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黄芪、当归对血管平滑肌细胞粘着斑激酶表达和细胞凋亡的影响
目的:探讨黄芪、当归对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)粘着斑激酶(FAK)表达和细胞凋亡的影响.方法:应用RT-PCR、Western blot检测黄芪、当归对FAK表达的影响;应用Greiss试剂检测VSMC培养液中NO-2含量;应用流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2和caspase-3表达活性.结果:黄芪、当归注射液可以显著抑制由碱性成纤维细胞生长因子所诱导的FAK表达,增加细胞培养液中的NO-2含量,诱导caspase-3表达,下调bcl-2表达,促进体外培养的VSMC凋亡.结论:黄芪、当归诱导VSMC凋亡与其促进NO合成、抑制FAK表达、诱导促凋亡基因caspase-3表达及下调抗凋亡基因bcl-2表达有关.
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粘着斑激酶反义寡核苷酸对平滑肌细胞粘附迁移和凋亡的影响
为研究粘着斑激酶反义寡核苷酸对平滑肌细胞粘附迁移和凋亡的调控作用,采用纤粘连蛋白(fibronectin,FN)诱导平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)粘附迁移并活化粘着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK),将FAK反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides, ODNs)经脂质体转染细胞,观察对FAK磷酸化、细胞粘附迁移以及凋亡的影响.结果表明,FN在有效地诱导SMCs粘附迁移并活化FAK的同时,凋亡细胞数显著低于对照,(8.96±1.2)%和(23.45±9.6)%.脂质体可有效地介导ODNs转染,转染效率为(86.7±4.5)%,FAK磷酸化表达量明显减少,不同浓度FN组5～60mg/L,细胞铺展率减少17.89%～27.67%,10、20、40和60mg/L FN组迁移细胞数也分别显著减少23.26%、21.63%、19.31%、17.88%,凋亡细胞数比对照高33.57%(P＜0.05),也显著高于FN组.据此可以认为FAK活化及其介导的信号转导通路是细胞外基质诱导SMC粘附迁移并抑制其凋亡的重要因素.反义FAK ODNs可有效地对此进行调控.
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川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓基质细胞血管内皮细胞生长因子表达的影响
为了探讨川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓基质细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响及其促进放射损伤小鼠骨髓微环境修复的机制和信号通路,采用Western blot法和流式细胞术对放射损伤小鼠骨髓基质细胞中VEGF表达水平,粘着斑激酶(FAK)和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性变化及骨髓基质细胞凋亡率和细胞周期改变进行分析,同时观察川芎嗪对其影响.实验结果表明,放射损伤后小鼠骨髓基质细胞VEGF表达明显低于正常水平,随时间推移而逐渐升高,但照射后第14天仍未恢复正常,而服川芎嗪组VEGF表达在第14天时已接近正常水平;骨髓基质细胞中磷酸化FAK和磷酸化MAPK表达亦有相同变化趋势.放射损伤后,骨髓基质细胞停滞于G0-G1期,S期减少,凋亡率明显增加.随时间推移,G0-G1期细胞比例呈由高到低的变化,凋亡率也逐渐降低,至14天仍未恢复正常.用川芎嗪治疗后,骨髓基质细胞S期合成活跃,凋亡率明显下降,第14天时恢复更明显,接近正常水平.结论:川芎嗪可通过促进骨髓基质细胞VEGF的表达加速照射后骨髓造血微环境恢复,其机制可能是通过VEGF诱导FAK和MAPK磷酸化途径实现的.
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高血压大鼠左心室肥大心肌细胞中FAKpTyr861的定位及表达
目的：探讨黏着斑激酶（ FAK）酪氨酸861磷酸化状态在高血压致左心室肥大发生发展中的作用。方法通过免疫荧光标记方法、共聚焦显微镜观察及蛋白质电泳和蛋白质印迹等方法，检测2、6、12、18月龄自发性高血压大白鼠（SHR）左心室中酪氨酸861磷酸化的FAK（FAKpTyr861）定位和表达的变化。结果蛋白印迹结果显示，在总蛋白匀浆和膜蛋白匀浆中，2月龄的SHR组和相同月龄的对照Wistar-Kyoto（ WKY）大鼠组相比较，FAKpTyr861的表达无显著差异；但FAKpTyr861在6、12、18月龄SHR 组左心室心肌细胞总蛋白匀浆和膜蛋白匀浆中的表达量较相同月龄的对照组明显减少（ P ﹤0.05）。免疫荧光标记显示，FAKpTyr861在6、12、18月龄SHR左心室心肌细胞中出现表达与定位变化，主要表现为心肌细胞闰盘处聚集的线状荧光较同月龄的WKY减弱。结论在高血压左心室心肌肥大的发生发展过程中，FAKpTyr861可能参与了心肌细胞信号转导通路的调控。
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低强度脉冲超声波对兔膝骨性关节炎软骨整合素-FAK-MAPKs信号通路蛋白表达的影响
目的:观察低强度脉冲超声波(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对兔膝骨性关节炎(osteoarthritis,OA)软骨中整合素-FAK-MAPKs力化学细胞信号转导通路相关蛋白表达的影响.方法:18只成年新两兰大白兔随机平均分成3组,分为正常对照组(normal control,NC),OA模型组(OA group,OA),OA模型照射组(O+L).OA组接受右侧后肢前交叉韧带切断(ACLT)处理术后4周接受LIPUS假辐射,O+L组同样手术处理,术后4周接受LIPUS辐射,NC组仅切开关节囊.LIPUS作用6周后,处死实验动物,取右后肢,采用HE染色行改良Mankin评分比较各组胫骨平台关节表面病理学改变.同时,采用Western blot技术检测Ⅱ型胶原,MMP-13,整合素β1的蛋白表达水平以及FAK 、MAPKs家族蛋白(p38、ERK1/2 、JNK)磷酸化水平.结果:①组织学观察及Mankin评分:LIPUS干预后,OA软骨表层轻微不平整,染色轻度缺失,可见软骨细胞增殖;Mankin评分,NC组:4.67±0.57;OA组:10.57±2.55;O+L组:7.66±1.74.与NC组相比,OA组、O+L组Mankin评分明显增高,但OA组增高更为明显(P＜0.05);与OA组相比,O+L组Mankin评分明显降低(P＜0.05).②Ⅱ型胶原、MMP-13含量:LIPUS干预后,Ⅱ型胶原含量较NC组升高,MMP-13含量有明显下降.③整合素β1-FAK-MAPKs信号通路相关蛋白表达:LIPUS干预使整合素β1、磷酸化FAK表达增高;同时MAPKs信号通路相关蛋白ERK1/2、p38磷酸化水平明显下降,而JNK磷酸化水平无明显变化.结论:LIPUS可以减轻骨性关节炎软骨ECM损伤程度,与LIPUS产生机械应力使关节软骨中细胞表面应力受体之一整合素β1及其下游分子黏着斑激酶FAK磷酸化表达增高,进一步下游的磷酸化p38,ERK1/2表达下调有关.LI-PUS的机械效应可经力化学转导途径作用于OA关节软骨,为治疗骨性关节炎提供一种新的思路.
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纤粘连蛋白介导的平滑肌细胞粘附迁移与粘着斑激酶的磷酸化
目的探讨纤粘连蛋白介导的血管平滑肌细胞粘附和迁移与粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的磷酸化的关系.方法不同浓度的纤粘连蛋白(fibronectin,FN)刺激培养的血管平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs),观察细胞粘附反应,统计铺展比率.免疫沉淀和Wstern blot分别检测FAK及FAK磷酸化的表达量.利用改良的Boyden Chamber测SMCs迁移.结果 FN有效地促进了SMC粘附,其铺展比率、迁移细胞数均显著高于对照(P<0.05),且随FN浓度递增而增加.其中20、40、60 μg/ml组分别为(75.6±6.5)%、(80.9±5.4)%和(82.4±7.9)%,无组间差异,但均高于5 μg/ml的(20.8±3.2)%和10 μg/ml组的(32.8±4.7)%,各组迁移细胞数也从16.8±3.6/HFP 200×增加到48.9±6.1/HFP 200×.不同浓度FN作用后均有FAK的表达,FN10 μg/ml即可致FAK磷酸化.表明FN介导SMCs粘附和迁移时伴有显著的FAK活化.结论 FN诱导平滑肌细胞粘附和迁移可能是通过FAK介导的,对其活性进行调控将有助于抑制血管损伤后内膜平滑肌细胞的迁移.
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粘着斑激酶在SACC-LM及SACC-83细胞中的活性及表达变化
目的:探讨粘着斑激酶(FAK)在涎腺腺样囊性癌细胞中的活性及表达变化.方法:同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测肺高转移性涎腺腺样囊性癌(SACC-LM)及涎腺腺样囊性癌(SACC)83细胞系中FAK mRNA和蛋白表达;同时测定FAK酶活力.所得实验数据采用SPSS12.0统计软件进行,t检验进行组间比较.结果:SACC-LM细胞中的FAK活性为(18.320±2.050)pmol·min-1·μg-1,SACC-83细胞中的FAK活性为(0.873±0.091)pmol·min-1·μg-1.与SACC -83细胞相比,SACC-LM细胞中FAK具有较高的活性(t=13.865,P＜0.01).FAKmRNA在SACC-LM细胞中的表达量为0.883±0.052,明显高于其在SACC-83细胞中的表达量(0.637±0.081,t=4.952,P<0.05).在SACC-LM细胞中FAK蛋白的表达高于在SACC-83细胞中的表达.结论:FAK蛋白活性变化及蛋白表达与SACC的侵袭有关.
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粘着斑激酶在PDGF-BB诱导MHCC-97H细胞黏附侵袭中的作用
目的 观察不同浓度血小板衍生生长因子(PDGF-BB)诱导MHCC-97H细胞中粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)mRNA的动态变化及FAK在细胞黏附、侵袭的作用.方法 不同浓度(1,2.5,5,10,25ng/ml)PDGF-BB诱导MHCC-97H人肝癌细胞,Real-time PCR方法检测FAK及MMP-2的mRNA动态变化,黏附实验、侵袭实验分别检测诱导后MHCC-97H细胞的黏附、侵袭能力的变化.结果 诱导后MHCC-97H细胞FAK mRNA水平上调,在10ng/ml浓度时达到高,为对照组的112.6倍;MMP-2mRNA水平上调并与FAK mRNA水平上调呈一致性,在10ng/ml浓度时达到高,为对照组的56.9倍.诱导后各组黏附率分别为(66±1.84)%、(69±1.41)%、(69±2.42)%、(71±1.37)%和(66±3.28)%,与对照组的(54±2.08)%比较均有统计学意义(P＜0.001);诱导后5ng/ml和10ng/ml组侵袭细胞数分别为(26.63±4.5)、(28.75±4.2)个,与对照组(21.5±4.0)个比较有显著性差异(P＜0.05,P%0.001).诱导后黏附率与侵袭细胞数变化在10ng/ml浓度时都达到高峰.结论 PDGF-BB上调MHCC-97H细胞中FAK表达,上调FAK促进MHCC-97H细胞的黏附和侵袭能力.
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粘着斑激酶在卵巢上皮性癌中的表达及意义
目的 研究粘着斑激酶(FAK)在上皮性卵巢癌中的表达情况,探讨FAK与卵巢癌的关系及其临床生物学意义.方法 采用免疫组化方法测定卵巢癌组织FAK的表达情况,分别用人工半定量分析和计算机图像分析判定结果,并与各项临床指标进行统计学分析.结果 人工半定量分析与计算机图像分析结果高度正相关.FAK在正常卵巢、良性、交界性及恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达水平依次增高(P＜0.05),高表达率分别为0、6.7%、40%、81.9%.手术病理期别高、远处转移、淋巴结转移、有腹水的患者癌组织FAK表达量高(P＜0.05);癌组织FAK高表达与生存期短相关(P=0.063＜0.1).结论 FAK可能与上皮性卵巢癌的发生侵袭、转移及不良预后相关.
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E-cadherin与粘着斑激酶在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨E-cadherin、粘着斑激酶在肝细胞癌中的表达及其临床病理意义.方法:应用免疫组化SP法检测42例肝细胞癌、13例正常肝细胞中E-cadherin、粘着斑激酶的表达.结果:1)E-cadherin在正常肝细胞、癌旁组织及肝癌组织中的阳性表达率分别为76.92%(10/13)、25.00%(24/32)、23.80%(10/42).肝癌组织与前二组阳性表达率比较差异有统计学意义(P=0.010,P=0.000).2)粘着斑激酶在正常肝细胞及癌旁组织中多数呈阴性表达,在肝癌细胞粘着斑激酶阳性表达率为71.42%(30/42),与前两组比较差异有统计学意义(P=0.000,P=0.001).3)高侵袭转移组与低侵袭转移组间,E-cadherin阳性率分别为27.27%(6/22)和60.00%(12/20),组间差异有统计学意义,(P=0.033);粘着斑激酶阳性率分别为59.09%(13/22)和25.00%(5/20),组间差异有统计学意义(P=0.020).结论:E-cadherin在肝癌细胞表达缺失、粘着斑激酶在肝癌细胞高表达与肝细胞癌的发生、侵袭和转移有关.
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非小细胞肺癌组织中FAK和pY397FAK的表达
目的:探讨粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)和磷酸化FAK(phosphoFAK,pY397FAK)在非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)和正常支气管黏膜上皮中的表达,及FAK在NSCLC发生、浸润和转移中的作用.方法:应用免疫组织化学方法检测FAK和pY397FAK在60例NSCLC和19例正常支气管黏膜上皮中的表达,并与临床病理指标和Ki-67表达进行联合分析.结果:FAK和pY397FAK在NSCLC中表达为83.3%(50/60)和55.0%(33/60),高于正常支气管黏膜上皮[57.9%(11/19)和21.1%(4/19)],差异有统计学意义,P=0.030、P=0.010.FAK和pY397FAK表达升高与TNM分期及淋巴结转移有关,在Ⅲ期和淋巴结转移组的阳性率高于Ⅰ+Ⅱ期和无淋巴结转移组,差异有统计学意义,P均＜0.05.FAK的强阳性表达率在低分化组中(73.1%,19/26)显著高于高-中分化组(47.1%,16/34),P=0.043.结论:FAK和pY397FAK过表达在NSCLC发生和进展中发挥重要作用.FAK和pY397FAK可能作为判断NSCLC生物学行为的指标和治疗的新靶点.
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粘着斑激酶在膀胱移行细胞癌中表达的意义
目的:探讨粘着斑激酶(FAK)在膀胱移行细胞癌(TCC)中的表达与肿瘤分化、浸润的关系,以及与p53、bcl-2、ki-67表达的关系.方法:采用免疫组织化学方法,测定FAK在81例膀胱TCC中的表达情况.结果:FAK在膀胱癌组织中的表达明显高于癌旁黏膜,浸润性膀胱癌明显高于非浸润性,p53或ki-67阳性膀胱癌明显高于阴性组.结论:FAK可能是一种肿瘤转化相关酶,又是一种肿瘤演变相关酶;它的表达量可作为膀胱癌发生发展过程中有价值的指标.肿瘤防治杂志,2001,8(4):372-374
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X射线对血管平滑肌细胞粘着斑激酶的影响
目的探讨X射线对血管平滑肌细胞抑制作用的信号传导机制.方法建立体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)模型,给予2～20Gy(分别为2、5、10、15、20Gy)单次X射线照射,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,在mRNA水平观察X射线对VSMC粘着斑激酶(FAK)的影响.结果 2～20Gy 单次X射线照射下调FAK mRNA表达.照射后48h,2、5、10、15、20Gy各照射组FAK mRNA表达均明显低于对照组,除20Gy与15Gy剂量组之间差异无显著性意义外,各组FAK mRNA表达差异均有极显著性意义(F=364.21,P<0.01).同一剂量15Gy照射后6、24、48、72h照射组FAK mRNA表达均低于同时间点对照组,差异有显著性意义(分别为t=4.07,P=0.01;t=7.48,P=0.02;t=9.10,P=0.00;t=12.93,P=0.00),照射后45min、12h两组FAK mRNA表达差异无显著性意义(分别为t=2.18,P=0.10;t=1.46,P=0.22).结论放射可能通过在转录水平下调FAK的基因表达,使VSMC增殖受到抑制,诱导VSMC凋亡.其下调作用呈剂量相关性和时间相关性.
关键词： X射线照射 血管平滑肌细胞 粘着斑激酶 逆转录-聚合酶链反应 -
粘着斑激酶和血管内皮生长因子在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义
目的：探讨粘着斑激酶(FAK)和血管内皮生长因子(VEGF)在唾液腺腺样囊性癌(SACC)中的表达及意义。方法采用SP免疫组织化学方法检测40例SACC、15例正常唾液腺组织中FAK、VEGF、CD34的表达情况。实验数据采用SPSS 19.0统计软件进行Mann-Whitney U检验、方差分析和Fisher＇s精确经验,FAK和VEGF表达进行相关分析。结果40例SACC组织中 FAK阳性表达率为87.5%(35/40),对照组为33.33%(5/15),Z=-4.44,P=0.001；VEGF阳性表达率为90%(36/40),对照组为26.67%(4/15),Z=-4.84,P=0.001；CD34阳性表达率为85%(34/40),对照组为40%(6/15),Z=-4.18,P=0.002,差异均有统计学意义；FAK和VEGF在SACC中的表达与肿瘤血管生成之间具有关联(FFAK=8.86、PFAK=0.01；FVEGF=8.18、PVEGF=0.01)；FAK和VEGF在SACC中的表达与肿瘤的临床分期以及远处转移有关联(P﹤0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤发生部位和大小、神经侵犯、病理分级、复发情况和淋巴结转移差异无统计学意义(P>0.05)；FAK和VEGF在SACC中的表达存在正相关性(r=0.479,P=0.002)。结论 FAK和VEGF与SACC的发展及侵袭、转移有关联。
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关键词：
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反义FAK寡核苷酸抑制FAK-ERK1/2介导的平滑肌细胞迁移和粘附
目的研究FAK-ERK1/2信号通路在平滑肌细胞迁移和粘附中的作用及FAK反义寡核苷酸对其的调控作用.方法通过纤粘连蛋白(fibronectin,FN)诱导平滑肌细胞迁移和粘附,以免疫沉淀和Western blot方法检测粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)和细胞外调控激酶1/2(extracellular regulation kinase,ERK1/2)及其磷酸化的表达量.将FAK反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ODNs)经脂质体转染细胞,观察转染后反义ODN对FAK和ERK磷酸化、细胞粘附和迁移的影响.结果 FN在有效诱导平滑肌细胞迁移和粘附时FAK和ERK1/2也呈明显表达,FN 20 蘥*mL-1可使磷酸化处于较高表达量.脂质体可有效地介导ODNs转染.转染后FAK及ERK1/2磷酸化表达量明显减少.结论由活化的FAK和ERK1/2介导的信号转导促进了细胞外基质诱导的SMCs迁移和增殖,反义FAK ODNs可有效地对此进行抑制.
关键词： 粘着斑激酶 细胞外调控激酶1/2 反义寡核苷酸 平滑肌细胞 -
乳腺癌组织中FAK与Her-2的表达及临床意义
目的 探讨粘着斑激酶(FAK)与人表皮生长因子受体2(Her-2)在乳腺癌中表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测110例乳腺癌石蜡标本中FAK和Her-2的表达,并与临床病理因素进行分析.结果 FAK、Her-2表达阳性者分别为61例(55.5%)和56例(50.9%),FAK的表达与Her-2的表达相关(P＜0.01);两者的表达与组织学分级和临床分期相关(P＜0.05).结论 FAK、Her-2都是乳腺癌独立的预后指标,两者高表达提示预后不良,联合检测对乳腺癌预后判断具有重要意义.
关键词： 乳腺肿瘤 粘着斑激酶 人表皮生长因子受体2 免疫组织化学 -
粘着斑激酶在胰腺癌中的表达及其意义
目的 探讨粘着斑激酶(FAK)在胰腺癌中的表达及临床意义.方法 收集遵义医学院第五附属(珠海)医院和中山大学附属第五医院病理科 2004～2011年有完整临床资料和病理资料的胰腺癌存档蜡块40例和15例癌旁正常组织,采用免疫组织化学SP法检测两组组织中FAK的表达水平.结果 FAK在胰腺癌中阳性表达率为72.50%,在癌旁组织中表达率为13.3%,胰腺癌组织与癌旁正常组织相比,差异有显著性 (P<0.05).FAK的表达与临床分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移相关(P<0.05).结论 FAK在胰腺癌的发生、发展、侵袭与转移中起重要作用,FAK的表达异常可以作为预测胰腺癌预后的指标.
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粘着斑激酶在唾液腺腺样囊性癌中的表达与临床意义
目的：探讨粘着斑激酶(FAK)在腺样囊性癌(ACC)中的表达，并探讨它在腺样囊性癌侵袭和转移等生物学行为中的机制。方法应用免疫组织化学方法检测FAK在40例唾液腺腺样囊性癌、30例多形性腺瘤和30例正常唾液腺组织中的表达。结果 FAK在ACC中高表达（75.%），在正常唾液腺组织(16.7%)、多形性腺瘤(40.0%)中低表达，差异有统计学意义（P＜0.05）；转移组高于非转移组。神经侵犯组高于非侵犯组（P＜0.05），而与年龄、性别差异无统计学意义（P>0.05）。结论 FAK可以作为判断ACC侵袭、转移及预后的重要参考指标。
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FAK的基因多态性与冠心病的关系
目的 探讨粘着斑激酶的基因多态性与冠心病的关系.方法 目前已知的FAK 两个cSNP 位点分别是C2564T 和G3104T,它们编码的蛋白质分别由Pro,Gly 转变成Ser,Cys.本研究采用基因多态性检测方法(PCR+RFLP)检测冠脉造影确诊的冠心病患者215 例(男109 例,女106 例)及与其年龄,性别及体重指数相匹配的健康体检者168 例(男86 例,女82 例)FAK 的一个cSNP 位点C2564T 的基因型,探讨FAK 的C2564T 基因型与冠心病的关系.结果 男性冠心病患者中FAK 的C2564T 基因型等位基因T 和C 与男性健康体检者中等位基因T 和C 比较差异有统计学意义(P < 0.05).女性冠心病患者与女性健康体检者两组比较亦差异有统计学意义(P < 0.05).结论 FAK 的C2564T 基因型可能与冠心病的发生有一定的关系.
