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核相关转录因子2对LOVO细胞裸鼠移植瘤的影响
目的:探讨核相关转录因子2(Runx2)基因表达对直肠癌细胞株LOVO细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响.方法:采用RT-PCR法检测直肠癌及癌旁组织中Runx2 mRNA的表达.荧光定量RT-PCR和Western blotting分别检测转染48 h细胞中Runx2 mRNA、蛋白表达;CCK-8检测增殖,克隆形成实验观察Runx2对LOVO的的影响;TUNEL法检测细胞凋亡;裸鼠移植瘤实验检测Runx2表达联合X射线照射对直肠癌细胞的生长抑制作用.结果:Runx2 mRNA在人直肠癌细胞组织中的相对表达水平为0.83±0.31,癌旁组织为0.43±0.25(P<0.05).与对照组(0.88±0.09)相比,下调组细胞Runx2的基因相对表达水平(0.23±0.04)显著降低,上调组细胞中的Runx2 mRNA表达水平(1.47±0.09)显著升高.Runx2下调组直肠癌LOVO细胞放射敏感性降低,Runx2上调组放射敏感性升高(P<0.05).下调组增殖被抑制,凋亡率(58.16±0.92)%增加(P<0.05);Runx2上调组LOVO细胞增殖能力明显增强,细胞凋亡率(13.23±0.37)%降低(P<0.05).20 Gy X射线照射后,Runx2下调组瘤体平均体积(2.53±0.23)cm3较对照组(3.82±0.31)cm3明显减小(P<0.05),上调组平均体积明显变大(5.21±0.21)cm3(P<0.05).结论:下调Runx2表达能抑制人直肠癌细胞LOVO细胞裸鼠移植瘤的生长,增强瘤体的放射敏感性.
关键词： 直肠癌 Runt相关转录因子2 移植瘤 裸鼠 -
淫羊藿苷促进骨髓间充质干细胞成骨分化
背景：传统中药淫羊藿应用于各类骨科疾病有着悠久的历史，其主要成分之一淫羊藿苷有多种生物学效应。目的：探讨淫羊藿苷在体内及体外对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用及机制。方法：在体外存在或不存在成骨诱导培养的条件下，用淫羊藿苷作用于骨髓间充质干细胞，通过RT-PCR检测runx2、ocn和osx基因的表达情况，以及通过茜素红染色检测成骨细胞分泌的钙结节数量。用淫羊藿苷喂养大鼠(2 mg/d)5周后，进行MicroCT扫描并分析胫骨上段骨结构。结果与结论：①无论是否存在成骨诱导培养条件，淫羊藿苷均能促进成骨分化相关基因的表达；②在成骨诱导培养时，淫羊藿苷能明显增加钙结节沉积；③动物实验表明淫羊藿苷能显著促进骨小梁的生成。
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前交叉韧带离断骨关节炎大鼠印第安刺猬蛋白以及Runt相关转录因子2的表达
背景：印第安刺猬蛋白(Ihh)及其信号蛋白Gli1以及Runt相关转录因子2(Runx2)是骨关节炎密切相关的因子，在骨关节炎发病过程中，是引起关节退行性改变的重要原因之一。
目的：探索Ihh，Gli1以及Runx2在骨关节炎发病过程中的作用。
方法：将30只SD大鼠随机分成对照组(n=10)和模型组(n=20)。模型组大鼠取一侧膝关节行前交叉韧带离断建立骨关节炎模型，分别于造模后4周及12周，各取10只大鼠进行观察。对照组大鼠仅暴露前交叉韧带，于术后12周进行观察。
结果与结论：与对照组相比，造模4周后可见骨关节炎模型大鼠膝关节出现软骨退变，膝关节软骨中 Ihh， Gli1及Runx2表达水平明显增高，而造模12周后软骨退变进一步加重，但膝关节软骨中Ihh，Gli1及Runx2表达水平下降。提示Ihh，Gli1及Runx2在骨关节炎退变过程中起重要作用，其表达水平在骨关节炎的早期即明显升高，可作为骨关节炎防治研究中的评价指标。 -
中等强度运动对2型糖尿病大鼠间充质干细胞的影响
目的 探究糖尿病大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向成骨细胞分化能力的改变及中等强度运动对糖尿病大鼠BM-SC的成骨诱导能力的影响.方法 40只6周龄雄性SD大鼠按体重分层分为对照组(n=8)和糖尿病建模组(n=32).通过高脂饲料喂养和注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,将建模成功的大鼠按体重分层分为糖尿病组(n=9)和糖尿病运动组(n=8).提取每组2只大鼠右腿胫骨的BMSC以每孔5×106的密度铺于6孔板上,利用平板计数法(CFU)方法检测其增殖情况;3只大鼠右腿胫骨的的BMSC分别种至大皿中,体外分离培养,7 d后提取BMSC中总RNA用RT-PCR法检测Runt相关转录因子(Runx)2、核因子κB受体活化因子(RANK)和RANK配体(L)mRNA的表达.结果 大鼠BMSC经过体外培养7 d,经碱性磷酸酶(ALP)染色,糖尿病运动组6孔板的成骨细胞数目多,并且显著多于糖尿病组.与对照组相比,糖尿病组Runx2 mRNA表达显著下调(P<0.05);与糖尿病组相比,糖尿病运动组Runx2 mRNA表达显著上调(P<0.01).与对照组相比,糖尿病组RANK和RANKL mRNA表达显著上调(P<0.01);与糖尿病组相比,糖尿病运动组RANK和RANKL mRNA表达显著下调(P<0.01).结论 中等强度运动可以改善糖尿病大鼠BMSC向成骨细胞分化的能力.
关键词： 运动 糖尿病 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 Runt相关转录因子2 核因子κB受体活化因子 -
芪麝丸对直立大鼠腰椎骨质增生的影响
目的:观察芪麝丸对长期直立大鼠腰椎骨质增生的影响,探讨其可能的作用机制.方法:30只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和芪麝丸组.正常对照组不进行处理,普通饲养笼喂养.模型组和芪麝丸组大鼠行手术截断前肢配合强迫站立建立长期直立大鼠模型.芪麝丸组于术后8个月开始予芪麝丸5 g/(kg·d)灌胃,连续灌胃1个月.所有大鼠术后9个月处死并取材,第5腰椎椎体行藏红-固绿染色、天狼星红染色观察病理学改变,免疫组织化学法检测Ⅰ型胶原、Ⅹ型胶原、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)表达;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术检测第1～3腰椎生长板及椎间盘Ⅰ型胶原α2(type Ⅰ collagen α2,Col 1α2)、Ⅹ型胶原α1(type Ⅹ collagen α1,Col 10α1)、TGF-β1、VEGF和runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)基因的表达.结果:藏红-固绿染色显示模型组椎体边缘-椎间盘连接处非基质成分增加,发生骨质增生;正常对照组改变不明显;芪麝丸组与模型组比,相同部位非基质成分较少.天狼星红染色示正常对照组椎体边缘-椎间盘连接处胶原排列致密,模型组该处Ⅰ型和Ⅲ型胶原增加,芪麝丸组椎体边缘-椎间盘连接处胶原致密,以Ⅰ型胶原为主.免疫组织化学检测提示模型组骨质增生形成部位Ⅹ型胶原、VEGF和TGF-β1表达均较正常对照组增加,芪麝丸组Ⅹ型胶原和VEGF表达均较模型组减少,而TGF-β1表达无明显改变.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应示芪麝丸组Col10α1和Runx2基因表达较模型组下降(P<0.01).结论:芪麝丸能延缓腰椎边缘-椎间盘连接处骨质增生形成,其机制可能与减少增生骨质中细胞外基质Ⅹ型胶原的含量和椎间盘Ⅹ型胶原及Runx2基因表达有关.
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低氧条件下RUNX2对小鼠乳腺癌4T1细胞凋亡的影响
目的:探讨Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)在低氧环境下对小鼠乳腺癌4T1细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:Real-time PCR和Western blotting分别检测低氧条件对4T1细胞内RUNX1、RUNX2、RUNX3 mRNA和RUNX2蛋白表达的影响;采用小干扰RNA技术与真核重组质粒DNA过表达技术降低或者提高4T1细胞RUNX2的表达,免疫共沉淀法检测4T1细胞中RUNX2与其他蛋白之间的相互结合情况,流式细胞术检测常氧/低氧条件下干扰/过表达RUNX2对4T1细胞凋亡的影响.结果:低氧条件下4T1细胞中RUNX1和RUNX2 mRNA的表达水平上调(P＜0.05),RUNX2的蛋白表达量明显增加;转染RUNX2-siRNA-1415和真核表达载体pcDNA3.1 (-)-RUNX2可使4T1细胞内RUNX2水平明显降低或升高;在常氧或低氧条件下,沉默RUNX2 mRNA的表达均导致小鼠乳腺癌4T1细胞凋亡率上升[常氧:(12.83±0.24)％ vs(9.3±0.55)％,P＜0.05;低氧:(19.77±0.59)％vs (15.13±0.32)％,P＜0.05],而过表达RUNX2均导致4T1细胞凋亡率下降[常氧:(9.97±0.27)％vs (14.07±0.80)％,P＜0.05;低氧:(22.43±1.02)％vs(34.93±0.71)％,P＜0.05].在低氧条件下,缺氧诱导因子-1α(hypoxia induced factor-1α,HIF-1 α)与RUNX2的表达上升,RUNX2能与HIF-1α形成复合物.结论:在肿瘤低氧微环境中,RUNX2高表达于小鼠乳腺癌4T1细胞中,高表达的RUNX2可能是通过与HIF-1 α的相互作用而抑制肿瘤细胞的凋亡.
关键词： 乳腺癌细胞 Runt相关转录因子2 RNA干扰 低氧环境 细胞凋亡 -
Runx2在人退变腰椎间盘软骨终板中的表达及意义
目的 观察Runx2在人退变腰椎间盘软骨终板中的表达情况并探讨其与软骨终板退变的关系.方法 收集人腰椎间盘软骨终板组织42例,其中,椎体骨折患者的手术标本20例为对照组,椎间盘退变患者的手术标本22例为实验组.H-E染色、免疫组织化学法、及PCR法检测Runx2的表达量;Western印迹法检测两组之间Runx2、aggrecan及collagen I的表达量.结果 对照组终板软骨结构清晰完整,而退变组的软骨终板结构破坏严重.正常终板软骨中几乎没有Runx2的表达,退变的软骨终板可见明显的Runx2阳性细胞.轻度退变组、中度退变组和重度退变组Runx2 mRNA的表达量分别为对照组的(4.74±0.78)、(7.74±0.97)、(16.97±1.89)倍.Runx2 mRNA的表达量与腰椎间盘软骨终板退变的程度呈明显的正相关.Western印迹法显示,轻度退变组Runx2、aggrecan及collagen I蛋白表达量分别为对照组的(2.79±0.52)倍、(0.48±0.12)、(0.67±0.17)差异有统计学意义(均P<0.05);中度退变组Runx2、aggrecan及collagen I蛋白表达量分别为对照组的(4.40±1.78)倍、(0.23±0.14)、(0.36±0.12)差异有统计学意义(均P<0.01);重度退变组Runx2、aggrecan及collagen I蛋白表达量分别为对照组的(8.75±1.88)倍、(0.13±0.09)、(0.08±0.03)差异有统计学意义(均P<0.01).结论 Runx2可以作为预测腰椎间盘退变和软骨终板退变严重程度的指标,并可作为治疗腰椎间盘退变性疾病的潜在靶点.
关键词： 椎间盘退变 腰椎 软骨终板退变 Runt相关转录因子2 -
Runx2在牙齿发育过程中的表达研究进展
Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2，Runx2）是一种在成骨细胞分化及牙齿的发育过程中起着重要作用的转录因子，牙齿以及骨组织中的特异性基质蛋白在转录水平均受其调控。本文结合 Runx2的转录因子特性以及在牙齿发育过程中的表达特征，认为 Runx2可能是牙齿发育和矿化的重要转录调控因子。
关键词： Runt相关转录因子2 牙生长发育 -
DMP1、Runx2在小鼠下颌第一磨牙萌出过程中的免疫学定位
目的 研究小鼠下颌第一磨牙萌出过程中牙本质基质蛋白1(DMP1)和Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达,并探索其表达与牙萌出之间的关系.方法 分离出生后1d至14 d小鼠的下颌骨,连续切片,偶氮卡红苯胺蓝染色显示磨牙萌出过程骨胶原形成情况,切片原位杂交法分析DMP1及RUNX2mRNA在牙齿及周围组织的表达与分布,免疫组化法显示DMP1和RUNX2蛋白的表达与分布.结果 冠方骨组织中骨胶原形成在P5d出现高峰,以后呈逐渐减少的趋势;根方骨胶原形成在整个萌出过程中一直呈活跃状态,在P9d出现高峰.DMP1表达越丰富,骨胶原形成越多,成骨活动越活跃.结论 下颌第一磨牙萌出过程中,根方成骨活动一直很活跃,DMP1的表达与根方成骨活动参与了小鼠第一磨牙的萌出过程.
关键词： 牙萌出 牙本质基质蛋白1 Runt相关转录因子2 B/C小鼠 -
IB期非小细胞肺癌Runx2、Ezrin表达与术后转移的相关性
目的：探讨IB期非小细胞肺癌（NSCLC）组织中runt相关转录因子2（Runx2）与埃兹蛋白（Ezrin）表达与临床生物学行为及术后复发转移的关系。方法收集IB期NSCLC手术切除石蜡标本40例，根据术后3年内有无复发转移分为复发／转移组和对照组，每组20例。应用免疫组化方法检测石蜡组织中Runx2与Ezrin的表达，并应用Kaplan-Meier法分析其表达与IB期NSCLC患者无病生存率之间的关系。结果复发／转移组Runx2、Ezrin的阳性表达率明显高于对照组（P＝0．004，P＝0．011）。Runx2、Ezrin的阳性表达在低分化的IB 期NSCLC组织中较中、高分化组织中高（P＝0．016，P＝0．009）；Runx2与Ezrin的表达呈显著正相关（r＝0．646，P＝0．001）。Runx2阳性和阴性表达患者术后3年无病生存率分别为30．4％、76．5％，差异有统计学意义（P＝0．010）；Ezrin阳性和阴性表达患者术后3年无病生存率分别为31．8％、72．2％，差异有统计学意义（P＝0．011）。结论 Runx2及Ezrin表达与IB期NSCLC术后复发／转移密切相关，可以作为评估 IB期NSCLC 患者预后的指标。
关键词： Runt相关转录因子2 埃兹蛋白 非小细胞肺癌 肿瘤转移 -
不同浓度一氧化碳释放分子-3对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
目的 探讨不同浓度一氧化碳释放分子-3(CORM-3)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响.方法 实验分A、B两部分,各部分均包括5组,A部分:矿化组,100、200、400 μmol/L CORM-3组,对照组;B部分:矿化组,100、200、400 μmol/L CORM-3-矿化组,对照组.采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测成骨相关基因Runx2和OPNmRNA与蛋白的表达,茜素红染色检测成骨能力.采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析.结果 100、200 μmol/L CORM-3可促进BMSCs增殖,差异有统计学意义(P =0.034,P＜0.001);单纯CORM-3对BMSCs成骨分化无影响;BMSCs经200、400 μmol/L CORM-3预处理后再行矿化诱导,7d后大鼠BMSCs的Runx2和OPNmRNA表达增强,与矿化组比较差异有统计学意义(Runx2:P=0.005,P=0.006;OPN:P=0.010,P=0.028),其蛋白表达及21 d后的成骨能力较矿化组均明显增强,且200 μmol/L CORM-3预处理的效果优于400μmol/L CORM-3.结论 CORM-3预处理可促进体外BMSCs成骨分化,200 μmol/L为CORM-3用于实验的适宜浓度.
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补肾化痰方对去卵巢大鼠骨形成的影响及其作用机制研究
目的:观察补肾化痰方对去卵巢大鼠骨形成的影响及其作用机制.方法:将30只6月龄SPF级雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和补肾化痰组,每组10只.模型组和补肾化痰组大鼠手术摘除双侧卵巢,假手术组不摘除卵巢,只切除卵巢周围与双侧卵巢质量相等的脂肪组织.造模术后5周开始,补肾化痰组以0.94 g· mL-1补肾化痰方药液灌胃,假手术组和模型组以等体积生理盐水灌胃,均每天1次,连续干预8周.药物干预结束后,将所有大鼠处死,摘除双侧眼球取血检测血清骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-2、Runt相关转录因子(Runt related transcription factor,RUNX)-2含量,取左侧股骨行Micro CT扫描测定骨密度、骨小梁数量、骨小梁平均厚度、骨小梁分离度,取右侧股骨上端部分骨片以蛋白免疫印迹法测定骨组织中BMP-2、RUNX-2含量,取右侧股骨下端部分骨片以免疫组织化学法检测BMP-2、RUNX-2的定位.结果:①一般情况.所有大鼠均在造模手术麻醉3～4h后完全清醒,正常进食,1周后切口完全愈合.药物干预过程中,模型组1只大鼠死亡、补肾化痰组2只大鼠死亡.②血清BMP-2、RUNX-2含量检测结果.3组大鼠的血清BMP-2含量比较,差异有统计学意义[(245.40±10.10)pg·mL-1,(111.03±29.75)pg·mL-1,(190.35±14.00) pg·mL-1,F=109.998,P=0.000];模型组、补肾化痰组的血清BMP-2含量均低于假手术组(P =0.000,P=0.000),补肾化痰组的血清BMP-2含量高于模型组(P=0.000).3组大鼠的血清RUNX-2含量比较,差异有统计学意义[(4 131.04±277.39) pg·mL-1,(1 601.09±266.10) pg·mL-1,(3 134.90±202.33) pg·mL-1,F=237.192,P=0.000];模型组、补肾化痰组的血清RUNX-2含量均低于假手术组(P =0.000,P=0.000),补肾化痰组的血清RUNX-2含量高于模型组(P =0.000).③股骨Micro CT扫描结果.3组大鼠骨密度比较,差异有统计学意义[(556.90±8.86) mg HA·cm-3,(498.81±9.26) nmg HA·cm-3,(530.17±10.70) nmg HA·cm-3,F=90.488,P=0.000];模型组、补肾化痰组的骨密度均低于假手术组(P=0.000,P=0.000),补肾化痰组的骨密度高于模型组(P=0.000).3组大鼠骨小梁数量比较,差异有统计学意义[(2.65±0.32)个·mm-1,(1.74±0.22)个·mm-1,(2.41±0.33)个·mm-1,F=23.900,P=0.000];模型组的骨小梁数量少于补肾化痰组和假手术组(P =0.000,P=0.000),补肾化痰组的骨小梁数量与假手术组比较,差异无统计学意义(P =0.224).3组大鼠骨小梁平均厚度比较,差异有统计学意义[(109.33±16.12) μm,(79.27±18.17)μm,(95.73±11.38)μm,F=8.730,P=0.001];模型组的骨小梁平均厚度低于假手术组(P=0.001),补肾化痰组的骨小梁平均厚度分别与假手术组和模型组比较,差异无统计学意义(P=0.181,P=0.098).3组大鼠骨小梁分离度比较,差异有统计学意义[(350.95±68.46) μm,(472.33±33.70) μm,(406.68±47.77) μm,F=12.460,P=0.000];模型组、补肾化痰组的骨小梁分离度均高于假手术组(P=0.000,P=0.036),补肾化痰组的骨小梁分离度低于模型组(P=0.017).④股骨组织中BMP-2、RUNX-2蛋白含量检测结果.3组大鼠股骨组织中的BMP-2含量比较,差异有统计学意义(0.73±0.03,0.26±0.02,0.48±0.02,F=738.111,P =0.000);模型组、补肾化痰组股骨组织中的BMP-2含量均低于假手术组(P=0.000,P=0.000),补肾化痰组股骨组织中的BMP-2含量高于模型组(P=0.000).3组大鼠股骨组织中的RUNX-2含量比较,差异有统计学意义(0.67±0.03,0.36±0.03,0.47±0.02,F=286.493,P=0.000);模型组、补肾化痰组股骨组织中的RUNX-2含量均低于假手术组(P=0.000,P=0.000),补肾化痰组股骨组织中的RUNX-2含量高于模型组(P =0.000).⑤股骨组织中BMP-2、RUNX-2蛋白定位检测结果.BMP-2、RUNX-2的阳性表达主要位于骨髓基质细胞胞浆及骨小梁周边成骨细胞中,光学显微镜下阳性表达蛋白呈棕黄色颗粒.结论:补肾化痰方能通过调节BMP-2/Smads/RUNX-2信号转导通路,促进去卵巢大鼠的骨形成.
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股密葆含药血清对成骨细胞分化成熟的影响及其作用机制
目的:探讨股密葆含药血清对成骨细胞分化成熟的影响及其作用机制.方法:将20只2月龄雌性SD大鼠随机分成4组,对照组8只,高、中、低浓度股密葆组各4只.对照组按10 mL·kg-1体质量以生理盐水灌胃,高浓度组按10 mL·kg-1体质量以2 430 mg· mL-1股密葆混悬液灌胃,中浓度组按10 mL·kg-1体质量以1 215 mg· mL-1股密葆混悬液灌胃,低浓度组按10mL·kg-1体质量以607.5 mg· mL-1股密葆混悬液灌胃.每天灌胃1次,连续3d.末次灌胃后lh提取各组实验大鼠含药血清,低温保存备用.将10只新生SD大鼠处死,取其颅骨,采用多次酶消化法分离出成骨细胞.将第1代成骨细胞分别在含有对照组大鼠血清及高、中、低浓度股密葆含药血清的培养基中培养1周后,采用染色法检测碱性磷酸酶表达情况,采用Western Blotting法检测Ⅰ型胶原、Runt相关转录因子2、β连环素及转录因子4的蛋白表达情况.结果:①成骨细胞中碱性磷酸酶的表达.与对照组比较,各浓度股密葆含药血清组碱性磷酸酶染色较深,其中中浓度组染色深.②成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白的表达.对照组、高浓度组、中浓度组、低浓度组Ⅰ型胶原蛋白的表达量比较,差异有统计学意义[(1.172±0.047),(2.023±0.131),(2.792±0.737),(2.235±0.525),F=6.466,P=0.016].组间两两比较,中浓度组、低浓度组高于对照组(P=0.003,P=0.022);高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.052);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).③成骨细胞中Runt相关转录因子2蛋白的表达.各组Runt相关转录因子2蛋白的表达量比较,差异有统计学意义[(1.968±0.263),(2.255±0.286),(2.675±0.181),(2.652±0.211),F=6.066,P=0.019].组间两两比较,中浓度组、低浓度组高于对照组(P=0.007,P=0.008);高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.180);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).④成骨细胞中β连环蛋白的表达.各组β连环蛋白表达量比较,差异有统计学意义[(1.571±0.140),(2.264±0.265),(2.783±0.432),(2.860±0.576),F=6.980,P=0.013].组间两两比较,中、低浓度组均高于对照组(P =0.005,P=0.004);高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.061);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).⑤成骨细胞中转录因子4蛋白的表达.各组转录因子4蛋白表达量比较,差异有统计学意义[(3.268±0.298),(3.941±0.360),(4.446±0.443),(4.186±0.249),F=6.431,P=0.016].组间两两比较,高、中、低浓度组均高于对照组(P=0.044,P=0.003,P=0.012);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:适当浓度股密葆含药血清可促进成骨细胞的分化,其作用机制或许与Wnt/β连环素信号通路的激活有关.
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柚皮苷对体外培养骨髓间充质干细胞Runx-2和Osterix表达及骨质疏松模型大鼠骨强度的影响
目的:探讨柚皮苷对体外培养骨髓间充质干细胞Runx-2和Osterix表达及骨质疏松模型大鼠骨强度的作用.方法:采用髓腔冲洗离心法从雌性Lewis大鼠股骨获取骨髓间充质干细胞,将传代培养后的细胞分为5组.A组不进行干预,B组加入二甲基亚砜,C、D、E组分别加入浓度为1 μg·mL-1、10 μg·mL-1、100 μg·mL-1的柚皮苷.培养6 h后收集细胞采用RT-PCR法测定各组细胞Runx-2和Osterix的mRNA表达水平.将24只雌性SD大鼠的卵巢切除,3个月后将其随机分为4组,每组6只.Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别以60 mg·kg-1、300 mg·kg-1和1 500 mg·kg-1柚皮苷灌胃,Ⅳ组给予等体积的PBS灌胃,每天灌胃1次,持续2个月.药物干预结束后,测定大鼠股骨强度和胫骨骨小梁面积.结果:①Runx-2 mRNA和Osterix mRNA表达水平.B、C、D、E组大鼠骨髓间充质干细胞Runx-2 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义[(1.10±0.02),(2.05±0.31),(2.76±0.14),(1.82±0.10),F=44.021,P=0.000].进一步两两比较,C、D、E组Runx - 2 mRNA表达水平高于B组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);D组高于C组和E组(P=0.001,P=0.000);C组和E组比较,差异无统计学意义(P=0.153).B、C、D、E组Osterix mRNA表达水平比较,差异有统计学意义[(1.02±0.10),(1.11±1.35),(3.24±0.30),(2.55±0.35),F=7.037,P=0.012].进一步两两比较,D组和E组Osterix mRNA表达水平高于B组(P=0.031,P=0.005);C组和B组比较,差异无统计学意义(P=0.886);C组低于D组和E组(P=0.006,P=0.039);D组和E组比较,差异无统计学意义(P=0.267).②股骨生物力学强度.4组骨质疏松模型大鼠股骨强度比较,差异有统计学意义[(773.36±9.21)N·mm-1,(805.66±16.00)N·mm-1,(766.70±38.96)N·mm-1,(707.46±15.88)N·mm-1,F=37.776,P=0.000].进一步两两比较,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组股骨强度均高于Ⅳ组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);Ⅰ组和Ⅲ组比较,差异无统计学意义(P=0.509);Ⅱ组高于Ⅰ组和Ⅲ组(P=0.004,P=0.001).③胫骨骨小梁面积.4组骨质疏松模型大鼠胫骨骨小梁面积比较,差异有统计学意义[(22.26±2.32),(25.10±2.18),(23.66±3.26),(15.63±2.00),F=14.168,P=0.000].进一步两两比较,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组胫骨骨小梁面积均大于Ⅳ组(P=0.001,P=0.000,P=0.000);Ⅰ组与Ⅱ组和Ⅲ组比较,差异均无统计学意义(P=0.090,P=0.387);Ⅱ组和Ⅲ组比较,差异无统计学意义(P=0.374).结论:柚皮苷可促进体外培养的骨髓间充质干细胞中Runx - 2和Osterix的表达,增强骨质疏松模型大鼠的骨强度,增大骨小梁面积.
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雌激素缺乏对大鼠第三期牙本质形成的影响
目的 探讨雌激素缺乏通过调节Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)表达在大鼠第三期牙本质形成过程中的作用.方法 40只SD大鼠随机分为去卵巢组和假手术组各20只,去卵巢组行双侧卵巢摘除术;假手术组仅切除卵巢周围附着的脂肪组织,保留卵巢.2组均于术后1周以上颌第一磨牙为对象制备牙髓损伤动物模型.2组于损伤即刻,损伤后7、14、21d分别处死5只大鼠,取上颌骨组织行HE染色,观察上颌第一磨牙第三期牙本质的形成情况;放射免疫法检测血清雌二醇水平;免疫组织化学法检测大鼠牙髓腔Runx2阳性细胞表达情况.结果 去卵巢组大鼠牙髓损伤即刻血清雌二醇水平[(41.22±5.36)ng/L]与假手术组[(41.02±8.21)ng/L]比较差异无统计学意义(P＞0.05),损伤后7、14、21d血清雌二醇[(9.77±6.17)、(9.03±6.23)、(10.30±7.39)ng/L]水平均低于假手术组[(39.98±7.29)、(39.26±9.25)、(39.83±8.58)ng/L](P＜0.05);光静下损伤即刻2组可见少量中性粒细胞浸润,损伤后7d可见牙髓炎性反应加重,伴大量炎症细胞浸润,成牙本质细胞排列紊乱,损伤后14 d可见骨样及牙本质样钙化组织形成,损伤后21 d假手术组第三期牙本质生成较去卵巢组多;损伤后即刻,去卵巢组Runx2阳性细胞表达率[(7.8±3.2)％]与假手术组[(8.0±2.6)％]比较差异无统计学意义(P＞0.05),损伤后7、14、21 d,去卵巢组Runx2阳性细胞表达率[(22.0±5.8)％、(12.2±6.3)％、(7.0±2.9)％]均低于假手术组[(30.0±5.1)％、(17.6±7.1)％、(13.4±6.7)％](P＜0.05).结论 雌激素缺乏可通过下调Runx2表达来抑制大鼠第三期牙本质的形成.
关键词： 雌激素缺乏 第三期牙本质 Runt相关转录因子2 大鼠 -
脉冲电磁场对去卵巢大鼠Runt相关转录因子2表达的影响
目的 观察脉冲电磁场(PEMFs)对去卵巢大鼠骨细胞Runt相关转录因子2(Runx2)表达的影响,并探讨PEMFs治疗骨质疏松可能的作用机制.方法 将60只Sprague Dawley(SD)雌性大鼠按随机数字表法分成假手术对照组(Sham组)、去卵巢组(OVX组)、去卵巢+阿伦磷酸钠药物治疗组(ALN组)、去卵巢+脉冲电磁场治疗组(PEMFs组),每组15只大鼠,按文献方法,Sham组切除双侧卵巢周围脂肪组织,其余各组大鼠切除双侧卵巢制成骨质疏松模型.手术结束后第30天,ALN组大鼠开始给予阿伦磷酸钠灌胃,PEMFs治疗组大鼠予以PEMFs治疗,Sham组和OVX组不干预.各组动物均于干预30 d后采用腹腔注射戊巴比妥钠处死,取股骨行骨密度检测;采用Western bloting检测Runx2蛋白表达量;采用q-PCR检测Runx2 mRNA表达量.结果 干预30 d后,PEMFs组的骨密度值、Runx2蛋白表达水平和Runx2 mRNA表达水平较OVX组均有明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);但PEMFs组的骨密度值、Runx2蛋白表达水平和Runx2 mRNA表达水平与ALN组比较,组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PEMFs可上调去卵巢SD雌性大鼠的Runx2蛋白和mRNA表达水平,可能是PEMFs治疗骨质疏松的机制之一.
关键词： 骨质疏松 脉冲电磁场 Runt相关转录因子2 -
Runt相关转录因子2在食管鳞癌组织的表达及其临床意义
目的 探讨Runt相关转录因子2(RUNX2)在食管鳞癌组织的表达及临床意义.方法 通过癌症基因组图谱数据库(TCGA)分析RUNX2在食管癌组织中mRNA的表达.分别采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫组织化学的方法检测80例食管鳞癌患者癌组织和癌旁正常食管黏膜组织中RUNX2mRNA及蛋白的表达,分析RUNX2蛋白的表达水平与患者临床病理参数的相关性,以及RUNX2的表达对食管鳞癌患者预后的意义.结果 通过TCGA数据库分析显示RUNX2mRNA在食管癌、食管鳞癌中的表达显著升高,P=0.000、P=0.002.食管鳞癌组织中RUNX2mRNA(P=0.000)及蛋白(16.942,P=0.000)的表达水平显著高于癌旁正常食管黏膜组织.RUNX2蛋白的表达与患者肿瘤的侵袭程度(6.138,P=0.013)、分化程度(6.277,P=0.014)、TNM分期(3.903,P=0.048)显著相关.RUNX2高表达的患者总生存率(P=0.048)和无进展生存率(P =0.025)显著降低.多因素分析显示RUNX2的表达水平是患者总生存率(P=0.000)和无进展生存率(P =0.002)的独立预后因素.结论 RUNX2的表达与食管鳞癌的发生发展密切相关.
关键词： 食管鳞癌 Runt相关转录因子2 预后 -
Runt相关转录因子2基因在骨骼发育及间充质干细胞分化中的作用进展
Runt相关转录因子2(Runx2)是Runt相关基因家族成员之一,在个体发育和肿瘤发生等方面起重要作用.Runx2作为成骨细胞和软骨细胞形成过程中的关键调节因子,参与骨骼发育多个步骤的调节,对于成骨细胞和软骨细胞的发育成熟均起重要的作用.对于成骨细胞,Runx2在体内不仅是调控间充质干细胞向成骨细胞分化起始阶段的重要转录因子,又能抑制成骨细胞的成熟和增殖,阻止成骨细胞继续向骨细胞分化.对软骨细胞,Runx2可以影响软骨细胞的分化发育和肥大的进程,促进软骨细胞的肥大,还参与肥大过程中新生血管的生成,促进软骨内成骨;Runx2还可以促进软骨细胞的增殖和静止期软骨的肥大化,影响关节软骨的稳态.Runx2还影响体外间充质干细胞分化的过程,是应力以及缺氧等调控成骨分化的靶基因,也影响着成软骨分化的进程.我们就Runx2对骨骼发育及体外间充质干细胞分化的作用作一综述.
关键词： Runt相关转录因子2 成骨细胞 软骨细胞 干细胞分化 综述 -
低频脉冲电磁场对激素性股骨头坏死骨组织过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2及Runt相关转录因子2表达的影响
目的 观察低频脉冲电磁场(LF-PEMF)对大鼠激素性股骨头坏死(SANFH)骨组织过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)及Runt相关转录因子2(Runx2)表达的影响.方法 将42只Wistar大鼠随机分为3组:(1)模型组(S,n=16),尾静脉注射10 μg/kg大肠杆菌内毒素;24 h后臀肌注射20 mg/kg甲基泼尼松龙,24h 1次,共3次.造模后不予磁场照射;(2)磁场治疗组(S+P,n=16),造模方法同前,4周后给予磁场照射(15 Hz,4.5 ms,1.2 mT),4 h/d,共8周;(3)空白对照组(C,n=10),不造模,不予磁场照射.磁场治疗8周后处死所有大鼠,取股骨头组织行苏木素-伊红(HE)染色,采用反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)及Western blot检测骨组织内PPAR-γ2及Runx2的表达.结果 S组SANFH发病率(69％)及空骨陷窝率[(59.55±21.70)％]明显高于S+P组[31％、(36.16±15.34)％,P＜0.05]及C组[0％、(8.79±2.42)％,P＜0.05];S组股骨头组织内PPAR-γ2 mRNA及蛋白的表达显著高于S+P组及C组,差异有统计学意义(P＜0.05);而Runx2mRNA及蛋白的表达则显著低于S+P组及C组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LF-PEMF是一种无创、安全而有效的治疗早期SANFH的方法,可能机制是下调骨坏死骨组织内PPAR-γ2的表达,上调Runx2的表达,抑制脂肪生成,促进骨形成,降低骨坏死率.
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小干扰RNA抑制人RUNT相关转录因子2、半乳糖凝集素-3的表达及其对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察人RUNT相关转录因子2(Runx2)和半乳糖凝集素3(Galectin-3)在胶质瘤细胞U251中的表达及其相互关系,抑制两者的表达对脑胶质瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响.方法 使用RNA干扰技术处理U251细胞,应用逆转录·聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测Runx2和Galectin-3在mRNA和蛋白水平的改变；应用噻唑蓝(MTT)方法和流式细胞仪检测细胞增殖活性和凋亡的变化.结果 使用Runx2小干扰RNA(siRNA)处理U251细胞后,Runx2 (0.260±0.074)和Galectin-3(0.170±0.065)在mRNA和蛋白水平的表达均下降(P＜0.01),使用Galectin-3siRNA处理U251细胞后,Galectin-3在mRNA水平和蛋白水平的表达下降(P＜0.01),但Runx2的表达无明显变化(P＞0.05)；抑制Runx2和Galectin-3的表达后,胶质瘤U251细胞的增殖活性下降(P＜0.01),凋亡率增加(P＜0.01).结论 Runx2、Galectin-3在胶质瘤细胞株U251中表达,且Runx2调控Galectin-3的表达,抑制两者的表达可抑制U251细胞的增殖,促进细胞凋亡,丽者可能参与了胶质瘤的发生发展.
关键词： 胶质瘤 小干扰RNA Runt相关转录因子2 半乳糖凝集素3
