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Speedy A基因文献资料
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可控性Speedy A基因表达转基因小鼠模型的建立鉴定和表型分析
目的 建立基于Tet-On系统诱导表达的Speedy A基因RNA干扰转基因小鼠模型,探讨Tet-On系统在研究精子发生相关基因中的应用,研究SpeedyA基因下调对精子发生的影响. 方法 体外实验筛选下调SpeedyA基因表达的有效干扰片段,Gateway技术构建包含有效干扰片段和四环素反应元件(TRE)的质粒(pRP.EX2d-TRE＞ shSpdya),受精卵显微注射该质粒建立转基因小鼠并筛选到纯合子,然后与四环素调控的反式激活子(rtTA)转基因小鼠杂交,筛选TRE和rtTA双阳性的小鼠为四环素诱导的SpeedyA-RNA干扰转基因小鼠模型,喂食强力霉素(Dox)诱导RNA干扰片段的表达下调SpeedyA基因的表达;实时荧光定量PCR法检测模型组小鼠与喂食强力霉素的正常小鼠(对照组)SpeedyA的表达差异;HE染色观察睾丸组织形态学变化,TUNEL法检测小鼠睾丸组织的细胞凋亡情况. 结果 模型组小鼠Speedy A基因的表达量与对照组小鼠的表达量相比下降26％;模型组小鼠睾丸组织发生异常的生精细胞凋亡. 结论 成功建立了基于Tet-On系统诱导表达的可控性SpeedyA-RNA干扰转基因小鼠模型,说明可以基于Tet-On系统在体研究精子发生相关基因的功能;SpeedyA基因表达下调可使生精细胞发生异常凋亡.
关键词： TET-ON系统 Speedy A基因 RNA干扰 精子发生
