CXCR7在涎腺腺样囊性癌中的实验研究

目的 研究趋化因子受体7(Chemokine receptor7,CXCR7)在涎腺腺样囊性癌(ACC)中的表达,探讨其与侵袭、转移和预后的关系.方法 采用免疫组化方法检测17例正常涎腺组织、47例涎腺多形性腺瘤、41例涎腺腺样囊性癌及其切缘组织切片中CXCR7表达情况,结合临床病例资料,分析CXCR7对ACC侵袭、转移和预后的影响.结果 涎腺腺样囊性癌中CXCR7表达率显著高于其他各组,差异具有统计学意义(P＜0.05),与神经侵袭、淋巴结转移、远处转移密切相关;Kaplan-Merier曲线显示,CXCR7阳性表达组患者与CXCR7阴性表达组患者术后生存率比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 CXCR7表达与ACC的神经侵袭、淋巴结转移、远处转移有关,有助于预后判断.

粘着斑激酶在SACC-LM及SACC-83细胞中的活性及表达变化

目的:探讨粘着斑激酶(FAK)在涎腺腺样囊性癌细胞中的活性及表达变化.方法:同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测肺高转移性涎腺腺样囊性癌(SACC-LM)及涎腺腺样囊性癌(SACC)83细胞系中FAK mRNA和蛋白表达;同时测定FAK酶活力.所得实验数据采用SPSS12.0统计软件进行,t检验进行组间比较.结果:SACC-LM细胞中的FAK活性为(18.320±2.050)pmol·min-1·μg-1,SACC-83细胞中的FAK活性为(0.873±0.091)pmol·min-1·μg-1.与SACC -83细胞相比,SACC-LM细胞中FAK具有较高的活性(t=13.865,P＜0.01).FAKmRNA在SACC-LM细胞中的表达量为0.883±0.052,明显高于其在SACC-83细胞中的表达量(0.637±0.081,t=4.952,P<0.05).在SACC-LM细胞中FAK蛋白的表达高于在SACC-83细胞中的表达.结论:FAK蛋白活性变化及蛋白表达与SACC的侵袭有关.

涎腺腺样囊性癌增殖、侵袭及转移相关信号通路的研究进展

涎腺腺样囊性癌是常见的涎腺恶性肿瘤之一,其生长缓慢、侵袭性强,常沿骨膜和神经扩散,早期即可发生远处转移.涎腺腺样囊性的侵袭和转移是一个多阶段、多因素参与的过程,涉及复杂的机制和多条信号转导通路.文章就相关信号通路的研究进展进行综述.

miR-181a靶向SLUG抑制涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移

目的 研究miR-181a靶向SLUG抑制涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移.方法 利用生物信息学软件预测出侵袭转移相关基因SLUG为miR-181a的候选靶基因.利用双荧光素酶报告基因检测验证miR-181a对靶基因SLUG的直接调控作用.在SACC-LM细胞中沉默SLUG后通过细胞划痕和Transwell实验检测转染后细胞侵袭迁移能力的改变.结果 生物信息学软件预测发现,SLUG mRNA序列中包含miR-181a的结合位点.双荧光素酶报告基因实验证实,与对照组相比,miR-18la mimics与psi-CHECK-2-SLUG-3' UTR共转染组细胞内荧光素酶活性明显下降(P＜0.05),而miR-18la mimics与psi-CHECK-2-SLUG-mut-3'UTR共转染组细胞内荧光素酶活性无明显变化(P＞0.05),即SLUG为miR-18la的靶基因.转染SLUG siRNA可成功沉默SACC-LM细胞中内源性表达的SLUG,同时细胞的侵袭迁移能力明显下降(P＜0.05).结论 SLUG为miR-181a的靶基因.miR-181a可靶向调控SLUG,从而调控涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移.

涎腺腺样囊性癌细胞生物学特性的探讨

一、材料和方法1.材料: 将正常涎腺23例和腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma, ACC)26例常规10%甲醛固定,石蜡包埋并切成4 μm厚切片以备HE染色和免疫组化染色.单克隆和多克隆抗体S-100A1、S-100A2、S-100A4、S-100A6 和S-100B均由瑞士的Zurich大学的CW Heizmann教授馈赠.其余的抗体来源如下:GFAP6F-2(MoAb),GFAP(PoAb ),NSE(MoAb),vimentin(MoAb),EMA(MoAb)和CEA(PoAb)购自Dako,Denmark.GFAP GA5(MoAb,Novocastra Ltd),GFAP G-A-5(MoAb,Boehringer,Biochemica)、K8.12(MoAb,Bio-marker,Israel)、KL1(MoAb,Immunotech,France)、Anti-PKK1(MoAb, Labsystems,Finland).各抗体的工作浓度均根据说明书.

全国涎腺腺样囊性癌专题研讨会会议纪要

阻断FAK表达对涎腺腺样囊性癌细胞SACC-LM的侵袭行为的影响

目的:研究探讨阻断黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)表达对涎腺腺样囊性癌肺转移亚系细胞(salivary adenoid cystic carcinoma- Lung metastasis, SACC-LM)侵袭行为的影响及相关机制.方法:应用酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein处理体外培养的SACC-LM细胞,应用transwell小室观察Genistein对SACC-LM细胞侵袭的影响,并应用RT-PCR法检测FAK和细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)mRNA的表达.所得实验数据采用SPSS10.0统计软件t检验进行分组分析.结果:Genistein使SACC-LM细胞侵袭能力减弱;检测到随着Genistein抑制剂浓度的增高和作用时间的延长,FAK和ERK mRNA的表达水平均降低.结论:阻断FAK表达导致SACC-LM细胞侵袭能力减弱,原因可能是FAK和ERK表达水平的改变.

沉默VEGF基因对腺样囊性癌细胞侵袭的影响

目的：利用RNAi技术沉默腺样囊性癌细胞株ACC-2中VEGF的表达，探讨其对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法：利用RNAi技术沉默VEGF表达，用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力的变化。结果：与对照组比较，VEGF的siRNA能有效地抑制实验组ACC-2细胞的侵袭能力。结论：沉默VEGF减弱腺样囊性癌的侵袭能力。

涎腺腺样囊性癌中内皮细胞特异性分子-1、整合素β1的表达及临床意义

目的 探讨内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)和整合素β1在涎腺腺样囊性癌(SACC)中的表达及临床意义.方法 采用组织芯片(TMA)作为实验平台,运用免疫组织化学和原位分子杂交技术对52例SACC和11例"正常"涎腺组织中ESM-1、整合素β1的表达情况进行观察,并分析二者表达之间的相关性.结果 SACC组织中ESM-1表达较涎腺"正常"组织显著增强(P＜0.01);整合素β1表达较涎腺"正常"组织显著增强(P＜0.01),与肿瘤淋巴结转移和侵犯神经呈正相关(P＜0.05);SACC组织ESM-1和整合素β1 mRNA表达呈显著正相关(r=0.372,P＜0.01).结论 SACC组织中ESM-1和整合素β1的表达上调,二者可能相互协同,共同参与了SACC的发生和发展.

RhoA和Snail在涎腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的：探讨RhoA和Snail在涎腺腺样囊性癌（SACC）中的表达及其与癌症侵袭转移的关系。方法采用免疫组织化学方法检测RhoA和Snail在55例SACC（SACC组）与20例癌旁正常组织（对照组）中的表达情况，分析RhoA和Snail的表达与SACC临床病理特征的关系及其在SACC组织中表达的相关性。结果 SACC组的RhoA （69.1%vs 5.0%）和Snail（72.7%vs 10.0%）蛋白阳性表达率高于对照组（均P<0.05）；有淋巴结转移者的RhoA和Snail阳性表达率高于无转移者，Ⅲ+Ⅳ期的RhoA和Snail阳性表达率高于Ⅰ+Ⅱ期者；实体型的RhoA阳性表达率高于筛孔型，实体型和管状型的Snail阳性表达率高于筛孔型（均P<0.05），而不同性别、年龄及肿瘤部位的RhoA和Snail阳性表达率差异无统计学意义；RhoA和Snail在SACC中的表达呈正相关（rs=0.414，P<0.001）。结论 RhoA和Snail蛋白可能通过RhoA/ROCK/PKD1/NF-κB/Snail信号传导通路联合作用促进了SACC的浸润和转移。

榄香烯注射液联合手术治疗涎腺腺样囊性癌临床观察

目的 观察榄香烯注射液联合手术治疗涎腺腺样囊性癌的临床疗效.方法 30例涎腺腺样囊性癌患者随机分为观察组(n=15)与对照组(n=15),2组均采用手术治疗,对照组为单纯手术治疗,观察组术后采用榄香烯注射液300 mg静脉滴注,14 d为1个疗程.结果 观察组患者生活质量评价优于对照组(P<0.05),化疗后不良反应少于对照组(P<0.05).结论 榄香烯注射液联合手术治疗涎腺腺样囊性癌疗效优于单纯手术治疗.

嘌呤受体P2Y2在涎腺腺样囊性癌的表达及ATP对其细胞生长的抑制

目的 研究嘌呤受体P2Y2在涎腺腺样囊性癌非高转移细胞株(SACC-83)和高转移细胞株(SACC-LM)的表达,及其激动剂ATP对二者细胞生长的抑制作用.方法 采用免疫细胞化学法检测P2Y2受体在SACC-83和SACC-LM细胞株中的表达;采用MTT法检测不同浓度ATP(0.1mM/L、0.2mM/L、0.4mM/L、0.8mM/L和1.6mM/L)在不同作用时间点(24h、48h和72h)对SACC-83和SACC-LM细胞生长的抑制作用.结果 SACC-83和SACC-LM细胞中P2Y2均呈阳性表达,在细胞膜的染色较胞浆深,其表达在两细胞株中无明显差异.ATP对SACC-83和SACC-LM细胞的生长均有明显的抑制作用(P＜0.05),并且对SACC-LM细胞的抑制作用强于对SACC-83细胞的抑制作用,其抑制作用与药物浓度和作用时间呈正相关.结论 不同转移能力的涎腺腺样囊性癌细胞SACC-83和SACC-LM的胞膜和胞浆中均有嘌呤受体P2Y2表达,ATP对二者细胞生长有显著抑制作用.

VEGF和NOS在涎腺腺样囊性癌中的表达及与细胞增殖的关系

目的 研究涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid eystic carcinoma,SACC)组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、诱导型一氧化氯合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达与癌细胞增殖的相关性.方法 应用免疫组化方法检测32例SACC手术切除标本VEGF、iNOS、eNOS和增殖细胞核抗原(proliferating cell unclear angigen,PCNA)的分布及表达.结果 ①20例( 62.5％ )SACC组织表达VEGF,22例(68.75％)表达iNOS；25例(78.13％)表达eNOS；②VEGF与iNOS的表达具有明显相关性,VEGF与eNOS的表达无明显相关性；③表达VEGF的涎腺腺样囊性癌PCNA标记指数(PLI)明显高于不表达VEGF的SACC；表达iNOS的涎腺腺样囊性癌PLI明显高于不表达iNOS的SACC.表达eNOS的涎腺腺样囊性癌PLI与不表达eNOS的SACC无显著性差异(P＞0.05).结论 ①VEGF与iNOS的表达具有明显相关性,说明iNOS在VEGF的生成和发挥作用过程中起重要作用；②PLI随着VEGF和iNOS表达的增加而增加；说明二者对SACC细胞增殖具有促进作用.

PPARγ在人肺高、低转移涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达及意义

目的 检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系中的表达,并探讨PPARγ是否与涎腺腺样囊性癌(SACC)肺转移转移相关.方法 采用Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR)方法检测肺高转移性涎腺腺样囊性癌(SACC-LM)及肺低转移性涎腺腺样囊性癌(SACC-83)细胞系中PPARγ蛋白表达和PPARγmRNA的表达水平.所得实验数据采用SPSS 16.0统计软件进行t检验.结果 PPARγ蛋白及mRNA在SACC-LM细胞系及SACC-83细胞系中均有表达,与SACC-83细胞系相比,SACC-LM细胞系中PPARγ蛋-白较高表达,并且SACC-LM细胞系中PPARγmRNA表达水平是SACC-83细胞中表达水平的4.346939倍(P＜0.01).结论 PPARγ在SACC肺高低转移细胞系中的差异表达,初步证实PPARγ在SACC远处转移方面有重要作用.

Caspase在莱菔硫烷诱导人腺样囊性癌细胞系ACC-M凋亡中的作用

目的 体外研究Caspase-3,8,9在莱菔硫烷(Sulforaphane,SFN)诱导人腺样囊性癌细胞系ACC-M凋亡中的作用,探讨其可能的机制,为临床应用SFN治疗腺样囊性癌提供理论依据.方法 ACC-M细胞经40μmol/L SFN处理4,8,16,24h后,采用分光光度法分别检测Caspase-3,8,9的活性变化.ACC-M细胞采用50μmol/L的Caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理2h后,加入40μmol/LSFN,设阴性和阳性对照,流式细胞术检测细胞凋亡率情况.结果 SFN诱导涎腺腺样囊性癌ACC-M凋亡过程中,Caspase-3,8,9的活性均在4小时时即出现增高,并持续到24小时,且在16小时时活性高,各时间组与对照组相比均有统计学差异.50μmol/L Caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理细胞2小时,能显著抑制SFN诱导的ACC-M细胞凋亡.结论 SFN在诱导ACC-M细胞凋亡过程中,引起Caspase-3,8,9活性升高,Caspase在SFN诱导ACC-M细胞凋亡中起重要作用.

NCAM基因对人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83生长抑制作用的研究

目的 探讨NCAM基因对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83体外生长的抑制作用.方法 应用电穿孔转染方法将NCAMcDNA转入人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83中,经G418筛选2～3周,用兔抗人NCAM抗体进行免疫组化染色鉴定,然后绘制细胞生长曲线,进行软琼脂培养.结果 应用电穿孔方法可成功将NCAM基因转染入人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83中,免疫组化染色鉴定显示转染NCAM的SACC-83细胞有NCAM蛋白的表达.与对照组相比,经NCAM基因转染后的SACC-83细胞增殖明显受到抑制.转染了NCAM基因的SACC-83细胞克隆形成率明显降低.结论 NCAM基因对人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83的生长有一定的抑制作用.

三氧化二砷诱导涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人涎腺腺样囊性(SACC)细胞的作用机制,寻找治疗SACC的新途径.方法 应用As2O3对SACC细胞株作用,以 MTT、软琼脂集落形成和形态学分析法观察细胞的变化.结果 三氧化二砷作用后,癌细胞异形性逐渐消失,细胞凋亡现象明显,可见凋亡小体.结论 As2O3对SACC细胞株具有显著的抑制增殖、诱导分化和促进凋亡作用.

涎腺腺样囊性癌细胞转移潜能与细胞外基质的关系

目的了解不同转移能力的涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞与细胞外基质粘附、对细胞外基质侵袭及趋化运动的能力.方法 MTT法测定SACC-LM,SACC-83,ACC-M,AC C-2与纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附,用改良Boyden chamber方法观察了SAC C细胞对人工重组基底膜的侵袭以及趋化运动.结果高转移的SACC- LM与细胞外基质的粘附低于SACC-83,而ACC-M与细胞外基质的粘附高于ACC-2.SACC与纤维粘连蛋白的粘附高于和层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附.SACC-LM,ACC-M的侵袭和运动能力强于SACC-83,ACC-2.结论不同转移能力的SACC细胞与细胞外基质的粘附能力不同.高转移潜能的涎腺腺样囊性癌细胞的侵袭能力、趋化运动能力较强.

紫杉醇及β-榄香烯对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞毒作用的研究

目的研究紫杉醇及β-榄香烯联合应用对体外培养人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的细胞毒作用.方法应用药物敏感性MTT测定法、流式细胞术(FCM)和透射电子显微镜观察等方法,初步探讨紫杉醇与β-榄香烯(浓度比 1∶1)联合应用诱导SACC-83细胞凋亡及其与G1期阻滞关系.结果①应用MTT比色法,紫杉醇与β-榄香烯联合(浓度比 1∶1)作用SACC-83细胞24小时后,其抑制率呈现出明显协同效应,并具有浓度依赖性.②流式细胞仪分析,25ug/ml紫杉醇与25ug/mlβ-榄香烯协同作用SACC-83细胞24小时后诱导SACC-83细胞发生凋亡,并将细胞周期阻滞在G1期.③电镜观察,协同用药对SACC-83细胞作用24小时后,染色质沿皱缩的核膜下凝聚,具有典型的凋亡细胞特征.结论紫杉醇与β-榄香烯(浓度比 1∶1)对SACC-83细胞的抑制有协同作用,并诱导其产生凋亡,G1期阻滞能诱导SACC-83细胞凋亡.