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不同浓度重组人骨形成蛋白2和碱性成纤维生长因子对犬骨髓基质细胞的生物学作用
目的:骨形成过程由骨形成蛋白诱导开始,并受到多种生长因子的综合调控.为建立良好的细胞培养体系和配制含有多种生长因子的活性材料,现察不同浓度的重组人骨形成蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子对犬骨髓基质细胞增殖、成骨分化的影响.方法:实验于2007-05/07在上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔生物工程实验室完成.①实验材料:1岁beagle犬3只.重组骨形成蛋白2,碱性成纤维细胞生长因子(Peprotech).②实验方法:犬肌注麻醉后,穿刺抽取2 mL骨髓,离心制备骨髓基质细胞,进行原代培养.待细胞80%汇合时,胰酶+乙二胺四乙酸消化传代.③实验评估:取传至第3代的细胞,接种后分别加入重组骨形成蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,各自分为0,25,50,100,200 μg/L组.于第1,2,3,4,5,6天倒置显微镜下动态观察细胞形态;MTT比色法测定细胞增殖水平;碱性磷酸酶活性定量检测细胞成骨分化情况;于第6天行Von Kossa及碱性磷酸酶染色.结果:①细胞形态观察:第3代骨髓基质细胞诱导培养3 d后,多角形细胞增多,细胞逐渐向梭形或多边形转化,胞体膨大,存在大小形态不一的胞浆突起,胞核较大,位于细胞体一侧,偶见2个核仁;约6 d细胞融合,仍以长梭形或线形为主,集落生长趋势明显.②细胞增殖测定:与空白对照组比较,100,200μg/L重组骨形成蛋白2能显著促进骨髓基质细胞生长,且浓度为100μg/L时随作用时间的延长细胞生长速度增加尤为明显(P＜0.01);50μg/L碱性成纤维细胞生长因子能显著促进骨髓基质细胞生长(P＜0.05).③细胞成骨分化测定:与空白对照组比较,25 μg/L重组骨形成蛋白2能显著促进犬骨髓基质细胞分化,且随作用时间的延长细胞分化尤为明显(P＜0.01).碱性成纤维细胞生长因子无显著促进犬骨髓基质细胞分化作用.④Von Kossa染色结果:各组均有明显钙结节形成.⑤碱性磷酸酶染色结果:各组胞质内均可见紫色颗粒,呈阳性表达.结论:100 μg/L重组人骨形成蛋白2与50 μg/L碱性成纤维细胞生长因子均能有效地促进犬骨髓基质细胞增殖,25μg/L重组人骨形成蛋白2可明显促进犬骨髓基质细胞成骨分化,为构建活性骨替代材料提供良好的实验平台.
关键词： 骨髓基质细胞 重组人骨形成蛋白2 碱性成纤维细胞生长因子 -
多孔磷酸钙人工骨复合BMP-2/bFGF成骨的实验研究
目的 研究多孔磷酸钙人工骨与重组人骨形成蛋白2/碱性成纤维细胞生长因子复合后成骨的作用.方法 通过体外实验获取BMP-2/bFGF佳比例,将犬的骨髓基质细胞与PCPC/BMP-2/bFGF复合材料扫描电镜观察,以BMSCs/PCPC为对照组,BMSCs/PCPC/BMP-2、BMSCs/PCPC/bFGF、BMSCs/PCPC/BMP-2/bFGF为实验组,植入裸鼠皮下,术后4、8、16周,取材行组织学观察,计算新骨形成面积.结果 扫描电镜显示,BMSCs/PCPC/BMP-2/bFGF吸附了大量BMSCs,BMSCs/PCPC/BMP-2/bFGF组新骨形成较其他组明显增多.结论 PCPC是BMP-2/bFGF较理想的载体材料,复合后具有良好的诱导成骨作用,可作为一种新型复合人工骨修复骨缺损.
关键词： 多孔磷酸钙人工骨 重组人骨形成蛋白2 碱性成纤维细胞生长因子 成骨 -
胶原膜复合rhBMP-2引导牙周组织再生的组织学观察
目的:探讨胶原膜复合rhBMP-2对大鼠牙周组织缺损模型牙周组织再生修复的影响.方法:18只健康雄性Wistar大鼠,于下前牙龈颊沟冠方1 mm处制备实验性牙周组织缺损模型,随机分为对照组、胶原膜组(Co组)和胶原膜复合rhBMP-2组(Co/rhBMP-2组).术后4、6和8周分批处死大鼠,取实验部位进行组织学观察.结果:Co/rhBMP-2组术后4周缺损区可见大量新生骨;6周新生骨充满缺损区;8周新生牙槽骨密度较高,根面有新生牙周膜和牙骨质样组织,未见牙龈上皮长人.Co组术后4周缺损边缘可见新骨形成;6周新生骨量增多,但尚未充满缺损区;8周根面有少量牙周膜和牙骨质样组织形成.对照组术后4周缺损边缘有少量新骨沉积;6周缺损边缘可见束状胶原纤维;8周切迹内仅有少量新生牙周组织形成,并有牙龈上皮长入.结论:胶原膜复合rhBMP-2既有引导作用,防止牙龈上皮长入,维持生长空间;又具有诱导骨形成作用,能促进牙周组织修复再生.
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rhBMP2对人牙髓干细胞分化及Delta蛋白表达的影响
目的:研究重组人骨形成蛋白2(rhBMPz)对人牙髓干细胞分化及Delta蛋白表达的影响,为人牙髓干细胞的研究提供理论依据.方法:酶消化法获得人牙髓干细胞,光镜下进行形态学观察,免疫荧光法检测细胞表面标志的表达;取第5代牙髓干细胞,分为实验组(加含50肛g·L-1rhBMPz的培养液)及阴性对照组(只加入培养液),检测碱性磷酸酶活性和Delta蛋白表达的变化.结果:人牙髓干细胞呈集落状生长,免疫组织化学检测显示nestin、vimentin染色呈阳性,免疫荧光法检测STRO-1呈阳性.与阴性对照组比较,实验组第7、14及2l天碱性磷酸酶活性均明显升高(P<0.01),第21天Western blotting法检测Delta蛋白表达明显升高(PGO.05).结论:培养的牙髓干细胞具有干细胞特性,并且rhBMPz可使其碱性磷酸酶活性增高并上调Delta蛋白表达,提示Delta蛋白可能参与牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化的过程.
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TGFβ和rhBMP2对人牙周膜成纤维细胞的作用
目的研究转化生长因子β(TGFβ)和重组人骨形成蛋白2(rhBMP2)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)增殖和分化的作用.方法观察TGFβ和rhBMP2 单独、同时和相继应用对培养的HPDLFs增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)合成及矿化结节形成的作用.结果 TGFβ刺激HPDLFs增殖,对ALP活性,OC合成和矿化结节形成无明显影响;rhBMP2对HPDLFs增殖无明显作用,却显著提高其ALP活性,刺激OC合成和矿化结节形成;两者同时应用时对细胞增殖和分化的作用居于单独作用之间;先应用TGFβ对随后rhBMP2的促分化作用无明显影响;先应用rhBMP2再应用TGFβ对HPDLFs的分化具有显著的刺激作用.结论 RhBMP2能刺激HPDLFs表达成骨细胞表型,TGFβ对BMP2诱导的细胞分化具有明显的刺激作用,两者可能在促进HPDLFs向成骨细胞表型分化的不同阶段发挥作用.
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转化生长因子β1和重组人骨形成蛋白2对成牙本质细胞系MDPC-23牙本质基质蛋白1表达的影响
目的观察转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白2(bone morphhogenic protein 2,rhBMMP2)单独或联合作用对小鼠成牙本质细胞系MDPC-23牙本质基质蛋白1(dental matrix protein,DMP1)合成分泌的影响.方法利用不同浓度的TGF-β1和rhBMP2以及二者联合刺激培养MDPC-23细胞,用免疫组化SABC方法和图像分析观察分析结果.结果2 μg/L的TGF-β1能够增强MDPC-23细胞DMP1的表达;不同浓度的rhBMP2均可增强细胞DMP1的表达量,呈浓度依赖性增强;2 μg/L的TGF-β1和不同浓度的rhBMP2联合应用可明显增强DMP1的表达.诱导的DMP1主要表达于胞质和细胞突起中.结论TGF-β1和rhBMP2单独和联合应用能够增强成牙本质细胞系MDPC-23产生DMP1,二者联合应用作用更加显著,说明二者对成牙本质细胞的分泌和成熟有一定促进作用.
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重组人骨形成蛋白2/骨髓间充质干细胞复合磷酸三钙应用于脊柱融合的实验研究
观察重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)与骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合磷酸三钙(TCP)应用于大鼠腰椎横突间融合的愈合情况.体外培养大鼠BMSCs,20只SD大鼠均行单节段双侧L4,5横突间植骨融合术,依植入物的不同分为实验组与对照组,每组10只.实验组植入复合rhBMP-2和BMSCs的TCP,对照组只植入TCP.术后4周处死动物,取出腰椎,通过大体观察、手法检测、影像学、组织学等方法分析融合状况.结果表明应用rhBMP-2和BMSCs的TCP组新骨形成良好,脊柱融合效果好,生物力学强度高,融合率显著高于对照组(P＜0.05).结果提示:应用rhBMP-2和BMSCs有利于复合材料成骨和脊柱融合.
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活性纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料修复颅骨极限缺损的实验研究
目的 检测重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP-2)与纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸(nano-hydroxyapatite/collagen/polylactic acid,nHAC/PLA)复合后形成的活性nHAC/PLA(active nHAC/PLA,AnHAC/PLA)修复颅骨极限缺损的效果.方法 新西兰大白兔48只,体重2.0～2.5 kg.制备直径为15 mm的颅骨全层缺损模型,随机分成4组,每组12只.阳性对照组:缺损区植入自体髂骨;空白对照组:缺损区不植入任何材料;阴性对照组:缺损区植入nHAC/PLA实验组:缺损区植入AnHAC/PLA,每块AnHAC/PLA上平均吸附rhBMP-2 1.431 mg.术后8、16周通过比较颅骨缺损区X线阻射面积占总缺损面积百分比、HE染色和Masson's三色法染色观察颅骨极限缺损的修复情况.结果 术后8、16周,各组颅骨缺损区X线阻射程度,阳性对照组分别为67.21%±2.06%、86.48%±1.73%,空白对照组分别为5.84%±1.92%、9.48%±2.72%,阴性对照组分别为19.13%±2.51%、35.67%±3.28%,实验组分别为58.84%±2.55%、85.61%±3.36%.其中除16周实验组与阳性对照组以及空白对照组8、16周比较差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余各组各时间点比较差异均有统计学意义(P＜0.05).组织学观察显示,阳性对照组骨缺损区16周骨小梁较8周增宽,被大量骨组织充填;空白对照组8、16周骨缺损区均被纤维组织充填,无新骨生成;阴性对照16周骨缺损区为剩余材料与纤维组织充填,周边新骨较8周形成增多;实验组8周材料植入区为新生骨替代,16周新生骨呈板层状,缺损区材料残留较少,且周围可见较多成骨细胞.结论 nHAC/PLA是rhBMP-2的良好载体,两者复合后制备的AnHAC/PLA具有良好骨形成能力,有望应用于临床上修复较大型骨缺损.
关键词： 重组人骨形成蛋白2 活性纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸 颅骨极限缺损 兔 -
多孔磷酸钙人工骨与重组人骨形成蛋白2复合修复骨缺损的实验研究
目的 研究多孔磷酸钙人工骨(porous calcium phosphate cement, PCPC)与重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2, rhBMP-2)复合后体外的缓释作用及其对兔骨缺损的修复作用. 方法 采用物理吸附法将rhBMP-2(0.4 mg)溶液吸附至PCPC中,制备成PCPC/rhBMP-2复合材料.冻干后,扫描电镜观察复合材料内部形态.以包覆壳聚糖的PCPC/rhBMP-2为实验组,单纯PCPC/rhBMP-2为对照组,测试在模拟体液中的rhBMP-2缓释行为.取新西兰大白兔12只,股骨远端制成直径4.2 mm,深5.0 mm的骨缺损模型.将包覆壳聚糖的PCPC/rhBMP-2复合材料修复骨缺损作为实验组,以植入单纯PCPC作为对照组.术后观察动物一般情况,于4周和8周取材行X线片和组织学观察. 结果 扫描电镜显示PCPC/rhBMP-2复合材料孔隙中吸附了大量的rhBMP-2. rhBMP-2体外缓释:对照组rhBMP-2于150 h基本全部释放;实验组rhBMP-2于350 h缓释量约达99%,较对照组慢.动物实验:动物术后切口无感染,于4周行动自如.X线片示术后4周对照组骨缺损区材料清晰,实验组骨缺损区密度大部分接近宿主骨,材料模糊;8周对照组材料边缘较术后4周模糊,实验组骨缺损区密度已基本接近宿主骨.组织学观察,术后4周对照组可见少量成骨细胞和破骨细胞,实验组可见成熟骨组织和骨髓腔,新生骨逐渐取代材料;8周对照组可见大量成骨细胞和破骨细胞,少量新生骨并向材料内长入,实验组可见成熟骨小梁和骨髓组织. 结论 PCPC是rhBMP-2较理想的载体材料,复合后具有良好的诱导成骨作用,可作为一种新型复合人工骨修复骨缺损,具有良好的临床应用前景.
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壳聚糖与重组人骨形成蛋白2复合物体外成骨作用的研究
目的探讨复合重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2, rhBMP-2)的壳聚糖-明胶支架的体外成骨作用. 方法将rhBMP-2与壳聚糖-明胶支架复合,按2×104/ml的密度接种成骨细胞系或成肌细胞系至rhBMP-2复合材料上,以及无rhBMP-2复合的对照材料上.A组(2T3成骨细胞接种组),其中实验A组:复合有rhBMP-2的材料14块,分别于接种培养第3、7、14和21天各取3块,以管家基因β-tubulin为内参照,RT-PCR行半定量分析,测定骨钙素基因表达水平,余2块于第14天终止培养,茜素红-S染色观察钙盐沉积情况;对照A组:未复合rhBMP-2的材料5块,接种培养至14 d终止,其中3块用于测定骨钙素基因表达,2块测定钙盐沉积.B组(C2C12成肌细胞接种组),实验组及对照组情况、培养时间及检测指标同A组.另取接种有rhBMP-2的材料2块接种2T3成骨细胞,培养3 d后扫描电镜观察细胞与材料的黏附情况. 结果 A组培养3 d,扫描电镜可见成骨细胞紧密黏附于多孔材料网表面,生长状态良好.实验A组成骨细胞中骨钙素基因的表达为1.28±0.17,对照A组14 d为0.56±0.09,表明复合rhBMP-2可促进材料中骨钙素基因表达,两者差异有统计学意义(P＜0.01);rhBMP-2还可诱导不表达骨钙素基因的C2C12成肌细胞出现基因表达,B组培养21 d,实验B组为0.58±0.13,对照B组为0,差异有统计学意义(P＜0.01).茜素红-S染色可见,A组材料网络内均有不同程度的钙盐沉积.接种相同的细胞时,复合有rhBMP-2的材料中有更多的钙盐沉积. 结论复合有rhBMP-2的壳聚糖-明胶人工骨支架材料在体外具有良好的诱导成骨能力.
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重组人骨形成蛋白2与骨诱导剂对大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化的影响
目的 观察重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP-2)与骨诱导剂对SD大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的增殖与成骨作用.方法 体外培养大鼠MSCs,分为实验组与对照组.对照组:不加rhBMP-2与骨诱导剂.实验组:骨诱导剂单独作用于SD大鼠MSCs(A组);rhBMP-2分别以浓度为10(B组)、50(C组)、100(D组)、200 μg/L(E组)单独作用于SD大鼠MSCs;rhBMP-2分别以浓度为10(F组)、50(G组)、100(H组)、200 μg/L(I组)联合骨诱导剂作用于SD大鼠MSCs.测定第3、6、9、12天的增殖状况(MTT法)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和骨钙素(osteocalcin,OC)水平.结果 倒置相差显微镜观察SD大鼠MSCs原代培养时,细胞接种12 h后即可贴壁;48 h细胞成梭形,形似成纤维细胞;4 d时细胞为多角形、纺锤形;6 d时,成纤维细胞散在分布,少量呈集落样生长,为漩涡状、放射状排列;10 d左右,细胞基本铺满瓶底,融合成片.传代细胞5～7 d即可长满瓶底.各时间点A～I组均能显著促进MSCs成骨活性(ALP和OC)的表达.B～E组同时具有促进MSCs增殖作用,并呈浓度依赖性;F～I组增殖及ALP、OC含量均高于A～E组,比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 rhBMP-2与骨诱导剂联合作用可在促进MSCs增殖的同时提高其成骨活性.
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转化生长因子β及重组人骨形成蛋白2对雪旺细胞生物学行为影响的实验研究
目的研究转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)、重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP-2) 对雪旺细胞生物学行为的影响. 方法体外培养SD乳鼠雪旺细胞, 按5×103/孔接种96孔板,分为3组.A组:加入50 ng/ml TGF-β;B组:加入50 ng/ml rhBMP-2;C组不作任何处理,作为空白对照组.采用MTT法每天取4孔连测9 d细胞数,并绘制生长曲线;流式细胞仪测定细胞周期以观察雪旺细胞增殖情况;ELISA双夹心法测定培养液中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)含量. 结果 MTT法检测显示A、B组细胞生长曲线远离C组,逐渐上升到第8、9天差异明显,A组较B组上升趋势更明显,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞仪测定显示A组和B组细胞增殖指数较C组高(P<0.05).ELISA法检测A组上清NGF含量高,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论外源性TGF-β、rhBMP-2均能促进雪旺细胞增殖和分泌NGF的功能,而TGF-β更优于rhBMP-2.
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重组人骨形成蛋白2诱导的骨膜细胞构建组织工程骨的实验研究
目的通过组织工程技术方法,研究细胞-材料复合体体内骨再生的能力. 方法采用材料学自组装技术的原理,以I型胶原蛋白为分子模板,引导钙磷盐在液相中的矿化,制备具有天然骨基质层状结构的羟基磷灰石/胶原复合材料,并以热致分相法制备羟基磷灰石/胶原-聚乳酸[hydroxyapatite/collagen-poly-(L-lactic acid),HAC-PLA]复合三维多孔框架,与重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP-2)诱导分化后的兔骨膜细胞构建组织工程骨,进行体外电镜及组织学观察.将3月龄裸鼠18只,分为3组,每组6只.A组皮下注射经rhBMP-2处理后的骨膜细胞悬液,B组植入未复合细胞的HAC-PLA,C组植入rhBMP-2处理后的细胞-材料复合体.术后8周取材行组织学观察,C组与B组及A组进行比较. 结果三维多孔HAC-PLA框架材料孔隙率大于90%,孔径为50～300 μm.骨膜细胞经500 ng/ml的rhBMP-2处理后,与改善亲水性后的HAC-PLA三维多孔框架复合,构建组织工程骨.电镜显示接种的细胞能在此组织工程骨内部生长增殖,术后8周C组有新骨形成,A组注射部位表面平整,无新生物,B组为纤维组织,无骨及软骨形成. 结论所构建的组织工程骨有望成为骨创伤修复治疗一种新的技术.
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rhBMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化
目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protem)特异的细胞内信号转导分子Smad1在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制.方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein,rhBMP2)刺激培养的细胞,对照组用0.2%FCS的DMEM的培养液培养,不加任何刺激.免疫组化观察.结果:TGF-β1和rhBMP2刺激组均可见Smad1蛋白表达,但与对照组相比无明显差异;rhBMP2组可见Smad1从胞浆转位至核内聚集,TGF-β1组未见此作用.结论:首次观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程,提示BMP2在牙乳头细胞内信号传递可能是通过Smad1转位至核内引起基因表达实现的.
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重组人骨形成蛋白2对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用
目的:研究重组人骨形成蛋白2(rhBMP2)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的生物学作用.方法:原代培养HPDLFs,并观察rhBMP2对HPDLFs增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(Oc)合成及矿化结节形成的作用.结果:0.25～2 mg/ml rhBMP2对HPDLFs的增殖无明显作用,0.5～2 mg/ml rhBMP2显著提高HPDLFs的ALP活性,刺激OC合成和矿化结节形成.结论:rhBMP2对HPDLFs的作用具有剂量依赖性.rhBMP2能够刺激HPDLFs表达成骨细胞表型并促进其表型成熟.
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聚乳酸聚乙二醇复合骨形成蛋白修复下颌骨缺损
目的:探讨聚乳酸聚乙二醇嵌段共聚物作为人工骨支架材料的可行性.方法:制备聚乳酸聚乙二醇嵌段共聚物/重组人骨形成蛋白2多孔复合材料,测定其压缩强度和压缩模量;人为制造兔下颌骨缺损模型,分别植入该材料(实验组)和不含骨形成蛋白的聚乳酸聚乙二醇多孔材料(对照组),于2、4、8、16 周处死动物,通过组织病理学观察和光密度分析来评价该材料的成骨效果以及制备方法是否合理.结果:复合材料的压缩强度为(30.05±3.12) MPa,压缩模量为(371.67±12.37) MPa;实验组在各个时期均可见到新生骨形成,且新生骨逐渐向材料内部生长,对照组仅在初期有少量新生骨出现;实验组各个时段的光密度明显高于对照组,在16 周时实验组缺损区同周围骨组织密度近似(P>0.5).结论:多孔材料的制备方法未破坏骨形成蛋白活性,复合材料具有较好的体内成骨能力,聚乳酸聚乙二醇嵌段共聚物可作为人工骨支架材料.
关键词： 乳酸聚乙二醇嵌段共聚物 重组人骨形成蛋白2 下颌骨缺损 -
rhBMP2用于间接盖髓的动物实验研究
目的:观察重组人骨形成蛋白2( rhBMP2)作间接盖髓剂时对牙本质形成的影响.方法:采用间接盖髓术,在规定时间内给狗口服四环素,在135 d拔除试验牙,制作牙磨片,在萤光显微镜下观察修复性牙本质形成情况.结果:所形成修复性牙本质的量,rhBMP2明显多于对照组.结论:rhBMP2用于间接盖髓,同样有高效的诱导作用.它将是一种很有价值、应用性很强的生物活性间接盖髓剂.
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TGF-β、rhBMP-2体外诱导下颌突外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化
目的:探讨TGFβ、rhBMP-2体外诱导外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化的能力.方法:取妊娠12.5 d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞,分别在含60、100 mmol/L的TGF-β和1.6、3.2 mmol/L的rhBMP-2的DMEM/F12中培养.相差显微镜下观察细胞的形态变化,免疫组化鉴定细胞性质. 结果:培养2 d,60 pmol/L 的TGF-β组细胞形态发生明显变化,细胞变得大而扁平,培养4 d,免疫组化鉴定约70%的细胞分化为平滑肌细胞.rhBMP-2组细胞形态未见明显改变,1.6 nmol/L组免疫组化鉴定约5%的细胞分化为平滑肌细胞,未能诱导分化出神经元细胞.未加LIF的对照组细胞出现向平滑肌细胞的自然分化.结论:TGFβ、rhBMP-2可诱导外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化.
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rhBMP2不同动物异位诱导成骨及其小鼠体内诱导成骨的剂量依赖性
目的:对大肠杆菌表达的hBMP2在小鼠体内进行剂量依赖性研究,并观察其在大鼠和家兔体内异位诱导成骨情况,为临床应用提供参考.方法:大鼠、家兔股部肌袋植入rhBMP21.5和3.0 mg,植入后1、2、4周取材观察成骨情况;小鼠股部肌袋植入100～100μg的rhBMP2,植入后1、2、3周取材,行组织学检查,成骨量分析,碱性磷酸酶和钙含量测定.结果:大鼠植入1.5mg rhBMP2植入2周、家兔3.0 mg rhBMP2植入4周表现为高效成骨活性.rhBMP2小鼠体内诱导成骨实验表现为成骨量,碱性磷酸酶活性和钙含量显著的剂量依赖性.结论:原核表达的hBMP在小鼠、大鼠和家兔体内有高效的诱导成骨活性,小鼠体内实验rhBMP2表现为明显的剂量依赖性.
