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低剂量雷公藤甲素抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性改善高剂量D-葡萄糖诱导的足细胞转分化
探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)改善高剂量D-葡萄糖(高糖)诱导的足细胞上皮-间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用和分子机制.将体外培养的小鼠永生化足细胞分为正常组(normal group,N)、高剂量D-葡萄糖组(high dose of D-glucose group,H-TP)、低剂量TP组(low dose of TP group,L-TP)、高剂量TP组(high dose of TP group,H-TP)以及甘露醇组(mannitol group,MNT),分别进行不同的干预:N组加入D-葡萄糖(D-glucose,DG,5 mmol·L-1);HG组加入HG(25mmol· L-1);L-TP组加入HG(25 mmol·L-1)+ TP(3 μg·L-1);H-TP组加入HG(25 mmol·L-1)+ TP(10 μg·L-1);MNT组加入DG(5 mmol·L-1)+ MNT(24.5 mmol·L-1).在干预后的各时间点(24,48,72 h),首先,观察TP对足细胞增殖活性的影响;其次,检测足细胞上皮细胞标志性分子(nephrin和podocin)、间充质细胞标志性分子(desmin和Ⅰ型胶原)以及EMT相关介质snail的蛋白表达水平;后,检测足细胞Wnt3α/β-eatenin信号通路关键信号分子Wnt3α和β-catenin蛋白表达水平.结果表明,HG不仅能引起足细胞nephrin和podocin蛋白低表达,desmin,Ⅰ型胶原和snail蛋白高表达,诱导足细胞EMT,而且,能促使足细胞Wnt3α和β-eatenin蛋白高表达,激活Wnt3α/β-catenin信号通路.此外,L-TP对足细胞增殖能力没有影响,与HG联合干预不仅能明显恢复足细胞nephrin和podocin蛋白表达水平,抑制其desmin,Ⅰ型胶原和snail蛋白表达水平,改善足细胞EMT,而且,能明显降低HG诱导的足细胞Wnt3α和β-catenin蛋白高表达,抑制Wnt3α/β-eatenin信号通路活性.总之,HG在体外能激活Wnt3α/β-catenin信号通路而诱导足细胞发生EMT;L-TP在体外能明显抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性而改善足细胞EMT,这可能是其干预足细胞EMT的作用和分子机制之一.
