC3T3 和MDPC-23 在siRNA 沉默Ras 基因后,ERK 的磷酸化水平与rDMP1F 单独处理组相比显著降低.结论 rDMP1C 和rDMP1F 都通过Ras 激活MAPK-ERK信号通路,而rDMP1F 比rDMP1C 具有更强的信号功能.
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Cbfα1在人牙本质基质蛋白1基因启动子结合位点的初步定位
目的 对核心结合因子α1(core binding factor α1,Cbfα1)在人牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)基因启动子上结合位点进行初步定位.方法 DMP1基因启动子-505～+86 bp区存在成牙本质细胞分化重要的转录调控因子Cbfα1的作用位点,为验证它对DMP1是否具有直接的转录调控作用,将计算机分析结果Cbfα1结合位点(TTGGGAACCACAAGA,-199～-185 bp)进行体外定点基因突变,双酶切和DNA测序鉴定突变效果,突变后的质粒pGL3-P’-505～-86和PCMV-Osf2共转染至体外培养的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)中,报告基因检测系统检测虫萤光素酶活性的改变,单纯转染pGL3-P-505～+86组作为空白对照.结果 与PCMV-Osf2共转染后,突变pGL3-P’-505～+86共转染组在HDPSCs中的荧光素酶活性较未突变pGL3-P 505～+86共转染组明显下降(P＜0.05),突变pGL3-P’-505-+6共转染组较单纯转染pGL3-P505-+86组活性稍有升高,但无统计学意义(P＞0.05).结论 Cbfα1对DMP1基因转录具有直接的调控作用,DMP1启动子-199～-185 bp区是Cbfα1的结合位点之一.
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牙本质基质蛋白1基因转染猪体细胞的实验研究
目的 构建牙本质基质蛋白1(DMP1)绿色荧光融合蛋白pEGFP-DMP1,确定该重组质粒转染猪口腔粘膜成纤维细胞(POMFs)及骨髓间质干细胞(MSCs)的佳条件,评价DMP1转基因修饰对细胞生物学特性及DMP1基因表达的影响.方法 构建pEGFP-DMP1真核表达载体,使用不同参数评价脂质体介导基因修饰POMFs 及MSCs的转染效率,检测转染后细胞的DMP1基因表达及蛋白表达情况.结果 成功构建DMP1真核表达载体pEGFP-DMP1,酶切后得到4.7kb和1.5kb的片段,当脂质体用量为5μl、质粒2μg、转染细胞密度为30%时,DMP1基因的表达比例高,POMFs及MSCs的佳转染时间分别为3h和45min.转基因48h后的细胞可见有DMP1基因表达,免疫组化染色显示DMP1阳性.结论 选择合适的转染条件可使pEGFP-DMP1绿色荧光融合蛋白重组质粒高效转染POMFs及MSCs,并可检测到DMP1基因及DMP1蛋白表达.
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低浓度β-甘油磷酸钠培养牙髓干细胞向成牙本质细胞分化及相关因子的表达
背景：以往研究用来诱导成牙本质细胞分化的培养基普遍借鉴成骨细胞的诱导浓度，其他浓度的诱导情况尚无相关研究。目的：观察在低浓度β-甘油磷酸钠条件培养下，牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中，牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白和细胞外基质磷酸糖蛋白的表达情况。方法：分离培养人牙髓干细胞，用不同浓度的诱导液诱导牙髓干细胞分别向脂肪细胞，成骨细胞分化，证实其多向分化能力。用5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养牙髓干细胞向牙本质细胞分化，分别在培养第7，14，21，28天提取各组细胞RNA，反转录PCR检测牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白和细胞外基质磷酸糖蛋白的表达情况；诱导牙髓干细胞向成牙本质细胞分化形成的矿化结节用Alizarin Red S法检测。结果与结论：人牙髓干细胞经过诱导可证实其成功分化为脂肪细胞和成骨细胞；反转录 PCR 结果显示，5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠培养牙髓干细胞在培养7，14，21 d，各组细胞牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白的mRNA表达增加，伴随细胞外基质磷酸糖蛋白表达下调；培养至28 d，行矿化结节检测发现牙髓干细胞向成牙本质细胞成功矿化，可见红染的矿化结节。结果证实，5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养的牙髓干细胞可成功分化为成牙本质细胞，并下调细胞外基质磷酸糖蛋白mRNA的表达，同时上调牙本质基质蛋白1及牙本质涎蛋白mRNA的表达。
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牙胚细胞体外培养过程中成牙基因的表达
背景：多项实验表明牙胚组织在不同的时间点有不同的基因发挥作用，共同促进牙胚发育。
目的：观察牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1在大鼠牙胚细胞体外培养的不同时间的表达。
方法：对体外培养后第1，3，6天的牙胚细胞提取RNA，反转录后采用实时定量PCR的方法检测牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1mRNA相对表达水平的变化。
结果与结论：牙胚细胞中牙本质基质蛋白1、成釉蛋白和Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达随培养时间的延长而增加，在培养3 d时达到峰值(P<0.05)，而同源异型盒基因1 mRNA的表达随培养时间的延长而下降(P<0.05)。 -
牙本质基质蛋白1在涎腺肿瘤组织中的表达
目的:检测牙本质基质蛋白1(C-DMP1)在涎腺多形性腺瘤、黏液表皮样癌组织中的表达,探讨C-DMP1在涎腺肿瘤发生中的作用.方法:采用免疫组织化学方法,在显微镜下观察C-DMP1在30例涎腺良性肿瘤和30例恶性肿瘤组织中的分布及表达情况.结果:多形性腺瘤组织中,导管外层肌上皮细胞和黏液软骨样细胞大部分胞核显示为黄色,C-DMP1呈弱阳性表达,个别细胞胞核显示为棕褐色,呈强阳性表达,强阳性表达率为6.6%;C-DMP1在黏液表皮样癌组织中表皮样细胞胞核显示为棕褐色,呈强阳性表达,部分中间细胞胞核显示为黄色,呈弱阳性表达,而黏液细胞胞核呈阴性表达,强阳性表达率为73.3%.C-DMP1在涎腺良、恶性肿瘤组织中强阳性表达率比较差异具有显著性 (P<0.05).结论:C-DMP1在涎腺良、恶性肿瘤组织中有着不同表达变化及其分布情况,提示C-DMP1可能参与涎腺肿瘤的发生.
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双膦酸盐对骨质疏松大鼠髁突内牙本质基质蛋白1表达的影响
目的：观察双膦酸盐对去卵巢骨质疏松大鼠髁突软骨及软骨下骨牙本质基质蛋白1( dentin matrix protein1,DMP1)分布及表达的影响。方法取6月龄SD大鼠30只,随机分为假手术组(Sham组),去卵巢模型组( OVX组)和双膦酸盐药物治疗组( RIS组),每组10只。 Sham组大鼠仅术中暴露卵巢不切除,OVX组大鼠行双侧卵巢切除术+生理盐水皮下注射,RIS 组行双侧卵巢切除术+利塞膦酸钠(2.4μg/kg)皮下注射。术后3个月取大鼠髁突软骨常规脱钙,甲苯胺兰染色观察髁突软骨组织学结构,抗酒石酸酸性磷酸酶( tartrate-resistant acid phosphatase, TRAP)染色观察髁突破骨细胞的骨吸收情况,免疫组化染色观察各组髁突软骨内DMP1分布表达情况,并进行相关半定量图像分析。结果甲苯胺兰染色显示RIS组肥大软骨层显著增厚；TRAP染色显示,3组中OVX组髁突软骨下骨破骨细胞计数高,RIS组较OVX组显著减少(P<0.05)；免疫组化染色显示,各组DMP1蛋白主要表达在髁突软骨细胞层,髁突软骨下骨骨基质、骨细胞内也有表达,OVX组较Sham组、RIS组的DMP1蛋白表达显著减少(均P<0.05)。结论双膦酸盐减少骨质疏松大鼠髁突内破骨细胞数量,上调DMP1蛋白表达,从而影响髁突软骨矿化。
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二膦酸盐对骨质疏松大鼠下颌牙槽骨牙本质基质蛋白1表达的影响
目的：观察二膦酸盐对去卵巢骨质疏松大鼠下颌牙槽骨内破骨细胞以及牙本质基质蛋白1（dentin matrix protein1，DMP1）表达的影响。方法：取6月龄SD大鼠30只，随机分为假手术组（Sham)、去卵巢模型组（OVX）和二膦酸盐药物治疗组（RIS），每组10只。Sham组大鼠仅术中暴露卵巢不切除，OVX组大鼠行“双侧卵巢切除术+生理盐水皮下注射”，RIS组行“双侧卵巢切除术+利塞磷酸钠（2.4μg/kg）皮下注射”。术后3个月取各组大鼠下颌骨常规脱钙，甲苯胺兰染色观察下颌第一磨牙（M1）区域牙槽骨组织学结构，抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase， TRAP)染色观察M1区域牙槽纵隔破骨细胞的骨吸收情况，免疫组化染色观察各组M1牙槽骨DMP1分布表达情况，并进行相关半定量图像分析。结果：与Sham组相比，OVX组TRAP阳性细胞数增加；而较OVX组而言，RIS组TRAP阳性细胞数显著减少（P<0.05）。免疫组化染色显示，各组DMP1不仅表达在牙槽骨骨细胞内，牙槽间隔的松质骨骨基质、牙周韧带中均可见其表达，OVX组M1牙槽骨DMP1表达较Sham组减少（P<0.05），而RIS组表达较OVX组有升高。结论：二膦酸盐能减少骨质疏松大鼠下颌牙槽骨破骨细胞数量，并上调DMP1表达，从而影响下颌牙槽骨矿化。
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骨基质酸性蛋白DMP1在骨发育中的作用
骨基质酸性蛋白是参与骨组织发育的重要蛋白类型，牙本质基质蛋白1（DMP1）是其中的典型代表，并在骨发育和改建中起到了重要的作用。本文通过回顾DMP1的研究进展，介绍了其中的重要发现和未解决的问题，为更深入地研究和认识骨基质酸性蛋白在骨发育中的作用及相关机制提供参考。
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牙本质基质蛋白1、骨桥蛋白及骨涎蛋白在小鼠牙骨质形成中的组织学定位
目的:研究牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及骨涎蛋白(bore sialoprotein,BSP)在小鼠成牙骨质细胞分化及牙骨质形成中的时空分布特点.方法:取出生后第5、10、15、25天的BALB/c小鼠36只,引颈处死,解剖分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,新鲜配制4%多聚甲醛固定过夜,甲酸-甲酸钠复合脱钙液脱钙1～3周,常规石蜡包埋,近远中向5μm连续切片,免疫组化PV二步法检测DMP1、OPN及BDP的表达.采用CMIAS2000多功能真彩色病理图像分析系统,高倍镜下每张切片阳性部位沿牙骨质表面随机选取不相重叠的10个视野,计算机测量其积分光密度值,取其均值,计为该指标的1个标本的积分光密度值.相同指标重复3次,均值作为该指标在该标本中的表达强度,各指标在不同发育期的积分光密度值采用重复测量数据方差分析,分别进行统计学处理.结果:DMP1、OPN及BSP在小鼠成牙骨质细胞分化及牙骨质形成过程中呈先后不同的时相表达.DMP1表达早,出生后第5天在牙囊细胞中表达阳性,一旦牙囊开始分化为牙周膜细胞、成牙骨质细胞和成骨细胞,其表达开始转为阴性;而OPN至出生后第10天出现表达,第15天达到高峰,此后持续表达至牙发育完成的第25天;BSP直到第15天开始表达,持续到第20天后开始减弱,至牙根发育第25天近阴性表达.对3种调节因子的染色积分光密度值的方差分析结果显示:除OPN在第15～25天之间无显著性差异外,其他各因子两两比较差异均具有显著性.结论:牙骨质是由不同序贯发生的多种调节信号顺序启动牙囊细胞分化成牙骨质细胞而形成,DMP1、OPN及BSP在这一过程中先后起着重要的调节作用.
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DMP1、Runx2在小鼠下颌第一磨牙萌出过程中的免疫学定位
目的 研究小鼠下颌第一磨牙萌出过程中牙本质基质蛋白1(DMP1)和Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达,并探索其表达与牙萌出之间的关系.方法 分离出生后1d至14 d小鼠的下颌骨,连续切片,偶氮卡红苯胺蓝染色显示磨牙萌出过程骨胶原形成情况,切片原位杂交法分析DMP1及RUNX2mRNA在牙齿及周围组织的表达与分布,免疫组化法显示DMP1和RUNX2蛋白的表达与分布.结果 冠方骨组织中骨胶原形成在P5d出现高峰,以后呈逐渐减少的趋势;根方骨胶原形成在整个萌出过程中一直呈活跃状态,在P9d出现高峰.DMP1表达越丰富,骨胶原形成越多,成骨活动越活跃.结论 下颌第一磨牙萌出过程中,根方成骨活动一直很活跃,DMP1的表达与根方成骨活动参与了小鼠第一磨牙的萌出过程.
关键词： 牙萌出 牙本质基质蛋白1 Runt相关转录因子2 B/C小鼠 -
Nestin阳性细胞过表达DMP 1对小鼠颌骨密度的影响
目的：探讨Nestin阳性细胞中牙本质基质蛋白1（ DMP1）的作用。方法 DMP1是牙齿和骨中重要的矿化蛋白，但是Nestin阳性细胞中DMP1的作用仍不清楚。我们构建了Nestin 阳性细胞中过表达DMP1的转基因小鼠。以野生型（ wild type，WT）小鼠为对照组，通过HE染色，Micro CT检测DMP1－Tg小鼠颌骨的变化，进一步通过TRAP染色检测DMP1－Tg小鼠颌骨破骨方面的变化。结果相对于WT小鼠， DMP1－Tg小鼠颌骨骨量下降；TRAP染色显示DMP1－Tg小鼠下颌骨破骨细胞增多。结论在下颌骨发育过程中，Nestin阳性细胞中过表达DMP1对骨形成发挥抑制作用。
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牙本质基质蛋白1基因反义核酸对MDPC-23细胞内、外钙离子浓度的影响
目的观察牙本质基质蛋白1(DMP1)基因反义寡核苷酸作用下成牙本质细胞系MDPC-23细胞内、外钙离子浓度的动态变化,揭示牙本质矿化机制.方法以稳定表达DMP1的MDPC-23细胞为靶细胞,10 μmol/L反义DMP1(AS-ODN)为阻断剂,用Western blot法检测不同时间细胞DMP1的表达情况,并观察不同作用时间内MDPC-23细胞内游离钙离子[(Ca2+)if]、总钙离子[(Ca2+)it]和细胞外钙离子[(Ca2+)e]的动态变化.结果Western blot法检测DMP1蛋白在MDPC-23细胞的表达在AS-ODN加入后12 h时减弱,24h后完全阻断.与正常组和正义核酸组(S-ODN)相比较(平均荧光值为87.46±39.60),AS-ODN组(Ca2+)if先升高(平均荧光值12 h处为104.10±27.06;24 h处为98.46±19.92),AS-ODN作用24h后,(Ca2+)if又降低(平均荧光值36 h处为77.54±14.95;48 h处为68.43±22.11);(Ca2+)it明显降低,于24h处至低值(0.142±0.233)mmol/L(P＜0.01);(Ca2+)e呈上升趋势,且与对照组差异无显著性(P＞0.05).结论反义DMP1能够影响MDPC-23细胞内(Ca2+)if和(Ca2+)it浓度,提示DMP1参与调节成牙本质细胞的钙离子代谢和转运过程,可能在牙本质矿化过程中发挥作用.
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转化生长因子β1和重组人骨形成蛋白2对成牙本质细胞系MDPC-23牙本质基质蛋白1表达的影响
目的观察转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白2(bone morphhogenic protein 2,rhBMMP2)单独或联合作用对小鼠成牙本质细胞系MDPC-23牙本质基质蛋白1(dental matrix protein,DMP1)合成分泌的影响.方法利用不同浓度的TGF-β1和rhBMP2以及二者联合刺激培养MDPC-23细胞,用免疫组化SABC方法和图像分析观察分析结果.结果2 μg/L的TGF-β1能够增强MDPC-23细胞DMP1的表达;不同浓度的rhBMP2均可增强细胞DMP1的表达量,呈浓度依赖性增强;2 μg/L的TGF-β1和不同浓度的rhBMP2联合应用可明显增强DMP1的表达.诱导的DMP1主要表达于胞质和细胞突起中.结论TGF-β1和rhBMP2单独和联合应用能够增强成牙本质细胞系MDPC-23产生DMP1,二者联合应用作用更加显著,说明二者对成牙本质细胞的分泌和成熟有一定促进作用.
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RNA干扰沉默VDR基因对小鼠成骨细胞Dmp1、Cbfa1及BMP-2 mRNA表达的影响
目的:利用RNA干扰技术,阻断VDR在小鼠成骨细胞株mc3t3-E1中的表达,观察VDR表达受抑后对小鼠成骨细胞Dmp1、Cbfa1及BMP-2基因mRNA表达的影响.方法:针对小鼠VDR mRNA 144、594、852、3 628位点设计、合成4对21核苷酸siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3、siRNA4);在阳离子脂质体介导下转染mc3t3-E1细胞,以空白及非特异性siRNA作为对照,各组于转染24 h及72 h后收集细胞分别抽提RNA及蛋白.采用RT-PCR法检测细胞中VDR mRNA表达水平的改变,Western blot法检测VDR蛋白表达的变化,从而筛选有效序列.进一步应用SYBR Green荧光实时PCR方法定量检测成骨细胞功能基因-Dmp1、cbfa1及BMP-2基因mRNA表达情况.结果:与空白对照组相比,转染siRNA3、siRNA4的mc3t3-E1细胞VDR mRNA和蛋白表达明显下调(P＜0.01).转染siRNA1、2及非特异性siRNA的mc3t3-E1细胞VDR的表达与对照组相比无显著差异(P＞0.05).荧光定量PCR结果显示,转染siRNA3、siRNA4的mc3t3-E1细胞Dmp1、cbfa1、BMP-2mRNA表达明显下调(P＜0.01).结论:针对小鼠VDR mRNA 852、3 628位点设计、合成的siRNA可有效抑制小鼠成骨细胞株VDR的转录和表达;VDR表达受抑可下调mc3t3-E1细胞功能基因Dmp1、Cbfa1、BMP-2mRNA的表达;VDR在维持成骨细胞功能中起着一定的作用.
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氯离子通道5在模拟失重下磷代谢异常致骨丧失中作用的初步研究
目的：探讨氯离子通道5（chloride channel 5, CLC5）在模拟失重下磷代谢异常致骨丧失的作用机制，为失重性骨代谢异常的防治提供数据参考。方法①利用回转器对IDG?SW3骨细胞模拟失重，将骨细胞分为模拟失重组（MG组）和失重对照组（MG?CON组），2 d后采用Real?time PCR检测牙本质基质蛋白1（dentinmatrix protein 1, DMP1）和CLC5在IDG?SW3骨细胞中的表达情况；②利用尾部悬吊法对小鼠模拟失重，将10只1月龄C57BL/6雌性小鼠随机分为悬尾组（SUS组）和空白对照组（CON组），每组5只，4周后取两组小鼠胫骨制作石蜡切片进行CLC5免疫组织化学染色；③2月龄DMP1基因敲除鼠和DMP1转基因鼠各5只（体重为20~25g），制备胫骨石蜡切片，进行CLC5免疫组织化学染色。结果 Real?time PCR检测结果显示2D回转后DMP1和CLC5在IDG?SW3骨细胞中的表达量均升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；免疫组织化学染色显示CLC5在CON组和SUS组胫骨细胞胞质和基质中均有表达，且SUS组表达量明显高于CON组，差异有统计学意义（P＜0.05）；CLC5在DMP1基因敲除鼠和DMP1转基因鼠骨细胞中的表达也较CON组升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论模拟失重下CLC5参与了DMP1对磷代谢的调控，但其具体作用机制有待于进一步研究。
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牙本质基质蛋白环化重组酶启动子表达的时空特点
目的 观察牙本质基质蛋白1(DMP1)和DMP1环化重组酶(DMP1-Cre)表达的时空特点.方法 免疫组织化学染色观察胚胎晚期(E18.5)、1、3周C57BL/6J小鼠DMP1的表达,β-半乳糖苷酶(β-gal)染色观察1、3周DMP1-Cre,ROSA26(ROSA26为Cre报告基因)小鼠中DMP1-Cre表达的时间和空间特点.结果 DMP1在小鼠正常发育中,早期无明显表达,在随后的生长发育中,DMP1集中表达于皮质骨中的骨细胞,阳性细胞计数:骨细胞(35±3)个、成骨细胞(10±1)个、软骨细胞(5±1)个,与其他细胞中表达比较差异有统计学意义(P＜0.01),在成骨细胞、软骨细胞及生长板中也有少量表达;DMP1-Cre在骨细胞集中表达,阳性细胞计数:骨细胞(18±2)个、成骨细胞(5±1)个、软骨细胞(6±2)个(P＜0.01),且在软骨细胞和成骨细胞中均有少量表达(P＜0.01).结论 DMP1-Cre在骨骼系统中的多种细胞中均有表达,因此在进行相关基因操作时,这一表达特点需要在结果分析中加以考虑.
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BMP-2、bFGF基因转染的大鼠骨髓干细胞与牙胚细胞在体外混合培养对成牙基因的影响
目的:观察骨形态发生蛋白-2和(或)碱性成纤维细胞生长因子转染的大鼠骨髓干细胞(BMSCs)和牙胚细胞在体外混合培养对牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、同源异型盒基因1的影响.方法:采用实时定量PCR和Western blot的方法,检测BMP-2和(或)bFGF对成牙基因的影响.结果:对照组、bFGF组、BMP-2组、bFGF/BMP-2组四组间,AMBN、COLLAGEN-Ⅰ、DLX1、DMP1基因在mRNA和蛋白水平表达量上存在明显差异(P＜0.05).结论:BMP2和bFGF有一定的协同交互作用,BMP2/bFGF/BMSCs/牙胚细胞可以作为构建组织工程牙的种子细胞.
