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姜黄素对人肝癌细胞Sk-hep-1抗癌作用的研究
目的:研究姜黄素对人肝癌细胞Sk-hep-1体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制.方法:应用MTT法、DAPI核染色法和细胞周期分析法,检测姜黄素对Sk-hep-1细胞生长和凋亡的影响,并通过RT-PCR方法检测姜黄素对Sk-hep-1细胞抗凋亡基因(Survivin和Bcl-xL)和耐药基因(DRG2和MDR1)mRNA表达的影响.结果:姜黄素抑制Sk-hep-1细胞增殖呈量效关系.姜黄素处理组肝癌细胞Sk-hep-1,HepG2和Hep3B细胞发生不同程度的凋亡,正常肝细胞Chang's liver无明显凋亡.姜黄素处理组Sk-hep-1细胞周期发生变化,G_0/G_1或G_2/M期细胞比例增多.姜黄素处理组Sk-hep-1细胞耐药基因MDR1 mRNA水平显著下降,而抗凋亡基因的表达无明显变化.结论:姜黄素能够抑制Sk-hep-1细胞增殖,并诱导其凋亡,推测可能是通过下调MDR1 mRNA的表达而起作用.
关键词： 姜黄素 肝癌细胞株Sk-hep-1 细胞凋亡 MDR1基因 -
小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药
目的研究小分子干扰RNA(siRNA)逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901/VCR mdr1介导的多药耐药效应. 方法根据mdrlcDNA已知序列,设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA(mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达,免疫组织化学检测P-gp的表达,流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性. 结果siRNA转染SGC7901/VCR细胞48 h后,mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降,细胞内阿霉素积累量增加,对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79.59%及59.98%. 结论siRNA可逆转SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药.
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小檗胺逆转MCF7/ADR细胞耐药性及其机制探讨
目的探讨钙调素拮抗剂小檗胺(BBM)逆转多药耐药的可能性及其机制. 方法乳腺癌细胞MCF7及其耐阿霉素(ADR)MCF7/ADR细胞与ADR及不同浓度BBM共培养,经四唑盐(MTT)比色法计算半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数和增敏倍数;流式细胞仪检测细胞内ADR相对含量和P糖蛋白(P-gp)表达水平;半定量RT-PCR检测mdr1基因mRNA表达. 结果 ADR对MCF7和MCF7/ADR的IC50分别为(0.98±0.06)μmol/L和(101.20±5.72)μmol/L;MCF7/ADR对ADR的耐药倍数为103.MCF7/ADR细胞5μmol/L、10μmol/L和20μmol/LBBM时对ADR呈剂量依赖性增敏作用,增敏倍数分别为2.76、5.88和28.26倍(均P值＜0.01).用10μmol/或20μmol/LBBM处理MCF7/ADR细胞2?h,细胞内的ADR相对含量增加2.49和2.81倍(P＜0.01);处理72h使P-gp表达分别下降10.09%和62.82%(均P值＜0.01),且mdr1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势. 结论 BBM提高耐药细胞MCF7/ADR胞内的ADR浓度,下调mdr1基因及P-gp的表达,使其对ADR的敏感性显著增高.
关键词： 小檗胺 阿霉素 MCF7/ADR细胞系 P糖蛋白 MDR1基因 -
CYP3A5基因和MDR1基因位点的单核苷酸多态性与CML细胞遗传学复发风险的关系分析
目的:分析CYP3A5基因和MDR1基因位点的单核苷酸多态性(SNP)与慢性髓系白血病(CML)细胞遗传学复发风险的关系.方法:收集本院收治的90例行伊马替尼治疗的CML患者的临床资料,根据有无复发进行分组,并分析CYP3A5基因和MDR1基因位点的SNP与CML细胞遗传学复发风险的关系.结果:无细胞遗传学复发者41例(无复发组),复发者49例(复发组),随访36个月.相比MDR1基因位点中的C3435T、C1236T的TT+CT基因型的患者,CC基因型的患者细胞遗传学复发的几率显著升高(P＜0.05).相比MDR1基因住点中的C3435T的CT+ CC基因型的患者,TT基因型的患者细胞遗传学复发的几率显著下降(P＜0.05).相比MDR1基因位点中的C1236T、C3435T的CT、CC基因型患者,TT基因型者无复发生存期明显延长(P＜0.05).相比无复发组,复发组中性粒细胞减少症(29.27％vs 71.43％)、血液毒性(39.02％ vs 61.22％)的发生率显著升高(P＜0.05).伊马替尼剂量(OR =2.95,95％ CI:1.37-7.76)与MDR1基因中的C3435T基因型(OR =0.09,95％ CI:0.05 ～0.72)是CML患者细胞遗传学复发的影响因素(均P＜0.05).结论:伊马替尼治疗剂量与MDR1基因中的C3435T、C1236T基因型对CML患者细胞遗传学复发造成一定的影响,其中MDR1基因中的C3435T基因型对评估患者细胞遗传学复发风险具有一定的预测价值,因此可作为一种临床潜在的生物标志物.
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mdr1及bcr-abl阳性白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI571耐药的逆转
为了探索bcr-abl和mdr1阳性的白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂ST1571是否有交叉耐药及其逆转方法,采用MTT法检测ST1571对K562-n/VCR细胞的抑制作用,采用多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA)、他莫西芬(TAM)、α-干扰素(IFN-α)单用及CsA与IFN-α联合应用研究对ST1571耐药的逆转作用.结果表明:K562-n/VCR细胞对STI571有交叉耐药性.CsA,IFN-a,TAM 3种逆转剂对其均有不同程度的逆转作用,逆转倍数分别为5.18倍、1.67倍及1.82倍.而半量CsA+IFN-α对K562-n/VCR细胞STI571的逆转倍数为34.87倍.结论:多药耐药基因mdrl的扩增可以导致bcr-abl阳性白血病细胞对STI571的耐药.多药耐药逆转剂CsA,TAM和IFN-α对STI571耐药有明显的逆转作用,CsA与IFN-α半量联合对K562-n/VCR细胞的杀伤作用显著超过全量CsA或IFN-α的逆转耐药作用.本研究结果提示对STI571发生耐药的患者加用CsA和IFN-a,可能会提高其疗效.
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酪氨酸激酶抑制剂逆转K562/A02细胞多药耐药的研究
本研究旨在比较酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(Imatinib)、尼洛替尼(Nilotinib)对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用.用RT-PCR法检测各组mdr-1 mRNA、bcr-abl mRNA表达;用Western blot法检测各组P-gp、P210蛋白表达;用流式细胞术检测各组细胞内柔红霉素(DNR)的蓄积.结果表明:0.0625 μmol/L伊马替尼、5 nmol/L尼洛替尼对K562/A02细胞无明显细胞毒性,伊马替尼和尼洛替尼上述剂量单独作用48小时均下调mdr-1 mRNA、bcr-abl mRNA、P-gp、P210蛋白的表达,且尼洛替尼较伊马替尼作用更强.荧光强度检测显示,K562/A02细胞经伊马替尼、尼洛替尼单独处理48小时后,其细胞内DNR浓度分别为K562细胞中的7.85%、12.02%.结论:酪氨酸激酶抑制剂具有很好的逆转细胞耐药作用,且尼洛替尼较伊马替尼逆转作用更强.
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卵巢癌基因表达与化疗疗效及预后相关性的研究
目的 探讨多药耐药基因(MDR1)、谷胱苷肽转移酶(GST-π)的表达与化疗疗效及预后的关系.方法 采用免疫组化生物素-酶标链霉亲和素(SP法)检测47例卵巢癌组织石蜡标本MDR1(P-gp)、GST-π的表达情况.结果 ①在生存率方面,MDR1(P-gp)、GST-π的阴性、阳性表达在患者3年生存率之间差异有显著性,P值＜0.05.②在临床分期生存率方面,MDR1(P-gp)、GST-π的阴性、阳性表达在III-IV患者的3年生存率之间差异有显著性.③在化疗疗效方面,MDR1(P-gp)、GST-π的阴性、阳性表达与患者化疗疗效之间差异有显著性.④MDR1(P-gp)、GST-π的阴性、阳性表达与初发患者复发率之间差异有显著性,P＜0.05.结论 ①MDR1(P-gp)、GST-π的阴性、阳性表达在患者3年的生存率之间差异有显著性,在 III-IV期患者的3年生存率之间差异也有显著性,MDR1(P-gp)、GST-π阳性表达的患者生存率降低.②MDR1(P-gp)、GST-π阴性、阳性表达与化疗有效率之间差异具有显著性,阳性表达的患者化疗疗效差.因此,MDR1(P-gp)、GST-π的阳性表达水平直接相关于铂类药物的治疗效果,并终决定了化疗疗效及预后.③MDR1(P-gp)、GST-π的阴性、阳性表达与初发患者复发率之间差异有显著性,阳性表达的患者复发率增加.④MDR1(P-gp)、GST-π的表达与化疗耐药及预后存在相关性,阳性表达的患者比阴性表达的患者预后差,应用铂类药物治疗效果不佳.
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靶向mdr1不同位点的siRNA对两种耐药细胞MDR的逆转效果
目的:探讨靶向mdr1 4个不同位点的siRNAs对胃癌耐药细胞SGC7901/VCR和人红白血病耐药细胞K562/A02的作用效果.方法:设计并体外转录合成4条靶向mdr1的siRNAs(mdr1si326、mdr1si1513、mdr1si2631及mdr1si3071), 分别转染SGC7901/VCR细胞和K562/A02细胞, 用RT-PCR和免疫组织化学检测mdr1 mRNA与P-gp的表达, 流式细胞仪检测细胞内阿霉素(ADR)的蓄积, MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性.结果:4条s iRNAs对人胃癌细胞SGC7901/VCR mdr1介导的MDR逆转效果由高到低依次为mdr1si326、mdr1si2631、mdr1si3071及mdr1si1513; 对人红白血病细胞K562/A02md r1介导的MDR逆转效果由高到低依次为mdr1si326、mdr1si2631、mdr1si3071及mdr1si1513.结论:4条siRNAs对SGC7901/VCR和K562/A02两种耐药细胞作用效果趋势相似.
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胃癌组织mdr1基因表达的临床意义
目的探讨多药耐药基因(mdr1基因)在人胃癌组织中的表达及其与临床病理的关系.方法应用RT-PCR法检测了29例手术切除人胃癌组织中的mdr1 mRNA. 术前未用过化疗.结果 mdr1 mRNA的阳性率为48.3%(14/29),mdr1 mRNA的表达在肿瘤浸润浆膜者为33.3%(7/21),明显低于未浸润浆膜者(7/8),基因的表达与年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移及TNM分期等无关.结论化疗前胃癌组织中mdr1基因即存在较高的表达率,这为选用化疗药物和MDR逆转剂提供了参考指标. mdr1 mRNA表达减少似与肿瘤进展相关.
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人原发性肝癌病人多药耐药基因表达及意义
目的 探讨原发性肝癌(PHC)癌组织及癌周组织mdr1表达与多药耐药性的关系。方法 采用敏感性高，特异性强的逆转录－聚合酶链反应(RT－PCR)技术，定量检测48例PHC病人癌组织及癌周组织中mdr1表达水平。其中18例病人术前行肝动脉化疗栓塞(TACE)治疗。结果 PHC癌组织中mdr1阳性率为63.3%，远高于癌周组织的26.7%(P<0.01)；术前行TACE组癌组织中mdr1阳性率为88.9%，远比未化疗组63.3%高。结论 PHC存在内源性MDR和获得性MDR，mdr1高表达是PHC病人MDR产生的重要机制之一。
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靶向MDR1基因的小分子干扰RNA治疗卵巢上皮性癌的动物体内研究
卵巢上皮性癌(卵巢癌)是妇科恶性肿瘤中病死率高的一种肿瘤,其5年生存率仅50%左右.化疗是治疗卵巢癌的一种重要方法,然而由于肿瘤细胞的耐药,化疗的有效性一直不理想.肿瘤细胞的多药耐药主要与多药耐药基因MDR1编码的P糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)过度表达有关.P-gp能够转运多种结构、功能不同的化学药物,是一种细胞内药物外排泵,从而降低细胞内药物浓度,使细胞产生耐药[1].
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MDR1基因短发卡样RNA表达载体逆转K562/A02人白血病细胞多药耐药的研究
目的 构建MDR1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对K562/A02人白血病细胞株MDR1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响.方法 以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B至K562/A02细胞株,通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法,检测MDR1基因表达及P-gp表达水平的变化;以MTT法检测阿霉素(ADM)对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50);高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内ADM含量.结果 构建的2种重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B均明显抑制K562/A02细胞株MDR1基因表达,抑制率高为48.2%±2.5%;同时抑制P-gp蛋白的表达,抑制率高为50.67%.对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为40.8%和62.4%;同时使K562/A02细胞内ADM含量增加.结论 shRNA表达载体可明显抑制K562/A02细胞MDR1 mRNA的转录和P-gp蛋白的表达,增加K562/A02细胞内ADM含量,恢复K562/A02细胞对化疗药物的敏感性,逆转MDR1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药.
关键词： MDR1基因 真核表达载体 K562/A02人白血病细胞株 P-糖蛋白 多药耐药 -
靶向人胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药基因1小分子干扰RNA的有效序列筛选
目的筛选靶向人胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药基因1(MDR1)小分子干扰RNA(siRNA)的有效序列.方法设计并体外转录靶向MDR1的4条siRNA(MDR1si326、MDR1si1513、MDR1si2631和MDR1si3071),转染SGC7901/VCR细胞.用RT-PCR检测MDR1 mRNA表达,免疫印迹检测P-糖蛋白(P-gp)表达,流式细胞仪检测细胞内阿霉素(ADR)蓄积,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对ADR的敏感性.结果4条siRNA均能不同程度逆转SGC7901/VCR细胞MDR1介导的多药耐药.转染后48 h,MDR1si326组和MDR1si2631组的mRNA表达水平分别为0.42±0.07和0.49±0.02,较MDR1si1513或MDR1si3071组明显下降(P＜0.05);MDR1si326组细胞内ADR蓄积显著,中位数为30.03,MDR1si2631组次之,MDR1si3071组较少,MDR1si1513组少(P＜0.05);MDR1si2631组对ADR耐药的相对逆转率高,为(98.12±0.26)%,MDR1si326组次之(P＜0.05),MDR1si1513组和MDR1si3071组的差别不大(P＞0.05).转染后72 h,MDR1si326组蛋白质表达水平下降明显.结论MDR1si326对人胃癌SGC7901/VCR细胞MDR1介导的耐药逆转效果好,MDR1si2631次之,MDR1si3071较差,MDR1si1513差.
关键词： 小分子干扰RNA MDR1基因 SGC7901/VCR细胞 多药耐药 -
基因mdr1高表达多药耐药肿瘤细胞对力达霉素的药物敏感性
目的 利用经药物诱导获得的mdr1基因高表达细胞株以及通过mdr1基因转染建立的稳定高表达细胞株,研究多药耐药肿瘤细胞对力达霉素(C-1027)的药物敏感性.方法 构建mdr1重组真核表达质粒pcDNA3.1/mdr1,利用脂质体转染技术,获得mdr1高表达HepG2肝癌细胞.经RT-PCR、细胞荧光免疫化学及罗丹明外排实验,鉴定了细胞的mdr1表达水平和药物外排活性.MTT方法 测定敏感细胞及相对应的多药耐药细胞对力达霉素等多种抗肿瘤药物的药物敏感性.结果 mdr1稳定转染细胞株HepG2/mdr1、多药耐药KBv200细胞和MCF-7/ADR细胞对力达霉素的IC50值分别为(0.020±0.011) nmol·L-1,(0.24±0.20) nmol·L-1和(0.028±0.011) nmol·L-1.相对于各自的敏感细胞,多药耐药细胞HepG2/mdr1,KBv200和MCF-7/ADR对力达霉素的抗药倍数分别是1.3,6.8和1.6倍,对阿霉素的抗药倍数分别是8.8, 37.2和181.3倍,对紫杉醇的抗药倍数分别是40.3, 336.8和49.2倍.结论 mdr1高表达的多药耐药肿瘤细胞对力达霉素仍高度敏感,未表现出抗药性.
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与 P－糖蛋白及 MDR1基因关联的药物转运研究现状
P－糖蛋白（P－gp）由MDR1基因编码，腺苷三磷酸依赖的药物外向转运蛋白，是介导药物吸收与转运动力学的关键转运体。不少药物通过核因子κB（ NF－κB）和孕烷X受体（ PXR）信号通路直接影响MDR1基因和P－gp的表达，导致P－gp的功能发生改变，从而影响药物的吸收转运。因此，本文对P－gp介导的药物转运相互作用、药物对P－gp和MDR1基因表达的影响，以及与P－gp／MDR1基因表达相关的NF－κB和PXR信号通路的研究概况进行收集与探讨，以期从基因和蛋白水平上，为研究药物吸收转运特征的变化提供一定依据。
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膀胱癌组织MDR1基因产物P-GP170表达的意义
为证实肿瘤多项耐药基因(MDR1)产物P-GP170与膀胱癌化疗失败及复发的关系,利用免疫组化方法对72例膀胱癌进行了研究.发现膀胱癌术后丝裂霉素膀胱灌注化疗失败者的P-GP170阳性率及强阳性率均明显高于初发膀胱癌,并且高分级肿瘤的P-GP170阳性及强阳性表达均高于低分级肿瘤.通过本实验可以认为膀胱癌化疗效果如何与膀胱癌组织中MDR1产物的量有关.
关键词： 膀胱癌 MDR1基因 P-GP170糖蛋白 免疫组化 膀胱腔内化疗 -
乳腺癌MDR1的研究进展
多药耐药性是乳腺癌化疗失败的一个重要原因.其中,MDR1基因产物P-糖蛋白(P-gp)的增多是引起多药耐药性的一个重要因素.P-gp可以利用ATP提供的能量将肿瘤细胞内的化疗药物泵出胞外,使胞内药物浓度不断下降,从而使药物的抗癌作用减弱甚至消失,肿瘤细胞出现耐药.据研究,许多机制参与调控乳腺癌MDR1基因及其产物P-gp的表达.
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卵巢癌基因表达与临床病理参数间的关系
目的:探讨MDR1(P-gp)、GST-的表达与临床病理参数的关系.方法:采用免疫组化SP法检测47例卵巢癌石蜡标本MDR1(P-gp)、GST-π的表达情况.结果:MDR1(P-gp)、GST-π阴性、阳性表达在卵巢癌组织学类型间差异没有显著意义.MDR1(P-gp)、GST-π的阴性、阳性表达在卵巢癌临床分期间差异具有显著性,P＜0.05.复发患者的肿瘤组织中MDR1(P-gp)、GST-π阳性表达水平明显高于初发组.MDR1(P-gp)、GST-π的阴性、阳性表达在淋巴结及远处转移间差异具有显著性.MDR1(P-gp)、GST-π的阴性、阳性表达在肿瘤大小间差异没有显著性.结论:MDR1(P-gp)、GST-π的表达与卵巢癌组织学类型、肿瘤大小无明显相关,但其阴性、阳性表达在肿瘤临床分期间,淋巴结及远处转移间差异具有显著性.复发患者肿瘤组织中MDR1(P-gp)、GST-π的阳性表达率明显高于初治组,提示卵巢癌对化疗药物特别是铂类药物可能有获得性耐药,与肿瘤组织在接受化疗后出现基因激活有关.
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卵巢癌组织中MDR1(P-gp)、GST-π基因的表达与化疗耐药及预后的研究
目的探讨MDR1、GST-π的表达与化疗耐药及预后的关系.方法采用免疫组化SP法检测47例卵巢癌组织中MDR1(P-gp)、GST-π的表达情况.结果①MDR1(P-gp)、GST-竹阳性表达的患者对化疗的有效率分别为34.5%和34.6%,而阴性患者对化疗的有效率则为77.8%和71.4%.两者比较差异有显著性.②复发患者的肿瘤组织中MDR1(P-gp)、GST-π阳性表达率明显高于初治组.③在预后方面,MDR1(P-pp)、GST-π表达阳性的患者比阴性的患者差.结论①MDR1(P-gp)、GST-竹阳性表达的患者化疗疗效差.②复发患者的肿瘤组织中MDR1(P-gp)、GST-π表达阳性率明显高于初治组,提示卵巢癌对化疗药物特别是铂类药物可能有获得性耐药,与肿瘤组织在接受化疗后出现基因激活有关.③MDR1(P-gp)、GST-π的阳阴性表达与化疗预后相关.
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苯对小鼠骨髓单个核细胞多药耐药基因1和P-糖蛋白表达的影响
目的 探讨苯染毒对C57BL/6小鼠骨髓单个核细胞多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)基因和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响.方法 实验动物随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组24只,分别以单纯玉米油及25、50、100 mg/kg剂量苯灌胃染毒C57BL/6小鼠,每日1次,每周5次,连续染毒4周,染毒12、26、29 d后分批处死小鼠,检测C57BL/6小鼠外周血常规,实时定量PCR检测骨髓单个核细胞MDR1基因表达,免疫印迹法检测骨髓单个核细胞的P-gp表达.结果 染毒12d,高剂量组红细胞、血红蛋白明显低于对照组、低剂量组、中剂量组,差异有统计学意义(P＜0.01、P＜0.05).染毒26 d,高剂量组白细胞明显低于对照组、低剂量组、中剂量组,差异有统计学意义(P＜0.01、P＜0.05).各时间点各染毒组的MDR1基因mRNA表达均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).染毒26 d,高剂量组P-gp表达低于对照组、低剂量组和中剂量组,中剂量组P-gp表达低于低剂量组,差异均有统计学意义(P＜0.01、P＜0.05)；染毒29 d,各染毒组P-gp表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 苯染毒干扰骨髓单个核细胞MDR1基因和P-gp表达,可能是苯血液毒性的机制之一.
