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胃癌细胞中miR-135a表达对紫杉醇敏感性的影响
目的 研究胃癌细胞中miR-135a表达与紫杉醇敏感性的关系,并探索可能的作用机制.方法 运用Taqman microRNA芯片筛选接受紫杉醇化疗有效及无效胃癌患者血清中差异表达microRNAs,选择与紫杉醇敏感性关系较大的microRNA-135a(miR-135a)为研究对象,在体外培养的胃癌细胞中转染miR-135a mimic与miR-Ctrl,用细胞增殖曲线、流式细胞仪、Western blot等方法探索miR-135a表达对紫杉醇敏感性的影响及可能的作用机制.结果 miR-135a在紫杉醇化疗无效患者血清中的表达水平明显高于化疗有效患者(P＜0.05),可能与紫杉醇耐药有关.miR-135a通过抑制紫杉醇诱导的细胞周期G2期阻滞及细胞凋亡(P＜0.05)而降低胃癌细胞对紫杉醇的敏感性.结论 miR-135a有望成为临床胃癌紫杉醇化疗疗效的预测标志物.
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EGFR抗体修饰的长循环阳离子免疫脂质体转载miR-135a对胆囊癌细胞的抑制作用
目的 构建由表皮生长因子受体(EGFR)抗体修饰的长循环阳离子免疫脂质体(anti-EGFR-CILs),评估其理化性质及靶向性,探讨由其转载miR-135a对胆囊癌细胞的侵袭转移及凋亡等生物学行为的影响.方法 采用薄膜分散-超声水化法制备转载miR-135a的免疫脂质体,检测其形态、粒径分布、ζ-电位、包封率、载药率、转染率等.通过Transwell侵袭实验、Annexin V/PI双染色法实验评估miR-135a对胆囊癌细胞的侵袭、转移和凋亡的影响.多组吸光度值(A)比较采用单因素方差分析和LSD-t检验.结果 anti-EGFR-CILs具有良好的理化性质及靶向性,包封率和载药率分别为73.91％ 和1.43％,体外细胞转染率86.5％.Transwell实验显示,与anti-EGFR-CIL-pWPXL相比,anti-EGFR-CIL-miR-135a对胆囊癌细胞具有明显的抑制作用(LSD-t=37.62,P<0.05).细胞凋亡实验显示miR-135a促进胆囊癌细胞凋亡,细胞凋亡率约21％.结论 anti-EGFR-CILs是一种靶向性强、高效的基因载体.anti-EGFR-CIL-miR-135a可作为一种潜在的、可选择的胆囊癌治疗手段.
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ABCE1基因在非小细胞肺癌内相关调节miRNA的筛选
目的：筛选ATP结合盒E1（ABCE1）基因的相关调节miRNA，为诊治肺癌提供新思路。方法选取20例非小细胞肺癌患者，其中男性13例，女性7例；年龄45～73岁，平均年龄62.9岁。鳞癌11例，腺癌9例。应用生物信息学预测ABCE1基因上游的miRNA，通过实时定量聚合酶链反应（RT-Q-PCR）及免疫组织化学方法，对标本非小细胞癌组织和癌旁组织进行检测，并进行统计学分析，从中筛选出目的miRNA。结果生物信息软件预测7个有可能调节 ABCE1基因的miRNA，分别为miR-29a/b/c、miR-135a/b、miR-203及miR-141；其中miR-29a/b/c、miR-135a、miR-203的表达在癌组织内较癌旁组织都有不同程度的降低，以miR-135a、miR-29c差异为明显，与之对应ABCE1在相同的肺癌组织内表达上调（P<0.05）；仅miR-135a与ABCE1在上述肺癌患者内表达呈现负性相关（r=-0.665，P=0.001）。结论在非小细胞肺癌内，很有可能是miR-135a负性调节ABCE1基因，两者结合可能成为诊治肺癌的新靶点。
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miR-135a在调节小细胞肺癌多药耐药中的作用
目的:探讨miR-135a在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)多药耐药中的作用.方法:收集2008年1月至2013年12月本院肿瘤科及呼吸内科就诊的48例SCLC患者外周血液标本,将其分为化疗敏感组(28例)和耐药组(20例),采用QRT-PCR法检测患者血液标本、SCLC敏感细胞株H69及耐药细胞株H69AR中miR-135a的表达,分析其与临床预后的关系,并应用miR-135a模拟物和抑制剂分别上、下调细胞株中miR-135a的表达,采用CCK-8法检测细胞对各种化疗药物(ADM、DDP和VP-16)敏感性的影响.结果:与化疗敏感组相比,miR-135a在化疗耐药患者血液标本中的表达明显增高[(2.174 ±3.981)vs(-1.963±3.750),P＜0.001];在临床患者血液标本中,miR-135a的表达与患者的性别、年龄无关(P＞0.05),与疾病的分期、化疗敏感性及患者的生存时间相关(均P＜0.01).miR-135a在H69AR细胞中的表达明显高于H69细胞[(7.841 ±0.392)vs(1.047 ±0.081),P＜0.01];通过miR-135a抑制剂下调H69AR中miR-135a的表达能够显著增加细胞对化疗药物的敏感性,H69AR细胞对DDP、ADM及VP-16的IC50值明显下降[(247.09 ±11.55) vs (76.64±10.00)、(150.83 ±8.03) vs (40.72 ±5.06)、(436.63 ±61.19)vs(163.35 ±20.00);H69细胞转染miR-135a mimics后对化疗药物DDP、ADM和VP-16的IC50值明显增加[(18.58±1.37) vs (159.27±3.29)、(24.37±2.63) vs (129.19±2.64),(48.55±2.59) vs (359.87 ±2.92)μg/ml,P＜0.01].结论:miR-135a参与调节SCLC的多药耐药,下调miR-135a基因的表达可能增加细胞对化疗药物的敏感性.
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miR-135a靶向调节SP1对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨miR-135a通过靶向调节SP1对人骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖和凋亡的影响.方法 收集人正常成骨组织和OS组织,培养正常成骨细胞(hFOB1.19)和OS细胞(MG-63),Real-time PCR法检测miR-135a和SP1的表达,Western blot法检测SP1表达.转染miR-135a mimics和inhibitor,MTT法和BrdU-ELISA法检测OS细胞增殖变化,Western blot法检测凋亡蛋白Bax、BCL-2和Caspase 3的表达.双荧光素酶报告基因检测miR-135a与SP1的靶定关系.Western blot法检测miR-135a对OS细胞中SP1表达的影响.Western blot法检测miR-135a对OS细胞中JAK2/STAT3表达的影响.结果 OS组织和细胞中miR-135a表达均显著降低,SP1表达均显著升高.转染miR-135a mimics可降低OS细胞活性,减少BrdU阳性标记率.同时,miR-t35a mimics增加OS细胞Bax和Caspase 3的表达,减少BCL-2的表达.miR-135a mimics降低荧光素酶报告基因的荧光强度,结合位点突变后荧光素酶活性升高.上凋miR-135a显著降低SP1的表达并降低JAK2和STAT3的磷酸化水平.miR-135a inhibitor作用均与mimics相反.结论 miR-135a可通过靶向调节SP1抑制人OS细胞增殖,诱导OS细胞凋亡,并下调JAK2/STAT3活化.
关键词： 骨肿瘤 骨肉瘤 miR-135a Sp1 JAK2/STAT3 -
miR-135a在消化系统肿瘤中的研究进展
microRNAs(miRNAs)是由17～27个核苷酸组成的非编码小RNA,它通过信使RNA(messenger RNA,mRNA)降解目标RNA或抑制蛋白质的翻译来调节基因的表达,大多数microRNAs都参与肿瘤细胞的增殖、扩散、转移和凋亡,并在肿瘤的发生、发展过程中扮演着重要角色.消化系统肿瘤的发生率和死亡率呈上升趋势,对人们的身体健康存在着严重威胁.相关研究表明miR-135a在肿瘤的早期诊断和相关治疗中都起到重要作用,本文将对miR-135a在消化系统肿瘤中的研究进展作一概述.
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miR-135a与前列腺癌细胞增殖相关因子信号转导及转录激活因子6的相关性研究
目的 探讨miR-135a与前列腺癌细胞增殖相关因子信号转导及转录激活因子(STAT6)的相关性.方法 选取前列腺癌DU145细胞,随机分为miR-135a转染组和空白转染组,miR-135a转染组细胞转染miR-135a序列,空白转染组转染空白序列,采用M T T 法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,采用Transwell细胞迁移侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测 p-STAT6和STAT6蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-135a表达.结果 转染后48 h,miR-135a转染组miR-135a相对表达量为(0.932 ± 0.061),明显高于空白转染组(P<0.05);miR-135a转染组培养24、48 h的OD值分别为(0.210 ± 0.045)和(0.281 ± 0.052),明显低于空白转染组(P<0.05);miR-135a转染组G0/G1期细胞比例为(60.02 ± 6.39)%,明显高于空白转染组(P<0.05);miR-135a转染组迁移细胞数和侵袭细胞数分别为(116.93 ± 30.02)个和(133.02 ± 28.51)个,明显低于空白转染组(P<0.05);miR-135a转染组p-STAT6和S T A T 6蛋白相对表达量分别为(0.947 ± 0.114)和(0.437 ± 0.077),明显低于空白转染组(P<0.05).结论miR-135a可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,可能与其抑制前列腺癌细胞STAT6表达有关.
关键词： 前列腺癌 miR-135a 信号转导及转录激活因子6 转染 -
miR-224、miR-135a 在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理的关系
目的:检测miR-224与miR-135a两种microRNA (miRNA)在非小细胞肺癌中的表达,探讨其与肺癌临床病理的关系.方法:采用Real time RT-PCR法对31例非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织的miR-224与miR-135a进行定量分析,结果由2(-ΔΔCT)处理,并分析与临床病理资料的关系.结果:相对内参U6,miR-224在非小细胞肺癌组织中表达量为4.2761±0.8731,在正常肺组织中的表达量为0.8967±0.2154,两者相比P＜0.05,miR-135a在非小细胞肺癌组织中表达量为0.3551±0.0985,在正常肺组织中的表达量为1.7443±0.3125,两者相比P＜0.05.miR-224与miR-135a的表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分级密切相关.结论:miR-224高表达及miR-135a低表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分级密切相关,miR-224有可能作为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物.
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miR-135a及17-β雌二醇对着床期子宫内膜的作用及其和HOXA10甲基化状态关系
目的 探讨分析miR-135a及17-β雌二醇对着床期子宫内膜的作用及其和HOXA10甲基化状态关系.方法体外培养人子宫内膜细胞,根据本次实验目的加入miR-135a、1×10-6、1×10-7、×10-8 mol/L17-β雌二醇,培养48 h之后借助荧光定量RT-PCR及Western blot检测HOXA 10基因甲基化及mRNA蛋白表达,使用甲基化特异性聚合酶链反应完成对HOXA10基因CpG岛DNA甲基化现状态检测.结果经研究发现相较对照组,加入miR-135a、不同浓度17-β雌二醇后,会有效提升HOXA10基因内mRNA蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05).并且在17-β雌二醇产生作用后HOXA10的部分基因呈甲基化状态.结论发现miR-135a、17-β雌二醇能够针对人体内HOXA10的基因启动因子CpG岛DNA甲基化逆转,改变HOXA10基因表达.
关键词： miR-135a 17-β雌二醇 HOXA10甲基化状态
