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肾移植术后受者PBMC中TNF-α mRNA的表达
同种异体肾移植是目前治疗终末期肾有效的方法,而移植成功与否受多因素影响,其中手术技术与排斥反应是关键的因素.随着手术技术的日趋成熟和免疫抑制治疗的不断完善,肾移植术后患者存活率显著提高.TNF-α是移植排斥反应中的重要调节因子之一,可以介导多种炎症和免疫反应.近年来,TNF-α已逐步用于器官移植中排斥反应的预测与诊断[1].以往研究主要是用放射免疫方法检测血浆中可溶性TNF-α,而检测细胞内TNF-α的mRNA表达鲜有报道.本试验采用RT-PCR方法检测肾移植术后发生排斥、感染和稳定患者外周血PBMC中TNF-α mRNA的表达情况,旨在讨论其能否作为肾移植术后免疫状态的评估指标,辅助指导临床用药.
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HCCR mRNA在急性白血病患者中的表达及其临床意义
人类子宫颈癌基因(HCCR)是新近确认的一种致癌基因,早由韩国学者Ko等[1]通过差异显示RT-PCR方法从子宫颈癌细胞中筛选、鉴定而出.HCCR基因定位于人染色体12q,分为2个亚型,分别为HCCR1(基因库登记号AF195651)和HCCR2(基因库登记号AF315598).HCCR1和HCCR2编码序列具有高度同源性,为同一mRNA的不同剪切体.研究表明,将表达HCCR1或HCCR2的细胞接种到裸鼠体内可以形成肿瘤,HCCR基因导致肿瘤的发生可能是通过对p53抑癌基因的负向调控而实现的.
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PPARγ蛋白在人肺高、低转移涎腺腺样囊性癌细胞系中的作用
目的：探讨过氧化物增殖体激活物受体γ（ PPARγ）在涎腺腺样囊性癌（ SACC ）肺转移细胞中的表达及其与转移的关系。方法利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时定量PCR（Quantitative Real-time PCR）方法检测肺高转移性涎腺腺样囊性癌（SACC-LM）及肺低转移性涎腺腺样囊性癌（SACC-83）细胞系中PPARγmRNA的表达水平。结果 SACC-LM细胞系中PPARγmRNA表达水平是SACC-83细胞中表达水平的4．346939倍（ P ＜0．01）。结论PPARγ在SACC肺高低转移细胞系中的差异表达，初步证实PPARγ在SACC远处转移方面有重要作用。
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蛋白激酶CK2-β在涎腺腺样囊性癌肺转移中的作用
目的:探讨蛋白激酶CK2-β(PKCK2-β)在涎腺腺样囊性癌(SACC)肺转移细胞中的表达及其与转移的关系.方法:利用RT-PCR方法进行mRNA表达分析.结果:在SACC肺转移细胞中,随着PKCK2-β被抑制程度的提高,nm23-H1的表达增加,肿瘤转移能力下降.结论:PKCK2-β的表达与SACC的肺转移呈正相关.
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线粒体融合基因2抑制骨肉瘤及其干细胞增殖功能分析对其转移机制的影响
目的:探讨线粒体融合基因2(Mfn2)抑制骨肉瘤增值及对其转移机制的影响.方法:①将MG63骨肉瘤细胞系(该骨肉瘤细胞系国内外研究常用且可靠)体外培养,通过球体培养实验(Sphere Culture Assay)分离出骨肉瘤干细胞,运用RT-PCR技术检测Mfn2在骨肉瘤MG63、骨肉瘤干细胞中的表达情况及对骨肉瘤增殖情况的影响.②选取6组8周龄NOD/SCID小鼠各20只作为研究对象,建立骨肉瘤成瘤和肺转移动物模型,随机分为转染pEGFP-Mfn2骨肉瘤MG63组、转染pEGFP-Mfn2骨肉瘤干细胞组、转染空质粒pEGFP-N1骨肉瘤MG63组、转染空质粒pEGFP-N1骨肉瘤干细胞组和空白对照2组,研究不同组分骨肉瘤肺转移情况.结果:骨肉瘤MG63细胞中Mfn2表达水平高于干细胞(P＜0.05).RT-PCR技术检测结果表明Mfn2在骨肉瘤MG63细胞中较干细胞中呈高表达,骨肉瘤干细胞表达Mfn2低于普通MG63细胞,Mfn2转染骨肉瘤干细胞前、后分析,第1天、第3天骨肉瘤干细胞数量差异无统计学意义(P＞0.05),转染后第5天、第7天骨肉瘤干细胞数量均少于转染前(P＜0.05),转染pEGFP-Mfn2骨肉瘤MG63组和转染pEGFP-Mfn2骨肉瘤干细胞组的小鼠骨肉瘤肺部转移均较转染空质粒pEGFP-N1骨肉瘤MG63组、转染空质粒pEGFP-N1骨肉瘤干细胞组和空白组低(P＜0.05).而转染pEGFP-Mfn2骨肉瘤干细胞组的小鼠骨肉瘤肺部转移较转染pEGFP-Mfn2骨肉瘤MG63组低(P＜0.05).转染空质粒pEGFP-N1骨肉瘤MG63组和空白对照骨肉瘤MG63组均较转染空质粒pEGFP-N1骨肉瘤干细胞组和空白对照骨肉瘤干细胞组骨肉瘤肺转移率低(P＜0.05).其余差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Mfn2属于一种抑癌基因,能抑制骨肉瘤及其干细胞增殖能力,并且能抑制肿瘤的转移,能为临床骨肉瘤的治疗提供新的靶点.
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肺癌患者MDR1和MRP基因共同表达的研究
目的检测60例肺癌组织,10例正常肺组织中MDR4和MRP基因表达水平与临床化疗疗效的关系.方法采用RT-PCR方法.结果MDR1检出率:正常肺组织10%(1/10),肺癌组织30%(18/60),其中,鳞癌6.7%(4/60),腺癌20%(12/60),大细胞癌3.3%(2/60);MRP检出率:正常肺组织0%(0/10),肺癌组织73.3%(44/60),SCLC3.3%(2/60),鳞癌36.7%(22/60),腺癌26.7%(16/60),大细胞癌6.7%(4/60).MDR1和MRP基因虽过度表达,二者并无显著相关性(P＞0.05),且与病理分型及TNM分期均无明显相关性(P＞0.05);肿瘤组织与正常组织的MRP基因表达具有极显著性差异(P＜0.05),但MRP的表达与既往化疗无关,术前化疗组MDR1基因表达75%(6/8),略高于未经化疗组23%(12/52),虽无统计学意义(P＞0.005),但MDR1似有增高趋势;联合检测MDR1和MRP基因表达,能提高体外耐药敏感性符合率(83%).结论(1)肺癌MDR1是多种耐药机制共同作用的结果;(2)MRP基因表达似有分布规律:鳞癌＞腺癌＞大细胞癌＞SCLC;MDR1则为腺癌＞鳞癌＞大细胞癌＞SCLC;(3)MDR1可能与获得性耐药有关,而MRP却与自然耐药性有关;(4)联合检测MDR1和MRP基因表达,能更准确地预测化疗效果,为临床化疗方案的个体化设计提供理论依据.
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多药耐药基因在初发及复发转移大肠癌组织中表达的研究
目的检测初发及复发转移大肠癌组织中多药耐药基因(MDR-1)的表达,探讨其与病理类型及化疗疗效的关系.方法应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法对56例初发大肠癌手术切除癌组织标本及40例经术后辅助化疗后复发、转移大肠癌的复发转移癌灶组织进行检测,并与癌组织的病理类型及化疗疗效作对比研究.结果56例初发大肠癌组织MDR-1阳性表达率23.2%与病理类型无显著相关(P＞0.05);但与肠系膜淋巴结转移密切相关,有淋巴结转移者阳性表达率显著高于无淋巴结转移者(P＜0.05);40例化疗后复发、转移癌灶组织的MDR-1阳性表达率62.5%,与初发大肠癌组织的MDR-1阳性表达率相比差异有显著性(P＜0.05),且MDR-1的表达与化疗疗效呈负相关,MDR-1阳性表达者化疗疗效明显低于阴性表达者(P＜0.05).结论大肠癌组织存在先天性和获得性多药耐药性;检测MDR-1表达情况可以判断化疗疗效;对临床化疗方案的制定有较大的指导意义.
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初发及复发转移大肠癌患者外周血MDR-1基因表达的研究
目的:检测初发及复发转移大肠癌患者外周血中多药耐药基因(MDR-1)的表达,探讨其与病理类型及化疗疗效的关系.方法:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法对56例初发大肠癌及40例经术后辅助化疗后复发、转移大肠癌患者的外周血进行检测,并与其病理类型及化疗疗效作对比研究.结果:56例初发大肠癌患者外周血中MDR-1阳性表达率为27.2%,与病理类型无显著相关(P＞0.05);但与肠系膜淋巴结转移密切相关,有淋巴结转移者阳性表达率显著高于无淋巴结转移者(P＜0.05);40例化疗后复发、转移患者外周血MDR-1阳性表达率为72.5%,与初发大肠癌患者的MDR-1阳性表达率相比差异有显著性(P＜0.05),且MDR-1的表达与化疗疗效呈负相关,MDR-1阳性表达者化疗疗效明显低于阴性表达者(P＜0.05).结论:大肠癌存在先天性和获得性多药耐药性;检测外周血MDR-1表达情况可以帮助预测化疗疗效,对制定临床化疗方案有指导意义.
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寻常性银屑病皮损表皮Dsg1 mRNA的表达
银屑病特征性的病理改变不仅与角质形成细胞(KC)异常增殖有关,也与KC凋亡异常有关[1-2].凋亡是由天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族(caspase)成员介导的蛋白酶级联反应过程,其中caspase-3是主要的凋亡效应分子.桥粒芯糖蛋白1(Dsg1)是caspase底物蛋白.我们采用RT-PCR方法从mRNA水平检测Dsg1与caspase-3在银屑病皮损中的表达,以探讨Dsg1在银屑病皮损表皮KC凋亡中的作用.
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玫瑰糠疹患者外周血淋巴细胞Toll样受体3、7、9的表达
目的 探讨Toll样受体在玫瑰糠疹发病中的作用.方法 选择玫瑰糠疹患者40例以及正常对照者40例,RT-PCR方法检测外周血淋巴细胞中TLR3、7、9 mRNA的表达情况.结果 玫瑰糠疹患者TLR3、7、9的mRNA与正常人对照组相比表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).玫瑰糠疹组TLR3与TLR7,TLR3与TLR9呈正相关性(P＜0.05).玫瑰糠疹组TLR7与TLR9,以及对照组TLR3、7、9之间无相关性.结论 玫瑰糠疹发病可能与病毒通过Toll样受体途径作用于机体免疫系统有关.
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宫颈癌组织中生存素基因表达及意义
宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤,其发病率及病死率在我国呈上升趋势,其发生、发展是一个多基因、多阶段的演进过程.生存素(survivin)基因是近年新发现的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族成员之一,能抑制细胞凋亡、促进细胞增殖,与肿瘤的发生、发展有密切关系[1].本研究采用RT-PCR方法对宫颈癌组织中生存素基因进行检测,探讨生存素基因的表达规律及其与预后之间的关系.
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显微切割结合RNA线性扩增技术的应用
背景与目的:当对无间质细胞混杂的肿瘤细胞进行选择性分析时,显微切割技术是不可缺少的,然而,从显微切割所得的细胞中获取足够 RNA量相当困难.本文的目的是寻找一特异方法,将鼻咽癌细胞从肿瘤间质细胞中分离出来 ,并对其扩增 ,以备进一步研究.方法:采用显微切割技术从鼻咽癌组织冰冻切片中获取鼻咽癌细胞,提取 RNA并对微量 RNA进行体外转录,然后,用 RT- PCR分别验证扩增 RNA的β-actin和 GADPH基因表达水平.结果:从鼻咽癌组织中获取了 20 000～ 40 000个细胞,抽提 RNA, 扩增后获得了片断大小为 0.5～ 2.5 kb的 RNA, 在β-actin、 GADPH表达完整.结论:显微切割结合 RNA线性扩增技术能成功地获取较为单一的鼻咽癌细胞,扩增后的 RNA完整性较好,能运用于进一步研究中 .
